Цитохимические исследования позволяют изучить ферментативную активность, содержание различных веществ в клетках крови, костного мозга, лимфатических узлов и других тканей.
Современные цитохимические методы исследования, применяемые в гематологии в комплексе с морфологической оценкой клеточных элементов, используют для изучения направленности дифференцировки кроветворных клеток. Основой их идентификации служат особенности метаболизма, специфичные для каждого типа клеток. Цитохимические методы исследования обладают рядом достоинств: просты в исполнении, воспроизводимы, не требуют сложной, дорогостоящей аппаратуры, информативны. Цитохимические реакции проводят в мазках периферической крови, пунктатах костного мозга, лейкоконцентрате венозной крови, спинномозговой жидкости, аспиратах лимфатических узлов, селезенки, лейкозных инфильтратов различной локализации. При цитохимических исследованиях следует учитывать, что качество препаратов и хорошая техника приготовления мазков имеют решающее значение.
Приготовление мазков
Мазки крови и костного мозга лучше делать непосредственно из материала, полученного без добавления антикоагулянтов.
Если это невозможно, готовят мазки из стабилизированной антикоагулянтами клеточной взвеси или лейкоконцентрата, полученного путем щадящего центрифугирования. При выраженной лейкопении цитохимические исследования целесообразно проводить в препаратах, полученных из лейкоконцентрата венозной крови.
После приготовления мазки следует быстро высушить на воздухе до исчезновения влажного блеска, что позволит избежать сморщивания и смывания их со стекла во время фиксации. Приготовленные мазки периферической крови и костного мозга рекомендуют хранить не более суток, так как активность большинства внутриклеточных ферментов снижается. Препараты фиксируют сразу после высушивания на воздухе.
Оценка результатов цитохимических реакций
В большинстве случаев достаточно определить характер цитохимической реакции (слабая, умеренная, интенсивная) с указанием процента положительно реагирующих клеток.
При оценке PAS-реакции характер распределения положительного материала (диффузный, диффузно-гранулярный, гранулярный) имеет большую диагностическую ценность, чем измерение его общего количества (например, при острых лейкозах).
В ряде случаев применяют полуколичественный метод с подсчетом условных единиц или вычислением среднего цитохимического коэффициента. Принцип его заключен в оценке интенсивности окраски и количества положительных гранул при анализе 100 клеток:
0 - отсутствие окраски цитоплазмы расценивается как отрицательная реакция (0);
+ - слабодиффузное окрашивание или единичные гранулы в цитоплазме;
++ - диффузная окраска цитоплазмы, умеренное количество гранул;
+++ - интенсивное окрашивание цитоплазмы, многочисленные гранулы, заполняющие всю клетку.
После оценки интенсивности окраски считают количество условных единиц или средний цитохимический коэффициент.
Подсчет условных единиц (уе) по методике Kaplow:
Уе = ЗхС + 2хВ + А.
Вычисление среднего цитохимического коэффициента:
Средний цитохимический коэффициент =(ЗхС + 2хВ + А)/ 100,
Где А - количество клеток со слабоположительной реакцией; В - количество клеток с умеренно положительной реакцией; С - количество клеток с резко выраженной реакцией.
При этом показатель активности реакции в условных единицах может колебаться от 0 до 300, а средний цитохимический коэффициент - от 0 до 3.
Миелопероксидаза
Миелопероксидаза преимущественно локализована в специфических азурофильных гранулах в цитоплазме гранулоцитов и служит маркером клеток миелоидного ряда. В клетках миелопероксидаза участвует в реакции разрушения токсичной перекиси водорода. В цитохимических реакциях активность фермента определяют по окислению хромогенов (бензидина, о-дианизидина и др.). Миелопероксидазу выявляют в клетках гранулоцитарного ряда, начиная с миелобласта. Активность фермента нарастает по мере созревания клеток. В сегментоядерных нейтрофилах здоровых людей выявляют высокую активность миелопероксидазы, содержащуюся в клетках в виде гранул, которые заполняют цитоплазму.
Самую высокую активность фермента наблюдают в зрелых эозинофилах. В базофильных промиелоцитах и миелоцитах активность миелопероксидазы, как правило, высокая, однако по мере дифференцировки их в зрелые клетки активность фермента снижается. Зрелые базофилы могут быть почти отрицательными по данному признаку. Слабоположительна реакция на миелопероксидазу в различном проценте моноцитов в виде немногочисленных рассеянных гранул. В эритрокариоцитах, лимфоцитах, базофилах и мегакариоцитах активность миелопероксидазы не определяется.
В крови здоровых людей 3-16% нейтрофилов окрашены резко положительно, 60-90% - положительно, остальные - слабоположительно. Средний цитохимический коэффициент нейтрофилов здоровых людей - 2,56±0,33.
Реакцию используют главным образом в целях диагностики острых лейкозов. При острых миелобластных лейкозах активность фермента в опухолевых клетках варьирует от умеренной до выраженной в зависимости от степени дифференцировки бластов. Так, при острых миелобластных лейкозах с низкой степенью дифференцировки (Mt по ФАБ-классификации) количество МПО-положительных бластов невелико (не превышает 10%), активность фермента в них невысокая. В то же время при остром промиелоцитарном лейкозе миелопероксидазу выявляют практически в 100% бластных клеток и активность ее равноценна таковой в зрелых нейтрофилах.
При острых монобластных лейкозах реакция на миелопероксидазу в опухолевых клетках слабая, при острых лимфобластных - отрицательная. Отсутствие точных количественных способов оценки цитохимических реакций не позволяет использовать их для верификации степени дифференцировки бластных клеток и, следовательно, для более тонкой дифференциальной диагностики острых лейкозов. Таким образом, та или иная цитохимическая реакция определяет линейную направленность, а не степень дифференцировки бластных клеток.
Липиды
В гемопоэтических клетках липиды рассеяны в виде тонкодисперсных образований, которые неразличимы в световом микроскопе без специальной окраски. Стабильные и хорошо воспроизводимые результаты для исследования гемопоэтических клеток получаются при применении метода с Суданом черным Б.
Липиды обнаруживают практически во всех лейкоцитах, за исключением лимфоцитов. Однако основная масса липидов связана с клетками гранулоцитарного ряда. Они входят в состав специфической зернистости нейтрофильных гранулоцитов, эозинофилов и накапливаются по мере созревания клеток. В миелобластах обычно присутствует скудное количество гранул, локализованных в перинуклеарной зоне, в промиелоцитах их становится несколько больше, в миелоцитах и метамиелоцитах содержание суданофильных гранул высокое. В зрелых нейтрофилах липиды заполняют всю цитоплазму.
На всех стадиях созревания эозинофилов обнаруживают липиды по периферии специфических гранул с неокрашенной или слабоокрашенной центральной зоной. Большинство незрелых базофилов дают положительную реакцию, по мере созревания клеток содержание липидов в них снижается. Реакция в зрелых базофилах вариабельна - от слабоположительной до отрицательной.
Нормальные величины: большинство нейтрофилов (69-80%) у здоровых людей окрашиваются интенсивно, 18-36% - среднеинтенсивно и 10% окрашены слабо.
PAS-реакция
Механизм PAS-реакции основан на окислении йодной кислотой гликолевых групп или их амино- или алкиламинопроизводных до альдегидов. Альдегидные группировки при взаимодействии с реактивом Шиффа образуют продукт красного цвета. Мукополисахариды (гликозаминогликаны) определяют во всех морфологически идентифицируемых клетках гранулоцитарного ряда. Концентрация PAS- положительного материала в клетках гранулоцитопоэза нарастает по мере созревания клеток. Диффузное окрашивание цитоплазмы обычно свойственно наиболее молодым клеткам гранулоцитарного ряда (миелобластам, промиелоцитам, миелоцитам). В зрелых нейтрофилах содержится много PAS-положительного вещества в виде мелких гранул, упакованных так плотно, что цитоплазматический фон плохо различим. В зрелых эозинофилах и базофилах PAS-положительный материал расположен следующим образом: специфические гранулы остаются неокрашенными и резко выделяются на фоне диффузного окрашивания цитоплазмы.
В моноцитах PAS-положительный материал чаще выявляют в виде мелкой пылевидной зернистости на фоне слабо-розового диффузного окрашивания.
В лимфоцитах концентрация мукополисахаридов меньше, чем в гранулоцитах. В норме 10-40% лимфоцитов периферической крови содержат PAS-положительный материал, расположенный в виде гранул вокруг ядра, в 1-2% клеток гранулы могут быть интенсивно окрашены и образуют крупные блоки. Нормальные величины: в 95-100% нейтрофилов PAS-реакция выявляется в диффузной форме, средний цистохимический коэффициент - 2,09-2,99, от 2 до 33% лимфоцитов содержат PAS- положительное вещество в гранулярной форме, средний цистохимический коэффициент - 0,02-0,52. Вместе с реакцией на миелопероксидазу и неспецифическую эстеразу PAS-реакция - один из основных цитохимических методов для дифференциальной диагностики острых лейкозов.
При диагностике острых миелобластных лейкозов бластные клетки могут быть либо PAS-отрицательными, либо обнаруживается слабодиффузное окрашивание цитоплазмы. Яркое диффузное окрашивание цитоплазмы наблюдают только при остром промиелоцитарном лейкозе.
В монобластах реакция может быть отрицательной, слабоположительной в диффузной или диффузно-гранулярной форме (когда продукт реакции выявляют в виде рассеянных мелких или средних гранул, расположенных по краю цитоплазмы, на диффузном фоне). В то же время при остром лимфобластном лейкозе бласты содержат гликоген в цитоплазме в виде средних и крупных гранул, расположенных венчиком вокруг ядра, иногда сливающихся в блоки. Количество клеток с таким характером PAS-реакции сильно варьирует при различных случаях острого лимфобластного лейкоза.
Неспецифические эстеразы
Неспецифические эстеразы - неоднородная группа лизосомальных ферментов, отличающихся по субстратной специфичности и действию активаторов и инги-биторов. На основании этого были разработаны различные методики выявления эстераз в качестве потенциальных маркеров основных популяций лимфоцитов. В гематологии наиболее часто определяют а-нафтилацетатэстеразу, хлорацетатэстеразу, кислую а-нафтилацетатэстеразу.
А-Нафтилацетатэстеразу обнаруживают во всех клетках миелоидного ряда, начиная с миелобласта. Она активна в эозинофилах вне всякой связи с их специфической зернистостью, в небольшом количестве лимфоцитов, эритрокариоцитах, мегакариоцитах и тромбоцитах. Самую интенсивную реакцию дают моноциты и макрофаги. Активность неспецифической эстеразы в клетках моноцитарного ряда легко ингибируется фторидом натрия, но не подавляется в гранулоцитах. Этот феномен позволяет отличить клетки системы мононуклеарных фагоцитов от клеток других ростков кроветворения, обладающих активностью неспецифической эстеразы. Активность нафтил-АБ-О-хлорацетатэстеразы выражена в клетках гранулоцитарного и отсутствует в клеточных элементах моноцитарного и лимфоцитарного рядов. Кислую а-нафтилацетатэстеразу рано выявляют в процессе дифференцировки Т-лимфоцитов, где она локализована в виде фокального пятна в цитоплазме.
Определение активности неспецифической эстеразы используют для идентифи-кации лейкозных моноцитарных предшественников. Эти клетки проявляют высокую активность неспецифической эстеразы с субстратами бутират, ацетат и AS-D- ацетат, эта активность в значительной степени ингибируется фторидом натрия. Реакции на нафтил-АБ-В-хлорацетатэстеразу по надежности выявления гранулоцитарной направленности дифференцировки сравнимы с пероксидазной реакцией. Реакция на а-нафтилацетатэстеразу наиболее достоверна для идентификации монобластного и моноцитарного типов лейкозов. При остром миеломонобластном лейкозе рекомендуют использовать двойное окрашивание с различными красителями на наличие хлорацетатэстеразы и а-нафтилацетатэстеразы.
Фосфатазы
Кислая и щелочная фосфатазы - ферменты, обладающие общим свойством - способностью освобождать фосфат из спиртовых и фенольных фосфомоноэфиров при соответственно кислом или щелочном pH среды. Цитохимическое выявление фосфатаз в световом микроскопе основано на образовании нерастворимого окрашенного осадка в местах, где происходит гидролиз субстрата. Наиболее распространенный метод определения активности фосфатаз - метод азосочетания, который включает использование субстратов, содержащих фосфат нафтола или производное нафтола. Различные методы отличаются деталями фиксации, выбором производных нафтола, но все они дают, по существу, одинаковые результаты с минимальными вариациями чувствительности и распределения гранулярной окраски в положительно реагирующих клетках.
Щелочная фосфатаза
Активность щелочной фосфатазы присуща только зрелым клеткам гранулоцитарного ряда, преимущественно нейтрофилам. Изредка в эозинофилах встречается фоновая окраска цитоплазмы, но не специфических гранул. Базофилы, лимфоциты, моноциты, эритроциты и тромбоциты не содержат щелочную фосфатазу как в норме, так и при патологических состояниях.
Показатели активности щелочной фосфатазы широко варьируют при различных состояниях. Определение активности щелочной фосфатазы применяют для дифференцировки хронического миелолейкоза от других миелопролиферативных заболеваний и реактивных изменений. Активность щелочной фосфатазы увеличивается при истинной полицитемии, идиопатическом миелофиброзе, бактериальных инфекциях и резко снижается при хроническом миелолейкозе.
Низкие показатели щелочной фосфатазы почти всегда обнаруживают при Ph-положительном хроническом миелолейкозе, а также при Ph-отрицательном ювенильном хроническом миелолейкозе. Лишь гемолитическая и железодефицитная анемии или некоторые вирусные заболевания показывают сравнительно низкий средний цистохимический коэффициент для щелочной фосфатазы. У больных с хроническим миелолейкозом в период ремиссии активность щелочной фосфатазы может быть в норме или даже повышенной.
Кислая фосфатаза
Кислая фосфатаза - лизосомальный фермент, обнаруживаемый в цитоплазме большинства ядросодержащих клеток крови. Наиболее высока активность кислой фосфатазы в плазматических клетках, мегакариоцитах, тромбоцитах, моноцитах и макрофагах, гранулоцитарных предшественниках. По мере созревания клеток нейтрофильного и эозинофильного ряда активность фермента снижается. Локализована кислая фосфатаза в основном в первичных гранулах и отсутствует во вторичных. Зрелые нейтрофилы и эозинофилы обладают либо низкой ферментативной активностью, либо лишены ее. В лимфоцитах активность кислой фосфатазы весьма вариабельна.
При Т-клеточном остром лимфобластном лейкозе, плазмоцитоме, волосато-клеточном лейкозе проявляется положительная окраска в плазматических клетках, Т-лимфоцитах и особенно бластных клетках. Снижение активности кислой фосфатазы в лимфоцитах отмечают при хроническом лимфобластном лейкозе и неходжкинских злокачественных лимфомах, увеличение - при инфекционном мононуклеозе. Продукт реакции выявляют в виде мелкой пылевидной зернистости либо фокального пятна в цитоплазме лимфоцитов. Определение активности кислой фосфатазы имеет значение в диагностике волосатоклеточного лейкоза, при котором в клетках выявляют тартратрезистентную кислую фосфатазу.
Окраска на сидеробласты
Сидеробласты и сидероциты - это нормобласты (эритробласты) и эритроциты, содержащие в цитоплазме негемоглобиновое железо в виде гранул, окрашиваемых в реакции с берлинской лазурью. Если гранулы свободного железа многочисленные, грубые и располагаются вокруг ядра, образуя кольцо, такие клетки называют кольцевидными сидеробластами. Содержание сидероцитов в периферической крови не превышает 1,1% (0,60- 0,04%), в костном мозге - 0,2-2,1% (0,09-0,90%). Содержание сидеробластов в костном мозге - 23,7±2,4%.
Соединений железа обычно не обнаруживают в лейкоцитах, тогда как выявление их в эритрокариоцитах информативно для подтверждения неэффективного эритропоэза и диагностики некоторых вариантов миелодиспатического синдрома. При миелодиспатическом синдроме железо, поступающее в эритробласты, не используется для синтеза гемоглобина и откладывается в эритрокариоцитах (сидеробластах), костномозговых макрофагах в виде гемосидерина или ферритина.
Исследование сидеробластов в костном мозге дает полезную информацию для оценки адекватности накопления железа в организме. Истощение запасов железа происходит при железодефицитной анемии и сопровождается снижением количества сидеробластов. Избыточное накопление наблюдают при идиопатическом и приобретенном гемохроматозе, хронической гемолитической анемии, талассемии и миелодиспатического синдрома, что приводит к увеличению количества сидеробластов. При диагностике такого варианта миелодиспатического синдрома, как рефрактерная анемия с кольцевидными сидеробластами, отличительным признаком является присутствие в костном мозге более 15% кольцевидных сидеробластов.
Значение цитохимических реакций в онкогематологии
Основное применение цитохимические методы находят в диагностике гемобластозов. Стандартной панели цитохимических методов (липиды, PAS- реакция, а-нафтилацетатэстераза) в большинстве случаев бывает достаточно для выявления линейной принадлежности опухолевых клеток.
Цитохимические реакции используют в целях:
установления варианта острого лейкоза и бластного криза хронического миелобластного лейкоза;
дифференциальной диагностики идиопатического миелофиброза (сублейкемического миелоза) и хронического миелобластного лейкоза;
диагностики волосатоклеточного лейкоза и лимфомы селезенки с отростчатыми лимфоцитами;
выявления особенностей метаболизма лейкозных клеток.
Цитохимическими маркерами бластов гранулоцитарного ряда служат миелодиспатический синдром, липиды и AS-D-хлорацетатэстераза. Содержание этих ферментов в миелобластах сильно варьирует. В некоторых случаях можно выявить один или два из пере-численных маркеров (чаще липиды). Именно поэтому во избежание ошибочного заключения при получении сомнительного результата необходимо проведение двух реакций. Активность AS-D-хлорацетатэстеразы существенно ниже, чем активность миелодиспатического синдрома. поэтому определение этого фермента представляет меньшую диагностическую ценность. Активность миелодиспатического синдрома у детей до 15 лет и пациентов старше 60 лет ниже, чем у людей среднего возраста. Для определения монобластов важно измерение неспецифической эстеразы, подавляемой фторидом натрия. Для лимфобластов характерны отрицательная реакция на миелодиспатический синдром и положительная PAS-реакция в гранулярной форме.
Цитохимические методы преследуют отождествление химических и ферментных веществ в клетках, используя для этого цветные реакции. Цитохимические препараты сохраняют клеточную структуру, что допускает выявление клеток и внутриклеточную локализацию исследувмого составного. Вот почему в гематологии отдается предпочтение не биохимическим, трудоемким, разрушающим клеточную структуру о относящимся к весьма разнородной клеточной популяции, а цитохимическим способам.
Цитохимия доказала, что среди морфологически одинаковых клеток имеются существенные химические и ферментативные различия.
Гликоген (реакция ШИК) (PAS) - метод Гочкисс - Мак Минус
Принцип ШИК-реакции . Полисахариды выявляются путем реакции, окисляющей спиртные группы, которые преобразуются в альдегидные группы, и отождествления последних путем цветной реакции реагентом Шифф.
Реагенты для ШИК-реакции : 1. Закрепляющий смесь спирт-формалин: 9 частей абсолютного этилового спирта +1 часть 40% формалина; сохранять при температуре +4°.
2. Периодння кислота, 1% водный раствор. Раствор бесцветный. Хранить в бутылке из коричневого стекла, в темноте, при лабораторной температуре. Пожелтевший раствор неприменим.
3. Реагент Шиффа. Развести 1 г основного фуксина в 200 мл дистилированной воды при температуре кипения. Болтать 5 минут, охладить до температуры 50°, профильтровать и добавить 20 мл нормальной соляной кислоты. Охладить до 25°, добавить 2 г метабисульфита натрия или калия, которые полностью обеспечивают раствор. Раствор должен простоять сутки в условиях темноты и холода (+4°). Затем добавить 2 г активированного угля, поболтать 1 мин. и профильтровать.
Полученный фильтрат прозрачный и бесцветный. Допускается слегка желтоватый оттенок; если раствор розовеет, становится неприменимым. Хранить при температуре +4° в герметически закрытой бутылке из коричневого стекла.
4. Зеленый светлый -1% водный раствор.
5. Диастаз: неразжиженная слюна человека или 0,1% раствора амилолитического-диастатического фермента в физиологическом солевом растворе.
Техника проведения ШИК-реакции
1) 10-тиминутное закрепление мазков смесью спирт-формалин; промывание дистилированной водой;
2) окисление 1% раствором периодной кислоты, 10 мин.; промывание дистилированной водой;
3) окраска реагентом Шиффа в накрытой посуде, в условиях темноты и холода, в течение 2 часов; промывание проточной водой;
4) контрастная окраска 1% зеленым-светлым в течение 1 минуты; промывание проточной водой.
Контрольный закрепленный мазок подвергается инкубации диастазом, 60 мин. в условиях комнатной температуры для выборочного удаления гликогена. После промывания дистилированной водой подвергается обработке по обычному методу.
Оценка результатов ШИК-реакции
Гликоген , окрашенным в багряно красный- цвет, представляется в виде зерен или рассеянный. Для контроля реакции используются зрелые гранулоциты мазка. Помимо гликогена ШИК положительную реакцию дают и другие вещества углеводной природы, такие как, муцин, мукопротеины, цереброзиды, фибрин. Дифференциация гликогена от этих составных осуществляется путем предварительной обработки диастазом, после чего гликоген более не окрашивается.
В гранулоцитах гликоген находится в рассеянном виде уже на стадии промиелоцита и начинает увеличиваться по мере созревания. В нормальных условиях лимфоциты отрицательны или в 20% из них могут находиться несколько мелких зерен гликогена. Моноциты отрицательные либо имеют тонкую зернистость.
Интенсивность окраски определяется полуколичественно. В реакция ШИК отражается в виде гликогенного показателя, или среднего показателя реакции (Астальди). Нормальный показатель гликогена колеблется в пределах от 0,10 до 0,30. Обычно лишь у патологических лимфоцитов наблюдается степень нагрузки более 3.
Значилось метода ШИК-реакции
:
а) При постановке дифференциального диагноза отдельных цитологических видов острой лейкемии:
- Миелобласты и промиелоуиты ШИК-отрицательные или приобретают слабую диффузную окраску. Тела Ауера дают положительную реакцию, которая ослабевает после переваривания со слюной.
- Лимфобласты при острой лейкемии и лимфосаркоме дают резкую ШИК-положительную реакцию в виде зерен или крупных блоков гликогена.
- Эритробласты при эритремии и острой эритролейкемии дают резко положительную рассеянную или зернистую реакцию, в противоположность нормальным эритробластам, которые ШИК-отрицательные;
- Моноцитоидные б ласты непостоянно слабо положительные, с тонкой зернистостью.
б) В целях постановки диагноза и наблюдения за эффективностью лечения при хронической лимфатической лейкемии: завышенный показатель гликогена указывает на тяжелую форму заболевания и тяжкий прогноз.
Рост гликогена
в патологических лимфоцитах не характерное для лейкемии явление, оно объясняется ростом метаболической активности при любом виде лимфоидной пролиферации.
в) Для дифференциации клеток Гоше от иных макрофагов с накоплением.
(син. ШИК-реакция)
гистохимический метод выявления гликогена, нейтральных глико- и мукопротеидов, сиаломукопротеидов и гликолипидов, основанный на окислении перйодной кислотой (или ее солями) 1,2-гликольных групп, содержащихся в этих соединениях, до альдегидов, которые выявляют с помощью реактива Шиффа.
Смотреть значение Pas-реа́кция в других словарях
Реакция
— - противодействие социальному прогрессу.
Политический словарь
Циркулярная Реакция
— - общий механизм, способствующий возникновению и развитию стихийных форм массового поведения (Д.В. Ольшанский, с.425)
Политический словарь
Реакция
— реакции, ж. (латин. reactio) (книжн.). 1. только ед. Политика, государственный политический режим, осуществляющий возврат и защиту старых порядков путем борьбы с революционным........
Толковый словарь Ушакова
Реакция
— быстрое падение цен после предшествующего
роста.
Экономический словарь
Реакция Предложения
— Повышение производительности в результате изменения стимулов; обсуждается в основном в связи с либерализацией рынка в результате структурного урегулирования, в первую........
Экономический словарь
Реакция, Падение Курсов На Бирже
— Падение котировок ценных бумаг, следующее за продолжительным периодом роста цен, возможно, в результате изъятия прибыли (profit taking) или неблагоприятных перемен. См. также correction.
Экономический словарь
Функция Реакция Сбыта
— -
прогноз вероятного
объема продаж в течение определенного отрезка времени при разных уровнях затрат на один или несколько элементов
комплекса
маркетинга.
Экономический словарь
Reaction (реакция)
— Изменение господствующей на рынке тенденции на противоположную в результате чрезмерных продаж на переживающем спад рынке (когда некоторые покупатели привлечены низкими........
Экономический словарь
Абелева-татаринова Реакция
— (Г. И. Абелев, род. в 1928 г., сов. иммунолог; Ю. С. Татаринов, род. в 1928 г., сов. биохимик) см. Альфа-фетопротеиновый тест.
Большой медицинский словарь
Адамкевича Реакция
— (A. Adamkiewicz, 1850-1921, австрийский патолог; син. Адамкевича-Гопкинса-Коля реакция) цветная качественная реакция на триптофан и триптофансодержащие белки, основанная на фиолетово-синем........
Большой медицинский словарь
Адамкевича-гопкинса-коля Реакция
— (A. Adamkiewicz, 1850-1921, австрийский патолог; G. Hopkins, 1861-1947, англ. биохимик; L. Cole, род. в 1903 г., франц. патолог) см. Адамкевича реакция.
Большой медицинский словарь
Адаптационная Реакция
— см. Приспособительная реакция.
Большой медицинский словарь
Аллергическая Реакция
— общее название клинических проявлений повышенной чувствительности организма к аллергену.
Большой медицинский словарь
Аллергическая Реакция Замедленного Типа
— (син. китергическая реакция) А. р., развивающаяся в течение 24-48 часов после воздействия специфического аллергена; в возникновении А. р. з. т. основная роль принадлежит........
Большой медицинский словарь
Аллергическая Реакция Немедленного Типа
— (син. химергическая реакция) А. р., развивающаяся через 15-20 мин. после воздействия специфического аллергена, напр. при анафилактическом шоке; в возникновении А. р. н. т.........
Большой медицинский словарь
Аллергическая Реакция Перекрестная
— А. р. на перекрестно-реагирующие (общие) антигены.
Большой медицинский словарь
Аллергоидная Реакция
— (нрк) см. Анафилактоидная реакция.
Большой медицинский словарь
Анамнестическая Реакция
— иммунный ответ организма на повторное введение антигена, характеризующийся значительно более высоким титром антител и более короткими сроками их появления по сравнению........
Большой медицинский словарь
Анафилактоидная Реакция
— (анафилаксия + греч. eidos вид; син.: аллергоидная реакция нрк, анафилатоксическая реакция, феномен парагипергии) - неспецифическая аллергическая реакция, характеризующаяся........
Большой медицинский словарь
Анафилатоксическая Реакция
— см. Анафилактоидная реакция.
Большой медицинский словарь
Антабусно-алкогольная Реакция
— (син. тетурам-алкогольная реакция) симптомокомплекс вегетативно-соматических (гиперемия кожи, сменяющаяся бледностью, тахикардия, одышка, резкое снижение артериального........
Большой медицинский словарь
Аристовского-фанкони Реакция
— (истор.; В. М. Аристовский, 1882-1950, сов. микробиолог и иммунолог; G. Fanconi, род. в 1892 г., швейц. педиатр) аллергическая внутрикожная проба со взвесью убитых стрептококков для........
Большой медицинский словарь
Агглютинации Реакция
— (РА) - способ выявления и количественного определения Аг и Ат, основанный на их способности к образованию видимых невооруженным глазом агломератов. В д-ке инфекц. болезней........
Словарь микробиологии
Агглютинации Реакция На Стекле
— - экспресс-методика постановки РА, в к-рой иммунную с-ку и корпускулярный Аг смешивают на поверхности чистого предметного или специального (с кольцами) стекла В связи........
Словарь микробиологии
Агглютинации Торможения Реакция
— торможение агглютинации Аг гомологичными Ат в результате предварительного контакта Ат с иссл Аг, обычно гаптенной природы Основана на конкуренции Аг за паратоп Ат Высокочувствительна
Словарь микробиологии
Агглютинации-лизиса Реакция
— см. Лептоспирозы.
Словарь микробиологии
Реакция
— (сленг.) - здесь: быстрое падение цен после предшествующего роста.
Юридический словарь
Антиглобулиновая Реакция
— см. Кумбса реакция.
Словарь микробиологии
Асколи Реакция
— реакция термоиммунопреципитации, применяемая для выявления сибиреязвенного Аг в трупах павших животных, некротической ткани карбункулов, кожевенном сырье и готовой........
Словарь микробиологии
Бактериолиза Реакция
— реакция взаимодействия цельных бактер. клеток, Ат к ним и комплемента, вследствие к-рой происходит лизис бактерий. Литическими св-вами обладают иммунные с-ки при спирохетозах,........
Словарь микробиологии
Цитохимические исследования занимают важное место в дифференциальной диагностике гемобластозов. Кроме большого теоретического значения, неоспорима их роль в уточнении различных форм лейкозов. Разработка эффективных методов дифференциальной диагностики и терапии острых лейкозов, особенно острого лимфобластного лейкоза детей, стала возможной только после введения в клиническую практику цитохимических методов диагностики.
Цитохимические исследования проводят в мазках крови, лейкоконцентрата, костного мозга. Они основаны на использовании специфических химических цветовых реакций для определения в клетках различных веществ. При цитохимическом исследовании пользуются полуколичественной оценкой результатов, используя принцип G. Astaldi (1957), основанный на выявлении специфической окраски различной степени интенсивности. В зависимости от нее исследуемые элементы делят на четыре группы: с отрицательной реакцией (-), слабоположительной (+), положительной (++) и резкоположительной (+++).
Для количественного выражения результатов подсчитывают 100 клеток определенного вида и дифференцируют их по указанному принципу, затем число клеток с одинаковой интенсивностью окраски умножают на соответствующее данной группе число плюсов, сумма этих произведений составляет условные единицы (ед.). Активность ферментов выражают в условных единицах или в виде среднего цитохимического коэффициента (СЦК). Средний цитохимический коэффициент вычисляют по формуле Кеплоу в модификации Астальди и Верга:
где цифры (1, 2, 3, 4) обозначают интенсивность окраски; буквы (а, б, в, г) - число подсчитанных клеток с определенной интенсивностью окраски (цитохимической реакции).
Метод полуколичественной оценки является ориентировочным, но позволяет сравнить распределение исследуемых веществ в различных клеточных элементах или в одних и тех же клетках при тех или иных патологических состояниях. Следует, однако, иметь в виду, что цитохимический метод может использоваться только в качестве дополнения к другим методам исследования - морфологическим, иммунологическим, цитогенетическим.
Гликоген
За счет гликогена в основном обеспечиваются энергетические потребности клеток. В частности, за счет реакций гликогенолиза образуется энергия, необходимая для осуществления функции фагоцитоза. Локализуется гликоген в цитоплазме клеток. Для цитохимического выявления гликогена чаще всего применяют PAS-реакцию, или ШИК-реакцию (по названию реактива - шифф-йодная кислота).
Положительную ШИК-реакцию могут также давать такие вещества, как гликозаминогликаны, мукополисахариды, гликопротеины, мукопротеи-ны и др. Гликоген можно легко дифференцировать от других веществ пробами со слюной или α-амилазой.
Проба со слюной . Препарат помещают в свежесобранной слюне в термостат при 37 °С на 30 мин, затем его окрашивают вышеописанной методикой. При инкубации препарата αамилаза, содержащаяся в слюне, расщепляет гликоген, и при реакции с реактивом Шиффа розовая окраска на гликоген не развивается".
Проба с α-амилазой . Препарат помещают в раствор α-амилазы (1 мл профильтрованной амилазы растворяют в 40 мл 0,85% раствора натрия хлорида) на 30 мин в термостат при 37 °С.
Нормальные величины . В мазках периферической крови и костного мозга гликоген содержится в цитоплазме нейтрофилов разной степени зрелости, но преимущественно в более зрелых (в виде обильной мелкой и диффузной зернистости). В цитоплазме мегакариоцитов и тромбоцитов гликоген определяется в виде одиночных крупных зерен. В крови здоровых людей количество интенсивно окрашенных нейтрофилов (+++) колеблется в пределах 2–12 % от общего числа нейтрофилов, средней интенсивности окраски (++) - в пределах 72–90%, слабо окрашенных (+) - от 4 до 18%. СЦК гликогена в нейтрофилах здоровых людей равен 1,71–2,04 (Кост Е. А., 1975), а по данным В. Б. Лецкого (1970) - 2,52. У лиц пожилого и старческого возраста отмечено достоверное снижение СЦК гликогена до 1,98 (Германов В. А., Сергеева Т. М., 1972).
В лимфоцитах здоровых людей гликоген содержится в виде небольшого числа гранул в 10–12% клеток. В мегакариоцитах гликоген обнаруживается в виде гранул (от единичных до 30–50), напоминая скопления кровяных пластинок. Число гликогенположительных мегакариоцитов составляет в среднем 60 % от общего числа мегакариоцитов.
Клиническое значение . Увеличение числа гликогенположительных лимфоцитов4 (до 70–80 %) характерно для лимфопролиферативных заболеваний, особенно для хронического лимфолейкоза (гликоген определяется в виде крупных гранул). Увеличение содержания гликогена в нейтрофилах наблюдается при различных воспалительных процессах, сахарном диабете, истинной полицитемии. Уменьшение отмечается при агранулоцитозах, лучевой болезни, при хроническом миелолейкозе - примерно в 2 раза по сравнению с нормой, особенно при прогрессировании заболевания (общее количество гликогена, определяемое биохимическими методами, может быть даже повышено из-за лейкоцитоза). При тромбоцитопенической пурпуре и симптоматических тромбоцитопениях число гликогенположительных форм мегакариоцитов значительно снижено (после спленэктомии оно восстанавливается до нормальных величин).
В лейкемических клетках при остром миелобластном лейкозе гликоген или не содержится вообще, или распределен диффузно либо в виде мелкой зернистости; при остром лимфобластном лейкозе - в виде крупных гранул, расположенных в цитоплазме вокруг ядра; при остром монобластном лейкозе бластные клетки содержат незначительное количество диффузно окрашиваемого гликогена; при остром эритромиелозе гликоген в виде гранул обнаруживается в эритробластах.
Липиды
Липиды локализуются в цитоплазме клеток, главным образом, в мембранах органелл и обнаруживаются преимущественно в нейтрофильных гранулоцитах. Играют важную роль в проницаемости мембран. Клетки костного мозга и периферической крови содержат простые липиды в виде нейтральных жиров, свободных жирных кислот, а также сложные липиды - фосфолипиды. Цитохимическое исследование основано на применении веществ, растворяющихся в жирах (судан III, судан IV, черный судан и др.). Для выявления нейтрального жира применяют судан III, окрашивающий жир в оранжевый цвет. Липоиды лучше выявляются Суданом черным (черное окрашивание). В гематологических исследованиях чаще применяется окраска мазков Суданом III.
См. методики окраски:
Нормальные величины . Липиды содержатся в цитоплазме нейтрофилов в виде обильной зернистости. Большинство нейтрофилов (69–80 %) у здоровых людей окрашивается интенсивно (+++), 18–36 % - дают окраску средней интенсивности (++) и 10 % - слабо окрашены (+). СЦК липидов в нейтрофилах здоровых людей равен 2,65. В меньших количествах липиды в норме обнаруживаются и в моноцитах. В миелобластах обнаружено небольшое количество липидов, в промиелоцитах их больше, и по мере созревания нейтрофилов содержание липидов увеличивается. В клетках лимфатического ряда липиды не выявляются.
Клиническое значение . Повышение СЦК липидов отмечено у лиц старческого возраста. Повышение содержания липидов в нейтрофилах наблюдается при остром миелобластном и монобластном лейкозах, при прогрессировании хронического миелолейкоза. При недифференцированном остром лейкозе бластные клетки содержат липиды в небольшом количестве (2–3 %). Уменьшение СЦК липидов отмечено при лечебном голодании. Снижение содержания липидов в нейтрофилах выявлено при ревматизме, воспалительных процессах. При остром лимфобластном лейкозе липиды в бластных клетках не выявлены.
Пероксидаза (миелопероксидаза)
В организме человека пероксидаза обнаружена в лейкоцитах, тромбоцитах, в молоке, а также в тканях, в которых происходит метаболизм эйкозано-идов. Простетической группой является протогем. В реакции, катализируемой пероксидазой, перекись водорода восстанавливается за счет соединений, выступающих в качестве доноров электронов, таких как аскорбат, хиноны или цитохром С. Реакция, катализируемая пероксидазой, имеет сложный характер и суммарно выглядит следующим образом:
Пероксидаза локализуется преимущественно в специфической зернистости цитоплазмы гранулоцитов, является маркером клеток миелоидной природы. Она отсутствует в лимфоидных клетках. Ввиду специфичности для нейтрофилов, начиная с ранних фаз созревания, фермент получил название миелопероксидаза. Активность пероксидазы подвержена большим колебаниям.
См. методики окраски:
Нормальные величины . В крови здоровых людей активность пероксидазы выявляется преимущественно в цитоплазме гранулоцитов, в меньшей степени и непостоянно - моноцитов. Фермент появляется в клетках на стадиях промиелоцита и более зрелых миелобластов. Лимфобласты не содержат пероксидазу. 3–16% нейтрофилов окрашены резко положительно (+++), 60–90 % - положительно (++), остальные - слабоположительно (+) (Кост Е. А., 1975). СЦК пероксидазы в нейтрофилах здоровых людей равен 2,5 (Лецкий В. Б., 1970). Эозинофилы характеризуются резко положительной реакцией на пероксидазу.
Клиническое значение . В бластных клетках высока активность фермента при остром миелобластном лейкозе. У больных с хроническим миелолейкозом, особенно в терминальной стадии, СЦК снижается до 1,6; слабая активность фермента наблюдается при остром монобластном лейкозе и отсутствует при остром лимфобластном лейкозе. Определение активности миелопероксидазы как маркера миелоидного ряда используется для дифференциальной диагностики острых миелобластных и лимфобластных лейкозов. Снижение активности фермента отмечено при инфаркте миокарда, ревматизме, туберкулезе, опухолях.
Щелочная фосфатаза
Активность щелочной фосфатазы выявляется впервые на стадии метамиелоцита, повышается по мере дифференцировки до сегментоядерного нейтрофила, а затем по мере старения клетки вновь снижается. Активность фермента определяется в специфических гранулах цитоплазмы. Щелочная фосфатаза относится к группе гидролитических ферментов, расщепляет различные фосфорные эфиры в щелочной среде (оптимум pH 9,6), осуществляет гидролиз однозамегценных эфиров ортофосфата. Наиболее распространено определение активности фермента методами азосочетания.
См. методики окраски:
Нормальные величины . У здоровых людей большинство сегментоядерных нейтрофилов являются фосфатазоотрицательными, и только в 20–30 % клеток (Кост Е. А., 1975) (20–40% - по данным Л. В. Козловской и М. А. Мартыновой, 1975) выявлена слабая активность фермента (+). По данным М. Г. Шубина (1980), активность щелочной фосфатазы для здоровых лиц обоего пола составляет 26 ед., т. е. СЦК равен 0,26. Отмечена более высокая активность фермента у женщин по сравнению с мужчинами (соответственно 31,0±0,8 и 21,0±0,7 ед.).
Клиническое значение . Повышение активности фермента в цитоплазме нейтрофилов отмечается при истинной полицитемии, хроническом миелофиброзе, апластических анемиях. Увеличение активности щелочной фосфатазы в цитоплазме нейтрофилов при острых нелимфобластных лейкозах - благоприятный признак, поскольку у таких больных более вероятны ремиссии. Увеличение активности фермента выявлено у детей первого полугодия жизни- 150–159 ед. Активность фермента увеличивается при беременности, при многих воспалительных процессах, хронических заболеваниях печени, инфекциях, злокачественных новообразованиях, диабетическом кетоацидозе, приеме пероральных контрацептивов, болезни Дауна, инфаркте миокарда и др. Резкое снижение активности щелочной фосфатазы (до полного отсутствия) наблюдается при хроническом миелолейкозе, что может служить важным дополнением дифференциальной диагностики хронического миелолейкоза и хронического миелофиброза, а также лейкемоидных реакций по миелоидному типу. Снижение активности фермента наблюдается при вирусных заболеваниях, в том числе инфекционном гепатите, при лучевой болезни, серповидно-клеточной анемии, болезнях соединительной ткани.
Кислая фосфатаза
Активность кислой фосфатазы обнаруживается преимущественно в нейтрофилах и лимфоцитах крови (максимально в нейтрофильных миелоцитах); локализацию связывают с лизосомами цитоплазмы клеток. Кислая фосфатаза является гидролитическим ферментом (оптимум действия при pH 5,2). Для цитохимического исследования обычно используют методы азосочетания. Нафтолфосфаты под воздействием кислой фосфатазы расщепляются с образованием свободного нафтола, который вступает в реакцию с солью диазония. В результате в местах определяемой активности фермента выпадает осадок азокрасителя красного цвета на зеленом фоне.
См. методики окраски:
- Методика азосочетания Берстона в модификации Ю. Ф. Руденса и И. М. Буйкиса
Нормальные величины . В клетках крови активность фермента обнаруживается в 12% зрелых гранулоцитов и в лимфоцитах. В нейтрофилах периферической крови здоровых людей активность фермента колеблется в пределах 11–72 ед., т. е. СЦК равен 0,386; в лимфоцитах- 25,0–28,8 ед., т. е. СЦК равен 0,286. У детей активность кислой фосфатазы в нейтрофилах выше, чем у взрослых.
Клиническое значение . Активность кислой фосфатазы повышается при острых лейкозах - монобластном и миелобластном, особенно при остром промиелоцитарном лейкозе (в диффузной форме), при острых лимфобластных лейкозах (в гранулярной форме). Повышение активности фермента наблюдается в нейтрофилах при воспалительных процессах (острая пневмония), туберкулезе, инфаркте миокарда, острых хирургических инфекциях, злокачественных опухолях. Повышение активности фермента в лимфоцитах отмечается при хронических тонзиллитах, при различных аллергических заболеваниях, после иммунизации.
Неспецифические эстеразы
Неспецифические эстеразы - это группа ферментов (гидролаз) с невысокой специфичностью, расщепляющих эфиры карбоновых кислот с короткой углеродной цепью. Локализуются в цитоплазме клеток, главным образом, в лизо-сомах. Активность этих ферментов в той или иной степени выявляется во всех видах лейкоцитов (максимально в незрелых гранулоцитах и моноцитах). Наибольшая активность обнаружена в моноцитах крови. Для определения активности ферментов используют различные субстраты (α-нафтилацетат, нафтол-AS-ацетат, нафтол-AS-D-хлорацетат и др.). Под влиянием неспецифических эстераз из субстрата освобождается свободный нафтол, который дает цветное окрашивание с солями диазония.
- Нафтол-AS-D-хлорацетатэстераза. Методика Молони и др. (М. С. Moloney et. al)
Дегидрогеназы
Дегидрогеназы - ферменты, катализирующие окислительно-восстановительные реакции с участием двух субстратов. Ряд из них принимает непосредственное участие в процессах биологического окисления, осуществляя перенос протонов с субстрата, подвергающегося окислению, на другой субстрат. Дегидрогеназы, катализирующие такое восстановление, специфичны как к донору водорода, так и к его акцептору. Дегидрогеназы присутствуют в самых различных клетках и тканях. Они локализуются в цитоплазме и митохондриях, могут быть выявлены цитохимически при экспозиции клеток с соответствующим субстратом, на который дегидрогеназы действуют в присутствии тетразолиевых соединений, способных акцептировать протоны, с образованием нерастворимых окрашенных соединений.
- Сукцинатдегидрогеназа. Методика Нахласа в модификации Кваглино и Хейхо
- Сукцинатдегидрогеназа. Методика Нахласа в модификации Р. Н. Нарциссова
- α-Глицерофосфатдегидрогеназа (α-ГФДГ). Методика Нахласа в модификации Р. П. Нарциссова
Нормальные величины . У здоровых людей СДГ и α-ГФДГ выявляются в виде гранул синего цвета в нейтрофилах, лимфоцитах, тромбоцитах периферической крови и миелобластах, гранулоцитах, мегакариоцитах, эритро- и нормобластах костного мозга.
СЦК СДГ лимфоцитов составляет 1,10±0,05; α-ГФДГ - 0,80±0,08. У детей активность СДГ выявляется в 46 % лимфоцитов. У взрослых в пунктате костного мозга 88 % недифференцированных клеток имеют активность фермента (+), все ядросодержащие клетки эритроидного ряда и гранулоциты проявляют активность на (+) или (++).
Клиническое значение . Повышение активности СДГ и α-ГФДГ в гранулоцитах обнаружено у больных со злокачественными опухолями. Снижение активности выявляется в лимфоцитах в период приступа бронхиальной астмы, при хроническом лимфолейкозе, в гранулоцитах - при хроническом миелолейкозе.