Општи физичко-хемиски методи за анализа на лекови. Општи методи на анализа

Тие вклучуваат: определување на температурите на топење и зацврстување, како и температурни граници на дестилација; определување на густина, индекс на рефракција (рефрактометрија), оптичка ротација (полариметрија); спектрофотометрија - ултравиолетова, инфрацрвена; фотоколориметрија, спектрометрија на емисија и атомска апсорпција, флуориметрија, спектроскопија на нуклеарна магнетна резонанца, масена спектрометрија; хроматографија - адсорпција, дистрибуција, јонска размена, гас, течност со високи перформанси; електрофореза (фронтална, зонална, капиларна); електрометриски методи (потенциометриско определување на pH, потенциометриска титрација, амперометриска титрација, волтаметрија).

Дополнително, можно е да се користат методи алтернативни на фармакопејските, кои понекогаш имаат понапредни аналитички карактеристики (брзина, точност на анализа, автоматизација). Во некои случаи, фармацевтската компанија купува уред чија употреба се заснова на метод што сè уште не е вклучен во Фармакопеја (на пример, методот на спектроскопија Романов - оптички дихроизам). Понекогаш се препорачува да се замени хроматографската техника со спектрофотометриска при одредување на автентичноста или тестирање за чистота. Фармакопејскиот метод за одредување на нечистотии на тешки метали со таложење во форма на сулфиди или тиоацетамиди има голем број на недостатоци. За да се утврдат нечистотиите на тешките метали, многу производители воведуваат методи за физичка и хемиска анализа, како што се спектрометрија на атомска апсорпција и спектрометрија на атомска емисија на индуктивно поврзана плазма.

Во некои приватни написи на Државниот фонд X, се препорачува да се одреди температурата на зацврстување или точката на вриење (според Државниот фонд XI - „температурни граници на дестилација“) за голем број течни лекови. Точката на вриење мора да биде во опсегот даден во приватната статија. Поширок интервал укажува на присуство на нечистотии.

Многу приватни написи на Државниот фонд X обезбедуваат прифатливи вредности на густина, а поретко вискозност, потврдувајќи ја автентичноста и добриот квалитет на лекот.

Речиси сите приватни написи на Државниот фонд X стандардизираат таков индикатор за квалитетот на лекот како растворливост во различни растворувачи. Присуството на нечистотии во лекот може да влијае на неговата растворливост, намалувајќи ја или зголемувајќи ја во зависност од природата на нечистотијата.

Физички методи на анализа

Се потврдува автентичноста на лековитата супстанција; состојба на агрегација (цврста, течна, гасна); боја, мирис; кристална форма или тип на аморфна супстанција; хигроскопност или степен на атмосферски влијанија во воздухот; отпорност на светлина, воздушен кислород; испарливост, подвижност, запаливост (на течности). Бојата на лековитата супстанција е едно од карактеристичните својства што овозможува нејзина прелиминарна идентификација.

Степенот на белина (сенка) на цврстите лековити материи може да се процени со различни инструментални методи врз основа на спектралните карактеристики на светлината што се рефлектира од примерокот. За да го направите ова, рефлексијата се мери кога примерокот е осветлен со бела светлина. Рефлексија е односот на количината на рефлектираниот светлосен флукс до количината на упадниот светлосен флукс. Ви овозможува да го одредите присуството или отсуството на нијанса на боја во лековитите супстанции според степенот на белина и степенот на осветленост. За бели или бели супстанции со сивкава нијанса, степенот на белина е теоретски еднаков на 1. Супстанции за кои е 0,95-1,00 и степенот на осветленост< 0,85, имеют сероватый оттенок.

Пообјективно е да се утврдат различни физички константи: точка на топење (распаѓање), точка на вриење, густина, вискозност. Важен показател за автентичноста е растворливоста на лекот во вода, раствори на киселини, алкалии, органски растворувачи (етер, хлороформ, ацетон, бензен, етил и метил алкохол, масла итн.).

Константата што ја карактеризира хомогеноста на цврстите материи е точката на топење. Се користи во фармацевтската анализа за да се утврди идентитетот и чистотата на повеќето цврсти лековити супстанции. Познато е дека е температурата на која цврстото тело е во рамнотежа со течната фаза под фаза на заситена пареа. Точката на топење е константна вредност за поединечна супстанција. Присуството на дури и мала количина на нечистотии ја менува (по правило, ја намалува) точката на топење на супстанцијата, што овозможува да се процени степенот на нејзината чистота. Температурата на топење се однесува на температурниот опсег на кој се случува процесот на топење на испитуваниот лек од појавата на првите капки течност до целосната транзиција на супстанцијата во течна состојба. Некои органски соединенија се распаѓаат кога се загреваат. Овој процес се случува на температура на распаѓање и зависи од голем број фактори, особено од стапката на загревање. Дадените температурни интервали на топење покажуваат дека интервалот помеѓу почетокот и крајот на топењето на медицинската супстанција не треба да надминува 2°C. Ако преминот на супстанцијата од цврста во течна состојба е нејасен, тогаш наместо опсегот на температурата на топење, се поставува температура на која се случува само почетокот или само крајот на топењето. Треба да се земе предвид дека на точноста на утврдување на температурниот опсег на кој се топи супстанцијата за испитување може да влијаат условите за подготовка на примерокот, стапката на пораст и точноста на мерењето на температурата и искуството на аналитичарот.

Точката на вриење е интервал помеѓу почетната и крајната температура на вриење при нормален притисок од 760 mmHg. (101,3 kPa). Температурата на која првите 5 капки течност се дестилирани во ресиверот се нарекува почетна точка на вриење, а температурата на која 95% од течноста пренесена во приемникот се нарекува крајна точка на вриење. Наведените температурни граници може да се постават со користење на макрометодот и микрометодот. Треба да се земе предвид дека точката на вриење зависи од атмосферскиот притисок. Точката на вриење е поставена само за релативно мал број течни лекови: циклопропан, хлороетил, етер, флуоротан, хлороформ, трихлоретилен, етанол.

При утврдување на густина, земете ја масата на супстанција со одреден волумен. Густината се одредува со помош на пикнометар или хидрометар, строго почитувајќи го температурниот режим, бидејќи густината зависи од температурата. Ова обично се постигнува со термостатирање на пикнометарот на 20°C. Одредени интервали на вредности на густина ја потврдуваат автентичноста на етил алкохол, глицерин, вазелин масло, вазелин, цврст парафин, халогени јаглеводороди (хлороетил, флуоротан, хлороформ), раствор на формалдехид, етер за анестезија, амил нитрит итн.

Вискозноста (внатрешно триење) е физичка константа која ја потврдува автентичноста на течните лековити материи. Постојат динамичен (апсолутен), кинематичен, релативен, специфичен, намален и карактеристичен вискозитет. Секој од нив има свои мерни единици.

За да се процени квалитетот на течните препарати кои имаат вискозна конзистентност, на пример, глицерин, вазелин, масла, обично се одредува релативната вискозност. Тоа е односот на вискозноста на течноста што се испитува со вискозноста на водата, земена како единство.

Растворливоста не се смета за физичка константа, туку како својство што може да послужи како индикативна карактеристика на лекот за тестирање. Заедно со точката на топење, растворливоста на супстанцијата при константна температура и притисок е еден од параметрите со кои се одредува автентичноста и чистотата на речиси сите лековити материи.

Методот за одредување на растворливост се заснова на фактот дека примерок од претходно сомелен (ако е потребно) лек се додава на измерен волумен на растворувач и континуирано се меша 10 минути на (20±2)°C. Лекот се смета за растворен ако не се забележани честички од супстанцијата во растворот во пропуштената светлина. Ако лекот бара повеќе од 10 минути за да се раствори, тогаш тој е класифициран како бавно растворлив. Нивната смеса со растворувачот се загрева во водена бања до 30°C и целосното растворање се забележува по ладење до (20±2)°C и силно протресување 1-2 минути.

Методот на растворливост во фаза овозможува да се измери чистотата на супстанцијата на лекот со прецизно мерење на вредностите на растворливост. Суштината на воспоставување на растворливост на фазата е последователно додавање на зголемена маса на лекот на константен волумен на растворувач. За да се постигне состојба на рамнотежа, смесата се подложува на продолжено тресење на константна температура, а потоа содржината на растворената дрога супстанција се одредува со помош на дијаграми, т.е. да се утврди дали производот за испитување е индивидуална супстанција или мешавина. Методот на растворливост во фаза е објективен и не бара скапа опрема или знаење за природата и структурата на нечистотиите. Ова овозможува да се користи за квалитативни и квантитативни анализи, како и за проучување на стабилноста и добивање на прочистени примероци од лекови (до чистота од 99,5%).Важна предност на методот е способноста да се разликуваат оптички изомери и полиморфни форми на лековити материи. Методот е применлив за сите видови соединенија кои формираат вистински раствори.

Физичко-хемиски методи

Тие стануваат сè поважни за целите на објективна идентификација и квантификација на лековитите супстанции. Недеструктивната анализа (без уништување на анализираниот објект), која стана широко распространета во различни индустрии, исто така игра важна улога во фармацевтската анализа. Многу физичко-хемиски методи се погодни за негова имплементација, особено оптичка, NMR, PMR, UV и IR спектроскопија итн.

Во фармацевтската анализа најшироко се користат физичко-хемиските методи кои можат да се класифицираат во следните групи: оптички методи; методи засновани на апсорпција на зрачење; методи базирани на емисија на зрачење; методи засновани на употреба на магнетно поле; електрохемиски методи; методи на сепарација; термички методи.

Повеќето од наведените методи (со исклучок на оптичките, електрохемиските и термичките) се широко користени за одредување на хемиската структура на органските соединенија.

Физичкохемиските методи на анализа имаат голем број на предности во однос на класичните хемиски методи. Тие се засноваат на употребата на физичките и хемиските својства на супстанциите и во повеќето случаи се карактеризираат со брзина, селективност, висока чувствителност и можност за обединување и автоматизација.

Физичко-хемиски или инструментални методи на анализа

Физичко-хемиските или инструменталните методи на анализа се засноваат на мерење, со употреба на инструменти (инструменти), физичките параметри на анализираниот систем, кои настануваат или се менуваат при извршувањето на аналитичката реакција.

Брзиот развој на физичко-хемиските методи на анализа беше предизвикан од фактот што класичните методи на хемиска анализа (гравиметрија, титриметрија) повеќе не можеа да ги задоволат бројните барања на хемиската, фармацевтската, металуршката, полупроводничката, нуклеарната и другите индустрии, кои бараа зголемување на чувствителноста на методите на 10-8 - 10-9%, нивната селективност и брзина, што би овозможило контрола на технолошките процеси врз основа на податоци од хемиска анализа, како и нивно извршување автоматски и далечински.

Голем број современи физичко-хемиски методи на анализа овозможуваат истовремено да се вршат и квалитативна и квантитативна анализа на компонентите во истиот примерок. Точноста на анализата на современите физичко-хемиски методи е споредлива со точноста на класичните методи, а во некои, на пример, во кулометријата, таа е значително повисока.

Недостатоците на некои физичко-хемиски методи ја вклучуваат високата цена на употребените инструменти и потребата да се користат стандарди. Затоа, класичните методи на анализа сè уште не ја изгубиле својата важност и се користат таму каде што нема ограничувања на брзината на анализа и потребна е висока точност со висока содржина на анализираната компонента.

Класификација на физичко-хемиските методи на анализа

Класификацијата на физичко-хемиските методи на анализа се заснова на природата на измерениот физички параметар на анализираниот систем, чија вредност е во функција на количината на супстанцијата. Во согласност со ова, сите физичко-хемиски методи се поделени во три големи групи:

Електрохемиски;

Оптички и спектрален;

Хроматографски.

Електрохемиските методи на анализа се засноваат на мерење на електрични параметри: струја, напон, рамнотежни потенцијали на електрода, електрична спроводливост, количина на електрична енергија, чии вредности се пропорционални на содржината на супстанцијата во анализираниот објект.

Оптичките и спектралните методи на анализа се засноваат на мерни параметри кои ги карактеризираат ефектите од интеракцијата на електромагнетното зрачење со супстанции: интензитетот на зрачењето на возбудените атоми, апсорпцијата на монохроматското зрачење, индексот на прекршување на светлината, аголот на ротација на рамнината на поларизиран зрак светлина итн.

Сите овие параметри се функција на концентрацијата на супстанцијата во анализираниот објект.

Хроматографските методи се методи за одвојување на хомогени повеќекомпонентни мешавини во поединечни компоненти со методи на сорпција во динамички услови. Под овие услови, компонентите се распределуваат помеѓу две фази кои не се мешаат: мобилна и стационарна. Распределбата на компонентите се заснова на разликата во нивните коефициенти на дистрибуција помеѓу мобилната и стационарната фаза, што доведува до различни стапки на пренос на овие компоненти од стационарната во мобилната фаза. По раздвојувањето, квантитативната содржина на секоја компонента може да се одреди со различни методи на анализа: класични или инструментални.

Спектрална анализа на молекуларна апсорпција

Спектралната анализа на молекуларна апсорпција вклучува спектрофотометриски и фотоколориметриски типови на анализа.

Спектрофотометриската анализа се заснова на определување на спектарот на апсорпција или мерење на апсорпција на светлина на строго дефинирана бранова должина, што одговара на максимумот на кривата на апсорпција на супстанцијата што се испитува.

Фотоколориметриската анализа се заснова на споредба на интензитетот на бојата на проучуваниот обоен раствор и стандарден обоен раствор со одредена концентрација.

Молекулите на супстанцијата имаат одредена внатрешна енергија Е, чии компоненти се:

Енергијата на движење на електроните Јагула сместена во електростатското поле на атомските јадра;

Енергијата на вибрации на атомските јадра во однос на едни со други Е брои;

Енергија на ротација на молекулата E vr

и математички се изразува како збир на сите горенаведени енергии:

Покрај тоа, ако молекулата на супстанцијата апсорбира зрачење, тогаш нејзината почетна енергија E 0 се зголемува за количината на енергијата на апсорбираниот фотон, односно:

Од горенаведената еднаквост произлегува дека колку е пократка брановата должина λ, толку е поголема фреквенцијата на вибрации и, според тоа, поголема E, односно енергијата што се пренесува на молекулата на супстанцијата при интеракција со електромагнетното зрачење. Според тоа, природата на интеракцијата на енергијата на зрачењето со материјата ќе биде различна во зависност од брановата должина на светлината λ.

Множеството од сите фреквенции (бранови должини) на електромагнетното зрачење се нарекува електромагнетен спектар. Опсегот на бранова должина е поделен на региони: ултравиолетово (УВ) приближно 10-380 nm, видливо 380-750 nm, инфрацрвено (IR) 750-100000 nm.

Енергијата дадена на молекулата на супстанцијата со зрачење од УВ и видливите делови од спектарот е доволна за да предизвика промена во електронската состојба на молекулата.

Енергијата на IR зраците е помала, па затоа е доволно само да се предизвика промена во енергијата на вибрационите и ротационите транзиции во молекулата на супстанцијата. Така, во различни делови од спектарот може да се добијат различни информации за состојбата, својствата и структурата на супстанциите.

Закони за апсорпција на зрачење

Спектрофотометриските методи на анализа се засноваат на два основни закони. Првиот од нив е законот Буге-Ламберт, вториот закон е Пивскиот закон. Комбинираниот закон Буге-Ламбер-Бир ја има следната формулација:

Апсорпцијата на монохроматска светлина со обоен раствор е директно пропорционална со концентрацијата на супстанцијата што апсорбира светлина и дебелината на слојот раствор низ кој минува.

Законот Бугер-Ламбер-Бир е основниот закон за апсорпција на светлината и лежи во основата на повеќето фотометриски методи на анализа. Математички се изразува со равенката:

или

Големина lg Јас / Јас 0 се нарекува оптичка густина на супстанцијата што апсорбира и е означена со буквите D или A. Тогаш законот може да се напише на следниов начин:

Односот на интензитетот на флуксот на монохроматското зрачење што минува низ предметот за тестирање до интензитетот на почетниот флукс на зрачење се нарекува проѕирност или пропустливост на растворот и се означува со буквата Т: Т = Јас / Јас 0

Овој сооднос може да се изрази како процент. Вредноста Т, која го карактеризира преносот на слој со дебелина од 1 cm, се нарекува пропустливост. Оптичката густина D и пропустливоста T се поврзани една со друга со релацијата

D и T се главните количини што ја карактеризираат апсорпцијата на раствор на дадена супстанција со одредена концентрација на одредена бранова должина и дебелина на апсорбирачкиот слој.

Зависноста D(C) е линеарна, а T(C) или T(l) е експоненцијална. Ова е строго забележано само за монохроматски флукс на зрачење.

Вредноста на коефициентот на гаснење К зависи од начинот на изразување на концентрацијата на супстанцијата во растворот и дебелината на апсорбирачкиот слој. Ако концентрацијата е изразена во молови на литар, а дебелината на слојот е во сантиметри, тогаш се нарекува коефициент на изумирање на молар, означен со симболот ε, и е еднаков на оптичката густина на растворот со концентрација од 1 mol/L. се става во кивета со дебелина на слој од 1 см.

Вредноста на коефициентот на апсорпција на моларната светлина зависи од:

Од природата на растворената супстанција;

Бранови должини на монохроматска светлина;

Температури;

Природата на растворувачот.

Причини за непочитување на законот Bouguer-Lambert-Beer.

1. Законот е изведен и важи само за монохроматска светлина, затоа недоволната монохроматизација може да предизвика отстапување на законот, а во поголема мера, толку помалку монохроматска е светлината.

2. Во растворите што ја менуваат концентрацијата на супстанцијата што апсорбира или нејзината природа можат да се случат различни процеси: хидролиза, јонизација, хидратација, асоцијација, полимеризација, комплексирање итн.

3. Апсорпцијата на светлина на растворите значително зависи од pH вредноста на растворот. Кога се менува pH вредноста на растворот, следново може да се промени:

Степенот на јонизација на слаб електролит;

Формата на постоење на јони, што доведува до промена на апсорпцијата на светлината;

Состав на добиените обоени сложени соединенија.

Затоа, законот важи за високо разредени раствори, а неговиот опсег е ограничен.

Визуелна колориметрија

Интензитетот на бојата на растворите може да се мери со различни методи. Меѓу нив, постојат субјективни (визуелни) колориметриски методи и објективни, односно фотоколориметриски.

Визуелни методи се оние во кои проценката на интензитетот на бојата на растворот за тестирање се врши со голо око. Во објективни методи на колориметриско определување, наместо директно набљудување се користат фотоелементи за мерење на интензитетот на бојата на растворот за тестирање. Определувањето во овој случај се врши во специјални уреди - фотоколориметри, поради што методот се нарекува фотоколориметриски.

Видливи бои:

Физичко-хемиски или инструментални методи на анализа

Класификација на физичко-хемиските методи на анализа

Електрохемиски;

Оптички и спектрален;

Хроматографски.

Сите овие параметри се функција на концентрацијата на супстанцијата во анализираниот објект.

Спектрална анализа на молекуларна апсорпција

Молекулите на супстанцијата имаат одредена внатрешна енергија Е, чии компоненти се:

Енергијата на движење на електроните Јагула сместена во електростатското поле на атомските јадра;

Енергијата на вибрации на атомските јадра во однос на едни со други Е брои;

Енергија на ротација на молекулата E vr

и математички се изразува како збир на сите горенаведени енергии:

Закони за апсорпција на зрачење

или

Вредноста log I /I 0 се нарекува оптичка густина на супстанцијата што апсорбира и се означува со буквите D или A. Тогаш законот може да се напише на следниов начин:

Вредноста на коефициентот на апсорпција на моларната светлина зависи од:

Од природата на растворената супстанција;

Бранови должини на монохроматска светлина;

Температури;

Природата на растворувачот.

Причини за непочитување на законот Bouguer-Lambert-Beer.

Степенот на јонизација на слаб електролит;

Формата на постоење на јони, што доведува до промена на апсорпцијата на светлината;

Состав на добиените обоени сложени соединенија.

Затоа, законот важи за високо разредени раствори, а неговиот опсег е ограничен.

Визуелна колориметрија

Видливи бои:

Визуелните методи вклучуваат:

Стандарден сериски метод;

Колориметриска титрација или метод на дуплирање;

Метод на изедначување.

Стандарден сериски метод. При вршење на анализа со методот на стандардна серија, интензитетот на бојата на анализираниот обоен раствор се споредува со боите на серија специјално подготвени стандардни раствори (со иста дебелина на слојот).

Методот на колориметриска титрација (дуплирање) се заснова на споредување на бојата на анализираниот раствор со бојата на друг раствор - контролата. Контролниот раствор ги содржи сите компоненти на растворот за испитување, со исклучок на супстанцијата што се одредува и сите реагенси што се користат при подготовката на примерокот. Стандарден раствор на супстанцијата што се одредува се додава во него од бирета. Кога се додава толку многу од овој раствор што интензитетот на бојата на контролниот и анализираниот раствор е еднаков, се смета дека анализираниот раствор содржи иста количина на аналит како што бил внесен во контролниот раствор.

Методот на изедначување се разликува од визуелните колориметриски методи опишани погоре, во кои сличноста на боите на стандардните и тестните раствори се постигнува со промена на нивната концентрација. Во методот на изедначување, сличноста на боите се постигнува со промена на дебелината на слоевите на обоените раствори. За таа цел при определување на концентрацијата на материите се користат колориметри за одвод и потопување.

Предности на визуелните методи на колориметриска анализа:

Техниката на определување е едноставна, нема потреба од сложена скапа опрема;

Окото на набљудувачот може да го процени не само интензитетот, туку и нијансите на бојата на растворите.

Недостатоци:

Потребно е да се подготви стандарден раствор или серија стандардни раствори;

Невозможно е да се спореди интензитетот на бојата на растворот во присуство на други обоени супстанции;

Кога се споредува интензитетот на бојата на очите на една личност долго време, човекот се заморува и се зголемува грешката во одредувањето;

Човечкото око не е толку чувствително на мали промени во оптичката густина како фотоволтаичните уреди, што го оневозможува откривањето на разликите во концентрацијата до околу пет релативни проценти.

Фотоелектроколориметриски методи

Фотоелектроколориметрија се користи за мерење на апсорпцијата или пропустливоста на светлината на обоените раствори. Инструментите што се користат за оваа намена се нарекуваат фотоелектрични колориметри (PEC).

Фотоелектричните методи за мерење на интензитетот на бојата вклучуваат употреба на фотоелементи. За разлика од уредите во кои споредбите на боите се прават визуелно, кај фотоелектроколориметрите примач на светлосна енергија е уред - фотоелемент. Овој уред ја претвора светлосната енергија во електрична енергија. Фотоелементите овозможуваат колориметриски определби не само во видливите, туку и во UV и IR регионите на спектарот. Мерењето на светлосните текови со помош на фотоелектрични фотометри е попрецизно и не зависи од карактеристиките на окото на набљудувачот. Употребата на фотоелементи овозможува автоматизирање на определувањето на концентрацијата на супстанции во хемиската контрола на технолошките процеси. Како резултат на тоа, фотоелектричната колориметрија е многу пошироко користена во фабричката лабораториска пракса отколку визуелната колориметрија.

На сл. Слика 1 го прикажува вообичаениот распоред на јазли во инструментите за мерење на преносот или апсорпцијата на растворите.

Сл. 1 Главни компоненти на уредите за мерење на апсорпција на зрачење: 1 - извор на зрачење; 2 - монохроматор; 3 - кивети за раствори; 4 - конвертор; 5 - индикатор за сигнал.

Фотоколориметрите, во зависност од бројот на фотоелементи кои се користат при мерењата, се поделени во две групи: еднозрачни (еднократни) - уреди со една фотоелементи и двозрак (двокрак) - со две фотоелементи.

Точноста на мерењето добиена со FEC со едно светло е мала. Во фабричките и научните лаборатории најмногу се користат фотоволтаични инсталации опремени со две фотоелементи. Дизајнот на овие уреди се заснова на принципот на изедначување на интензитетот на два светлосни зраци со помош на дијафрагма со променлив пресек, односно принципот на оптичка компензација на два светлосни флукса со менување на отворот на зеницата на дијафрагмата.

Шематскиот дијаграм на уредот е прикажан на сл. 2. Светлината од блескаво светилка 1 е поделена на два паралелни греди со помош на огледала 2. Овие светлосни зраци минуваат низ светлосните филтри 3, киветите со растворите 4 и паѓаат на фотоќелиите 6 и 6", кои се поврзани со галванометарот 8 според диференцијално коло. Слотската дијафрагма 5 го менува интензитетот на падот на светлосниот флукс на фотоелементот 6. Фотометрискиот неутрален клин 7 служи за ублажување на инцидентот на прозрачниот флукс на фотоелемент од 6 инчи.

Сл.2. Дијаграм на фотоелектроколориметар со две зраци

Одредување на концентрација во фотоелектроколориметрија

За да се одреди концентрацијата на аналити во фотоелектроколориметријата, се користи следново:

Метод за споредување на оптичката густина на стандардните и тестните обоени раствори;

Метод на определување врз основа на просечната вредност на коефициентот на апсорпција на моларна светлина;

Метод на крива на калибрација;

Адитивен метод.

Метод за споредување на оптичките густини на стандардни и тест раствори во боја

За определување, се подготвува стандарден раствор на аналитот со позната концентрација, кој се приближува до концентрацијата на испитуваниот раствор. Оптичката густина на овој раствор се одредува на одредена бранова должина D fl. Тогаш оптичката густина на испитниот раствор D x се одредува на иста бранова должина и со иста дебелина на слојот. Со споредување на оптичката густина на тестот и референтните раствори, се наоѓа непознатата концентрација на аналитот.

Методот за споредба е применлив за единечни анализи и бара задолжително усогласување со основниот закон за апсорпција на светлина.

Метод на графикон за калибрација. За да се одреди концентрацијата на супстанцијата користејќи го овој метод, подгответе серија од 5-8 стандардни раствори со различни концентрации. При изборот на опсегот на концентрација на стандардни раствори, се користат следниве принципи:

* мора да ја покрие областа на можни мерења на концентрацијата на растворот што се проучува;

* оптичката густина на растворот за тестирање треба да одговара приближно на средината на кривата на калибрација;

* пожелно е во овој опсег на концентрација да се почитува основниот закон за апсорпција на светлина, односно графикот на зависност е линеарен;

* вредноста на оптичката густина мора да биде во опсег од 0,14... 1.3.

Се мери оптичката густина на стандардните раствори и се црта графикон од D(C). Откако се определи D x од растворот што се испитува, C x се наоѓа од графиконот за калибрација (сл. 3).

Овој метод овозможува да се одреди концентрацијата на супстанцијата дури и во случаи кога не се почитува основниот закон за апсорпција на светлина. Во овој случај, се подготвуваат голем број стандардни раствори, кои се разликуваат во концентрацијата не повеќе од 10%.

Ориз. 3. Зависност на оптичката густина на растворот од концентрацијата (крива на калибрација)

Адитивниот метод е тип на споредбена метода заснована на споредување на оптичката густина на испитниот раствор и истиот раствор со додавање на позната количина на супстанцијата што се одредува.

Се користи за елиминирање на мешачкото влијание на туѓи нечистотии и за одредување на мали количини на аналитот во присуство на големи количини на туѓи материи. Методот бара задолжително усогласување со основниот закон за апсорпција на светлина.

Спектрофотометрија

Ова е метод на фотометриска анализа во која содржината на супстанцијата се одредува со нејзината апсорпција на монохроматска светлина во видливите, UV и IR регионите на спектарот. Во спектрофотометријата, за разлика од фотометријата, монохроматизацијата е обезбедена не со светлосни филтри, туку со монохроматори, кои овозможуваат континуирано менување на брановата должина. Призми или дифракциони решетки се користат како монохроматори, кои обезбедуваат значително поголема монохроматичност на светлината од светлосните филтри, така што точноста на спектрофотометриските определби е поголема.

Спектрофотометриските методи, во споредба со фотоколориметриските методи, овозможуваат решавање на поширок опсег на проблеми:

* врши квантитативно определување на супстанции во широк опсег на бранови должини (185-1100 nm);

* врши квантитативна анализа на повеќекомпонентни системи (истовремено определување на неколку супстанции);

* определување на составот и константите на стабилност на комплексните соединенија што апсорбираат светлина;

* определување на фотометриските карактеристики на соединенијата што апсорбираат светлина.

За разлика од фотометрите, монохроматорот во спектрофотометрите е призма или дифракциона решетка, која овозможува континуирано менување на брановата должина. Постојат инструменти за мерења во видливите, UV и IR регионите на спектарот. Шематскиот дијаграм на спектрофотометарот е практично независен од спектралниот регион.

Спектрофотометрите, како фотометрите, доаѓаат во типови со единечно и двојно зрак. Во уредите со двоен зрак, светлосниот флукс се бифуркира на некој начин или внатре во монохроматорот или на излезот од него: еден флукс потоа поминува низ растворот за тестирање, другиот низ растворувачот.

Инструментите со еден зрак се особено корисни за квантитативни определувања засновани на мерења на апсорпција на една бранова должина. Во овој случај, едноставноста на уредот и леснотијата на работа се значајна предност. Поголемата брзина и леснотијата на мерење при работа со инструменти со двоен зрак се корисни во квалитативната анализа, кога оптичката густина мора да се мери во голем опсег на бранови должини за да се добие спектар. Дополнително, уредот со два зраци може лесно да се прилагоди за автоматско снимање на постојано менување на оптичката густина: сите модерни спектрофотометри за снимање користат систем со две зраци за оваа намена.

И инструментите со единечни и двојни зраци се погодни за видливи и УВ мерења. Комерцијално произведените IR спектрофотометри секогаш се засноваат на дизајн со двоен зрак, бидејќи тие обично се користат за скенирање и снимање на голем регион од спектарот.

Квантитативната анализа на еднокомпонентните системи се врши со користење на истите методи како во фотоелектроколориметријата:

Со споредување на оптичките густини на стандардните и тестните раствори;

Метод на определување врз основа на просечната вредност на коефициентот на апсорпција на моларна светлина;

Користејќи го методот на графикон за калибрација,

и нема посебни карактеристики.

Спектрофотометрија во квалитативна анализа

Квалитативна анализа во ултравиолетовиот дел од спектарот. Ултравиолетовите спектри на апсорпција обично имаат две или три, понекогаш пет или повеќе апсорпциони ленти. За недвосмислено да се идентификува супстанцијата што се испитува, се запишува нејзиниот спектар на апсорпција во различни растворувачи и добиените податоци се споредуваат со соодветните спектри на слични супстанции со познат состав. Ако спектрите на апсорпција на супстанцијата што се испитува во различни растворувачи се совпаѓаат со спектарот на познатата супстанција, тогаш можно е со висок степен на веројатност да се донесе заклучок за идентитетот на хемискиот состав на овие соединенија. За да се идентификува непозната супстанција по нејзиниот спектар на апсорпција, неопходно е да се има доволен број на апсорпциони спектри на органски и неоргански супстанции. Постојат атласи кои ги покажуваат апсорпционите спектри на многу, главно органски, супстанции. Ултравиолетовите спектри на ароматичните јаглеводороди се особено добро проучени.

При идентификување на непознати соединенија, треба да се обрне внимание и на интензитетот на апсорпција. Многу органски соединенија имаат апсорпциони појаси чии максими се наоѓаат на иста бранова должина λ, но нивните интензитети се различни. На пример, во спектарот на фенолот постои лента на апсорпција на λ = 255 nm, за која моларниот коефициент на апсорпција при максимумот на апсорпција е ε max = 1450. На иста бранова должина, ацетонот има опсег за кој ε max = 17 .

Квалитативна анализа во видливиот дел од спектарот. Идентификацијата на обоена супстанција, како што е бојата, може да се направи и со споредување на нејзиниот видлив спектар на апсорпција со оној на слична боја. Апсорпционите спектри на повеќето бои се опишани во специјални атласи и прирачници. Од апсорпциониот спектар на бојата може да се извлече заклучок за чистотата на бојата, бидејќи во спектарот на нечистотии има голем број на апсорпциони ленти кои ги нема во спектарот на бојата. Од апсорпциониот спектар на мешавина на бои, може да се извлече заклучок и за составот на смесата, особено ако спектрите на компонентите на смесата содржат апсорпциони ленти лоцирани во различни региони на спектарот.

Квалитативна анализа во инфрацрвениот регион на спектарот

Апсорпцијата на инфрацрвено зрачење е поврзана со зголемување на вибрационите и ротационите енергии на ковалентната врска доколку тоа доведе до промена на диполниот момент на молекулата. Ова значи дека скоро сите молекули со ковалентни врски се, до еден или друг степен, способни за апсорпција во IR регионот.

Инфрацрвените спектри на полиатомските ковалентни соединенија обично се многу сложени: тие се состојат од многу тесни ленти на апсорпција и се многу различни од конвенционалните УВ и видливите спектри. Разликите произлегуваат од природата на интеракцијата помеѓу апсорбирачките молекули и нивната околина. Оваа интеракција (во кондензирани фази) влијае на електронските транзиции во хромофорот, така што линиите на апсорпција се шират и имаат тенденција да се спојат во широки опсези на апсорпција. Во IR спектарот, напротив, фреквенцијата и коефициентот на апсорпција што одговараат на поединечна врска обично се менуваат малку со промените во околината (вклучувајќи ги и промените во останатите делови од молекулата). Линиите исто така се прошируваат, но не доволно за да се спојат во лента.

Вообичаено, кога се конструираат IR спектри, пропустливоста се црта на y-оската како процент наместо оптичка густина. Со овој метод на конструирање, апсорпционите ленти се појавуваат како вдлабнатини во кривата, а не како максимални во УВ спектрите.

Формирањето на инфрацрвени спектри е поврзано со вибрациската енергија на молекулите. Вибрациите можат да бидат насочени долж валентната врска помеѓу атомите на молекулата, во тој случај тие се нарекуваат валентни. Постојат симетрични вибрации на истегнување, во кои атомите вибрираат во исти насоки и асиметрични вибрации на истегнување, во кои атомите вибрираат во спротивни насоки. Ако се појават атомски вибрации со промена на аголот помеѓу врските, тие се нарекуваат деформација. Оваа поделба е многу произволна, бидејќи при вибрациите на истегнување, аглите се деформираат до еден или друг степен и обратно. Енергијата на вибрациите на свиткување е обично помала од енергијата на вибрациите за истегнување, а појасите на апсорпција предизвикани од вибрациите на свиткување се наоѓаат во регионот на подолгите бранови.

Вибрациите на сите атоми на молекулата предизвикуваат апсорпциони ленти кои се индивидуални за молекулите на дадената супстанција. Но, меѓу овие вибрации може да се разликуваат вибрации на групи атоми, кои се слабо поврзани со вибрациите на атомите на остатокот од молекулата. Апсорпционите ленти предизвикани од таквите вибрации се нарекуваат карактеристични појаси. Тие се забележани, по правило, во спектрите на сите молекули што ги содржат овие групи на атоми. Пример за карактеристични ленти се лентите од 2960 и 2870 cm -1. Првата лента се должи на асиметрични истегнувачки вибрации на врската C-H во метил групата CH 3, а втората се должи на симетрични истегнувачки вибрации на врската C-H од истата група. Ваквите појаси со мало отстапување (±10 cm -1) се забележани во спектрите на сите заситени јаглеводороди и, генерално, во спектарот на сите молекули кои содржат CH 3 групи.

Други функционални групи можат да влијаат на положбата на карактеристичниот опсег, а фреквентната разлика може да биде до ±100 cm -1, но таквите случаи се малку на број и може да се земат предвид врз основа на литературните податоци.

Квалитативната анализа во инфрацрвениот регион на спектарот се врши на два начина.

1. Земете спектар на непозната супстанција во пределот од 5000-500 cm -1 (2 - 20 μ) и побарајте сличен спектар во посебни каталози или табели. (или користење на компјутерски бази на податоци)

2. Во спектарот на супстанцијата што се проучува, се бараат карактеристични ленти од кои може да се суди за составот на супстанцијата.

Врз основа на апсорпцијата на зрачењето на Х-зраци од атомите. Ултравиолетова спектрофотометрија е наједноставниот и најшироко користен метод за анализа на апсорпција во фармацијата. Се користи во сите фази на фармацевтска анализа на лекови (тестирање на автентичност, чистота, квантитативно определување). Развиени се голем број методи за квалитативна и квантитативна анализа...

Се даваат средства за обвивка и аналгетици, се доставува О2 за да се обезбеди соодветна вентилација на белите дробови и се коригира балансот на вода-електролит. 7. Физичко-хемиски методи за определување на фенол 7.1 Фотоколориметриско определување на масениот удел на фенолите во прочистената индустриска отпадна вода по производството на хемиско токсично производство на фенол од катран 1. Цел на работата. ...

Контрола во аптека, правила и услови за чување и издавање на лекови. Контролата во аптека се врши во согласност со Наредбата на Министерството за здравство на Руската Федерација од 16 јули 1997 година бр. 214 „За контрола на квалитетот на лековите произведени во аптеките“. Со наредбата се одобрени три документи (прилози на налог 1, 2, 3): 1. „Упатство за контрола на квалитетот на лековите произведени во аптеките“...

Наслови. Како главен синоним ќе бидат дадени и трговските имиња под кои JIC е регистриран или произведен во Руската Федерација. 4 Методолошка основа за класификација на лековите Бројот на лекови во светот постојано се зголемува. Во моментов на фармацевтскиот пазар во Русија циркулираат повеќе од 18.000 имиња на лекови, што е 2,5 пати повеќе отколку во 1992 година...

Целта на проучувањето на лековите супстанции е да се утврди соодветноста на лекот за медицинска употреба, т.е. усогласеност со неговиот регулаторен документ за оваа дрога.

Фармацевтската анализа е наука за хемиска карактеризација и мерење на биолошки активните супстанции во сите фази на производството: од контрола на суровините до проценка на квалитетот на добиената супстанција на лекови, проучување на нејзината стабилност, утврдување датуми на истекување и стандардизирање на готовиот дозирен облик. Особеностите на фармацевтската анализа се неговата разновидност и разновидност на супстанции или нивни мешавини, вклучувајќи поединечни хемиски супстанции, сложени мешавини на биолошки супстанции (протеини, јаглени хидрати, олигопептиди итн.). Методите на анализа бараат постојано подобрување и, доколку во фармакопејата на УП преовладуваа хемиски методи, вклучително и квалитативни реакции, во сегашната фаза главно се користат физичко-хемиски и физички методи на анализа.

Фармацевтската анализа, во зависност од целите, вклучува различни аспекти на контрола на квалитетот на лекот:
1. Фармакопејална анализа;
2. Етапна контрола на производството на лекови;
3. Анализа на индивидуално произведени лекови.

Главна и најзначајна е фармакопеја анализа, т.е. анализа на лекови за усогласеност со стандардот - фармакопејска монографија или друга НД и, со тоа, потврда за неговата соодветност. Оттука произлегуваат барањата за висока специфичност, селективност, точност и доверливост на анализата.

Заклучок за квалитетот на лекот може да се донесе само врз основа на анализа на примерок (статистички сигурен примерок). Постапката за земање мостри е наведена или во приватна статија или во општиот член на Државниот фонд X1 ед. (број 2) стр.15. За тестирање на медицинските производи за усогласеност со барањата на регулаторната и техничката документација, се врши повеќестепено земање мостри (примероци). Во повеќестепеното земање мостри, примерок (примерок) се формира етапно и производите во секоја фаза се избираат по случаен избор во пропорционални количини од единиците избрани во претходната фаза. Бројот на фази се одредува според видот на пакувањето.

1-ва фаза: избор на единици за пакување (кутии, кутии, итн.);
Фаза 2: избор на единици за пакување сместени во контејнери за пакување (кутии, шишиња, лименки итн.);
Фаза 3: избор на производи во примарно пакување (ампули, шишиња, контурно пакување итн.).

За да го пресметате изборот на количината на производи во секоја фаза, користете ја формулата:

Каде n -број на единици за пакување од оваа фаза.

Специфичната процедура за земање примероци е детално опишана во изданието на Глобалниот фонд X1, број 2. Во овој случај, анализата се смета за сигурна ако најмалку четири примероци се репродуцираат.

Критериуми за фармацевтска анализа

За различни цели на анализа, важни се критериумите како што се селективноста на анализата, чувствителноста, точноста, времето на анализа и количината на супстанцијата за испитување.

Селективноста на анализата е од суштинско значење кога се анализираат комплексни лекови кои се состојат од неколку активни компоненти. Во овој случај, селективноста на анализата за квантитативно определување на секоја од супстанциите е многу важна.

Барањата за точност и чувствителност зависат од предметот и целта на студијата. При тестирање за чистота или нечистотии, се користат високо чувствителни методи. За контрола на производството во фаза по фаза, важен е факторот време потрошено на анализа.

Важен параметар на методот на анализа е границата на чувствителност на методот. Оваа граница значи најниска содржина во која може со сигурност да се открие одредена супстанција. Најмалку чувствителни се хемиските методи на анализа и квалитативните реакции. Најчувствителните ензимски и биолошки методи кои овозможуваат откривање на единечни макромолекули на супстанции. Од оние кои всушност се користат, најчувствителни се радиохемиските, каталитичките и флуоресцентните методи, кои овозможуваат одредување до 10 -9%; чувствителност на спектрофотометриски методи 10 -3 -10 -6%; потенциометриски 10 -2%.

Терминот „аналитичка точност“ истовремено вклучува два концепта: репродуктивност и исправност на добиените резултати.

репродуктивност -ја карактеризира дисперзијата на резултатите од анализата во споредба со просечната вредност.

Коректност -ја одразува разликата помеѓу вистинската и пронајдената содржина на супстанцијата. Точноста на анализата зависи од квалитетот на инструментите, искуството на аналитичарот итн. Точноста на анализата не може да биде поголема од точноста на најмалку точното мерење. Тоа значи дека ако при титрација точноста е ±0,2 ml плус грешката од истекување е исто така ±0,2 ml, т.е. вкупно ±0,4 ml, тогаш кога се трошат 20 ml титрант, грешката е 0,2%. Како што се намалува големината на примерокот и количината на титрант, точноста се намалува. Така, титриметриската анализа овозможува определување со релативна грешка од ± (0,2-0,3)%. Секој метод има своја точност. Кога се анализира, важно е да се имаат разбирање за следните концепти:

Груби грешки -се погрешна пресметка на набљудувачот или повреда на техниката на анализа. Таквите резултати се отфрлаат како неверодостојни.

Систематски грешки -ја одразуваат исправноста на резултатите од анализата. Тие ги искривуваат резултатите од мерењето, обично во една насока за одредена константна вредност. Систематските грешки може делумно да се отстранат со воведување корекции, калибрирање на уредот итн.

Случајни грешки -ја одразуваат репродуктивноста на резултатите од анализата. Тие се предизвикани од неконтролирани променливи. Аритметичката средина на случајните грешки се стреми кон нула. Затоа, за пресметки, неопходно е да се користат не резултатите од единечни мерења, туку просекот на неколку паралелни определби.

Апсолутна грешка– ја претставува разликата помеѓу добиениот резултат и вистинската вредност. Оваа грешка се изразува во истите единици како и вредноста што се одредува.

Релативна грешкадефиницијата е еднаква на односот на апсолутната грешка со вистинската вредност на количината што се одредува. Обично се изразува како процент или дропка.

Вредностите на релативните грешки зависат од методот што се користи за да се изврши анализата и каква е супстанцијата што се анализира - индивидуална супстанција и мешавина од многу компоненти.

Релативната грешка при проучување на поединечни супстанции со помош на спектрофотометрискиот метод е 2-3%, а со користење на IR спектрофотометрија – 5-12%; течна хроматографија 3-4%; потенциометрија 0,3-1%. Комбинираните методи обично ја намалуваат точноста на анализата. Биолошките методи се најмалку точни - нивната релативна грешка достигнува 50%.

Методи за идентификување на лековити супстанции.

Најважниот показател при тестирањето на лековитите супстанции е нивната идентификација или, како што е вообичаено во фармакопејските монографии, автентичноста. За да се утврди автентичноста на лековитите супстанции се користат бројни методи. Сите основни и општи се опишани во изданието GF X1, број 1. Историски, главниот акцент беше ставен на хемикалиите, вкл. квалитативни реакции на боја кои го карактеризираат присуството на одредени јони или функционални групи во органските соединенија; во исто време, физичките методи исто така беа широко користени. Современите фармакопеи ставаат акцент на физичко-хемиските методи.

Да се фокусираме на главните физички методи.

Прилично стабилна константа што ја карактеризира супстанцијата, нејзината чистота и автентичност е точката на топење. Овој индикатор е широко користен за стандардизирање на лековите супстанции. Методите за одредување на точката на топење се детално опишани во GF X1, можете сами да го пробате на лабораториски часови. Чистата супстанција има постојана точка на топење, но кога на неа се додаваат нечистотии, точката на топење обично значително се намалува. Овој ефект се нарекува примерок од мешавина, а примерокот од смесата е тој што овозможува да се утврди автентичноста на лекот во присуство на стандарден примерок или познат примерок. Меѓутоа, постојат исклучоци, на пример, расемичната сулфокамфорна киселина се топи на повисока температура, а различните кристални форми на индометацин се разликуваат во нивната точка на топење. Оние. Овој метод е еден од индикаторите што ни овозможува да ја карактеризираме и чистотата на производот и неговата автентичност.

За некои лекови, се користи индикатор како што е температурата на зацврстување. Друг индикатор што ја карактеризира супстанцијата е точката на вриење или температурните граници на дестилација. Овој индикатор ги карактеризира течните супстанции, на пример, етил алкохол. Точката на вриење е помалку карактеристичен показател, таа силно зависи од атмосферскиот притисок, можноста за формирање мешавини или азеотропи и се користи доста ретко.

Меѓу другите физички методи, вреди да се забележи определбата густина, вискозитет.Стандардните методи за анализа се опишани во GF X1. Метод кој ја карактеризира автентичноста на лекот е и одредување на неговата растворливост во различни растворувачи. Според GF X1 ед. Овој метод се карактеризира како својство што може да послужи како индикативна карактеристика на лекот што се тестира. Заедно со точката на топење, растворливоста на супстанцијата е еден од параметрите со кои се одредува автентичноста и чистотата на речиси сите лековити материи. Фармакопеја воспоставува приближна градација на супстанции по растворливост од многу лесно растворливи до практично нерастворливи. Во овој случај, супстанцијата се смета за растворена ако во растворот не се забележани честички од супстанцијата во пропуштената светлина.

Физичко-хемиски методи за утврдување на автентичноста.

Најинформативни од гледна точка на утврдување на автентичноста на супстанциите се физичко-хемиските методи засновани на својствата на молекулите на супстанцијата да комуницираат со какви било физички фактори. Физичко-хемиските методи вклучуваат:

1. Спектрални методи
УВ спектроскопија
Спектроскопија на видлива светлина
IR спектроскопија
Флуоресцентна спектроскопија
Спектроскопија на атомска апсорпција
Методи за анализа на Х-зраци
Нуклеарна магнетна резонанца
Дифракциона анализа на Х-зраци

2. Методи на анализа на сорпција
Хроматографија со тенок слој
Гасна-течна хроматографија
Течна хроматографија со високи перформанси
Електрофореза
Јонтофореза
Гел хроматографија

3.Масовни методи на анализа
Масовна спектрометрија
Спектрометрија на хроматомаса

4. Електрохемиски методи на анализа
Поларографија
Електронска парамагнетна резонанца

5.Употреба на стандардни примероци

Да ги разгледаме накратко аналитичките методи кои се применуваат во фармацијата. Сите овие методи на анализа ќе ви бидат детално прочитани на крајот на декември од професорот V.I. Myagkikh. За да се утврди автентичноста на лековитите супстанции, се користат некои спектрални методи. Најсигурно е да се користи нискофреквентниот регион на IR спектроскопија, каде што апсорпционите ленти најсигурно ја рефлектираат дадената супстанција. Оваа област се нарекува и област за отпечатоци од прсти. Како по правило, за да се потврди автентичноста, се користи споредба на IR спектрите земени во стандардни услови на стандардниот примерок и примерокот за тестирање. Случајноста на сите ленти за апсорпција ја потврдува автентичноста на лекот. Употребата на УВ и видливата спектроскопија е помалку сигурна бидејќи природата на спектарот не е индивидуална и одразува само одреден хромофор во структурата на органското соединение. Спектроскопија на атомска апсорпција и спектроскопија на Х-зраци се користат за анализа на неоргански соединенија и за идентификација на хемиски елементи. Нуклеарната магнетна резонанца овозможува да се одреди структурата на органските соединенија и е сигурен метод за потврдување на автентичноста, меѓутоа, поради сложеноста на инструментите и високата цена, се користи многу ретко и, по правило, само за истражувачки цели. . Флуоресцентната спектроскопија е применлива само за одредена класа на супстанции кои флуоресираат под влијание на УВ зрачењето. Во овој случај, спектарот на флуоресценција и спектарот на возбуда на флуоресценција се сосема индивидуални, но силно зависат од средината во која супстанцијата се раствора. Овој метод почесто се користи за квантитативно определување, особено за мали количини, бидејќи е еден од најчувствителните.

Рендгенската дифракциона анализа е најсигурен метод за потврдување на структурата на супстанцијата; овозможува да се утврди точната хемиска структура на супстанцијата, но едноставно не е погодна за on-line анализа на автентичноста и се користи исклучиво за научни цели.

Сорпциони методи на анализанашле многу широка примена во фармацевтската анализа. Тие се користат за одредување идентитет, присуство на нечистотии и квантификација. Ќе ви биде одржано детално предавање за овие методи и опремата што ја користи професорот V.I. Myagkikh, регионален претставник на Shimadzu, еден од главните производители на хроматографска опрема. Овие методи се засноваат на принципот на сорпција-десорпција на супстанции на одредени носители во проток на носач. Во зависност од носачот и сорбентот, тие се поделени на тенкослојна хроматографија, течна колона хроматографија (аналитичка и препаративна, вклучувајќи HPLC), гасно-течна хроматографија, гел-филтрација и јонофореза. Последните два методи се користат за анализа на комплексни протеински објекти. Значаен недостаток на методите е нивната релативност, т.е. хроматографијата може да ја карактеризира супстанцијата и нејзиното количество само со споредба со стандардна супстанција. Сепак, треба да се забележи како значајна предност - високата сигурност на методот и точноста, бидејќи во хроматографијата, секоја смеса мора да се подели на поединечни супстанции и резултатот од анализата е токму поединечната супстанција.

Масовните спектрометриски и електрохемиски методи ретко се користат за да се потврди автентичноста.

Посебно место заземаат методите за утврдување на автентичноста во споредба со стандарден примерок. Овој метод се користи доста широко во странски фармакопеи за да се утврди автентичноста на сложените макромолекули, сложените антибиотици, некои витамини и други супстанции кои содржат особено хирални јаглеродни атоми, бидејќи утврдувањето на автентичноста на оптички активна супстанција со други методи е тешко, па дури и невозможно. Референтен материјал мора да се развие и издаде врз основа на развиена и одобрена фармакопеја монографија. Во Русија постојат и се користат само неколку стандардни примероци, а најчесто за анализа се користат таканаречените RSO - работни стандардни примероци подготвени непосредно пред експериментот од познати супстанции или соодветни супстанции.

Хемиски методи за автентикација.

Утврдувањето на автентичноста на лековите со хемиски методи се користи главно за неоргански лековити материи, бидејќи Често нема други методи или бараат сложена и скапа опрема. Како што веќе беше споменато, неорганските елементи лесно се идентификуваат со атомска апсорпција или спектроскопија на Х-зраци. Нашите фармакопејални монографии обично користат методи за хемиска автентикација. Овие методи обично се поделени на следниве:

Реакции на таложење на анјони и катјони.Типични примери се реакциите на таложење на јоните на натриум и калиум со (цинкуранил ацетат и винска киселина), соодветно:

Има многу такви реакции кои се користат и тие ќе бидат детално разгледани во посебен дел од фармацевтската хемија во врска со неорганските супстанции.

Редокс реакции.

Редокс реакциите се користат за намалување на металите од оксидите. На пример, среброто од неговиот формалдехид оксид (реакција на сребрено огледало):

Реакцијата на оксидација на дифениламин е основа за тестирање на автентичноста на нитратите и нитритите:

Реакции на неутрализација и разградување на анјоните.

Карбонатите и бикарбонатите, под влијание на минералните киселини, формираат јаглеродна киселина, која се распаѓа на јаглерод диоксид:

Нитритите, тиосулфатите и амониумовите соли се распаѓаат слично.

Промени во бојата на безбоен пламен.Натриумовите соли го обојуваат пламенот жолто, бакар зелено, калиум виолетово, калциум тули црвено. Токму овој принцип се користи во спектроскопијата на атомска апсорпција.

Распаѓање на супстанции за време на пиролиза. Методот се користи за препарати од јод, арсен и жива. Од оние што се користат во моментов, најтипична реакција е основниот бизмут нитрат, кој, кога се загрева, се распаѓа и формира азотни оксиди:

Идентификација на органоелементни лековити супстанции.

Квалитативната елементарна анализа се користи за да се идентификуваат соединенијата што содржат арсен, сулфур, бизмут, жива, фосфор и халогени во органска молекула. Бидејќи атомите на овие елементи не се јонизирани, се користи прелиминарна минерализација за нивно идентификување, или со пиролиза или, повторно, со пиролиза со сулфурна киселина. Сулфурот се одредува со водород сулфид со реакција со калиум нитропрусид или оловни соли. Јодот исто така се одредува со пиролиза за ослободување на елементарен јод. Од сите овие реакции, од интерес е идентификацијата на арсенот, не толку како лек - тие практично не се користат, туку како метод за контрола на нечистотиите, но повеќе за тоа подоцна.

Тестирање на автентичноста на органските лековити материи.Хемиските реакции кои се користат за тестирање на автентичноста на органските лековити супстанции може да се поделат во три главни групи:
1. Општи хемиски реакции на органски соединенија;
2. Реакции на формирање на соли и сложени соединенија;
3. Реакции кои се користат за идентификување на органските бази и нивните соли.

Сите овие реакции во крајна линија се засноваат на принципите на функционална анализа, т.е. реактивниот центар на молекулата, кој кога реагира го дава соодветниот одговор. Најчесто, ова е промена во какви било својства на супстанцијата: боја, растворливост, состојба на агрегација итн.

Ајде да погледнеме неколку примери за користење на хемиски реакции за да се идентификуваат лековитите супстанции.

1. Реакции на нитрација и нитроза.Тие се користат доста ретко, на пример, за да се идентификуваат фенобарбитал, фенацетин, дикаин, иако овие лекови речиси никогаш не се користат во медицинската пракса.

2. Реакции на дијазотизација и спојување на азот. Овие реакции се користат за отворање на примарни амини. Дијазотизираниот амин се комбинира со бета-нафтол за да произведе карактеристична црвена или портокалова боја.

3. Реакции на халогенација. Се користи за отворање на алифатични двојни врски - кога се додава бромна вода, на двојната врска се додава бром и растворот станува безбоен. Карактеристична реакција на анилин и фенол - кога тие се третираат со бромна вода, се формира дериват на трибромо, кој таложи.

4. Реакции на кондензација на карбонилните соединенија. Реакцијата вклучува кондензација на алдехиди и кетони со примарни амини, хидроксиламин, хидразини и полукарбазид:

Добиените азометини (или Шифови бази) имаат карактеристична жолта боја. Реакцијата се користи за да се идентификуваат, на пример, сулфонамиди. Како алдехид се користи 4-диметиламинобензалдехид.

5. Оксидативни реакции на кондензација. Во основата е процесот на оксидативно расцепување и формирање на азометинска боја реакција на нинхидрин.Оваа реакција е широко користена за откривање и фотоколориметриско определување на α- и β-амино киселини, во чие присуство се појавува интензивна темно сина боја. Тоа е предизвикано од формирањето на супституирана сол на дикетохидринилиден дикетохидрамин, производ на кондензација на вишокот на нинхидрин и редуциран нинхидрин со амонијак ослободен за време на оксидацијата на тест амино киселината:

За да се откријат фенолите, се користи реакцијата на формирање на триарилметанските бои. Значи, фенолите комуницираат со формалдехид за да формираат бои. Слични реакции вклучуваат интеракција на резорцинол со фтален анхидрид што доведува до формирање на флуоресцентна боја - флуоресцеин.

Се користат и многу други реакции.

Од особен интерес се реакциите со формирање на соли и комплекси. Неоргански соли на железо (III), бакар (II), сребро, кобалт, жива (II) и други за тестирање на автентичноста на органските соединенија: карбоксилни киселини, вклучувајќи амино киселини, деривати на барбитурна киселина, феноли, сулфонамиди, некои алкалоиди. Формирањето на соли и сложени соединенија се случува според општата шема:

R-COOH + MX = R-COOM + HX

Комплексирањето на амини се одвива слично:

R-NH 2 + X = R-NH 2 ·X

Еден од најчестите реагенси во фармацевтската анализа е раствор од железо (III) хлорид. Во интеракција со фенолите, тој формира обоен раствор на феноксиди; тие се обоени во сина или виолетова боја. Оваа реакција се користи за откривање на фенол или резорцинол. Сепак, мета-супституираните феноли не формираат обоени соединенија (тимол).

Бакарните соли формираат сложени соединенија со сулфонамиди, солите на кобалт со барбитурати. Многу од овие реакции се користат и за квантитативно определување.

Идентификација на органски бази и нивни соли. Оваа група методи најчесто се користи во готови форми, особено во студиите за раствори. Така, солите на органските амини, при додавање на алкалии, формираат талог од база (на пример, раствор на папаверин хидрохлорид), и обратно, солите на органските киселини, при додавање на минерална киселина, формираат талог од органско соединение. (на пример, натриум салицилат). За да се идентификуваат органските бази и нивните соли, широко се користат таканаречените реагенси за таложење. Познати се повеќе од 200 реагенси за таложење кои формираат едноставни или сложени соли нерастворливи во вода со органски соединенија. Најчесто користените решенија се дадени во вториот том од 11-тото издание на Глобалниот фонд. Примерите вклучуваат:
Реагенс на Шајблер - фосфотангстична киселина;
Пикринска киселина
Стифинска киселина
Пикраминска киселина

Сите овие реагенси се користат за таложење на органски бази (на пример, нитроксолин).

Треба да се напомене дека сите овие хемиски реакции се користат за да се идентификуваат лековитите супстанции не самостојно, туку во комбинација со други методи, најчесто физичко-хемиски, како што се хроматографија и спектроскопија. Генерално, потребно е да се обрне внимание дека проблемот со автентичноста на лековитите супстанции е клучен, бидејќи овој факт ја одредува безопасноста, безбедноста и ефективноста на лекот, затоа мора да се посвети големо внимание на овој индикатор и да се потврди автентичноста на супстанцијата со еден метод не е доволно.

Општи барања за тестови за чистота.

Друг подеднакво важен индикатор за квалитетот на лекот е чистотата. Сите лекови, без оглед на начинот на нивната подготовка, се тестираат за чистота. Во овој случај, се одредува содржината на нечистотии во лекот. Нечистотиите грубо може да се поделат во две групи: прво, нечистотии кои имаат фармаколошко дејство врз телото; второ, нечистотии, што укажува на степенот на прочистување на супстанцијата. Вторите не влијаат на квалитетот на лекот, но во големи количини ја намалуваат неговата доза и, соодветно, ја намалуваат активноста на лекот. Затоа, сите фармакопеи поставуваат одредени граници за овие нечистотии во медицинските производи. Така, главниот критериум за добар квалитет на лекот е отсуството на нечистотии, што по природа е невозможно. Концептот на отсуство на нечистотии е поврзан со границата за откривање на еден или друг метод.

Физичките и хемиските својства на супстанциите и нивните раствори даваат приближна идеја за присуството на нечистотии во лековите и ја регулираат нивната соодветност за употреба. Затоа, со цел да се процени добриот квалитет, заедно со утврдување на автентичноста и одредување на квантитативната содржина, се вршат голем број физички и хемиски тестови за да се потврди степенот на неговата чистота:

Транспарентност и заматеностсе одредува со споредба со стандард за заматеност, а бистрината се одредува со споредба со растворувач.

Chroma.Промената во степенот на бојата може да се должи на:
а) присуство на туѓи обоени нечистотии;
б) хемиска промена во самата супстанција (оксидација, интеракција со Me +3 и +2 или други хемиски процеси што се случуваат со формирање на обоени производи. На пример:

Резорцинолот станува жолт за време на складирањето поради оксидација под влијание на атмосферскиот кислород за да формира кинони. Во присуство, на пример, на железни соли, салицилната киселина добива виолетова боја поради формирање на железни салицилати.

Проценката на бојата се врши врз основа на резултатите од споредбата на главниот експеримент со стандардите за боја, а безбојноста се одредува со споредба со растворувач.

Многу често, тест заснован на нивната интеракција со концентрирана сулфурна киселина, која може да дејствува како оксидирачки агенс или средство за дехидрација, се користи за откривање на нечистотии на органски материи. Како резултат на таквите реакции се формираат обоени производи.Интензитетот на добиената боја не треба да го надминува соодветниот стандард на боја.

Одредување на степенот на белина на лековите во прав– физички метод првпат вклучен во Државниот фонд X1. Степенот на белина (сенка) на цврстите лековити материи може да се процени со различни инструментални методи врз основа на спектралните карактеристики на светлината што се рефлектира од примерокот. За да го направите ова, се користат коефициенти на рефлексија при осветлување на примерокот со бела светлина добиена од посебен извор, со спектрална дистрибуција или помината низ светлосни филтри (со максимален пренос од 614 nm (црвено) или 439 nm (сино)). Можете исто така да ја измерите рефлексијата на светлината помината низ зелен филтер.

Попрецизна проценка на белината на лековитите супстанции може да се изврши со помош на спектрофотометри на рефлексија. Вредноста на степенот на белина и степенот на осветленост се карактеристики на квалитетот на бели и бели со лековити нијанси. Нивните дозволени граници се регулирани во приватни написи.

Одредување на киселост, алкалност, pH вредност.

Промената на овие индикатори се должи на:
а) промена во хемиската структура на самата медицинска супстанција:

б) интеракција на лекот со контејнерот, на пример, надминување на дозволените граници на алкалност во растворот на новокаина поради истекување на стаклото;
в) апсорпција на гасовити производи (CO 2, NH 3) од атмосферата.

Утврдувањето на квалитетот на лековите врз основа на овие индикатори се врши на неколку начини:

а) со промена на бојата на индикаторот, на пример, мешавината на минерални киселини во борна киселина се одредува со метил црвената, која не ја менува својата боја од дејството на слабата борна киселина, туку станува розова ако содржи минерални нечистотии киселини.

б) титриметриски метод - на пример, за да се утврди дозволената граница за содржината на јодна киселина формирана при складирање на 10% алкохолен раствор од I 2, титрацијата се врши со алкали (не повеќе од 0,3 ml 0,1 mol/l NaOH по волумен на титрант). (Раствор на формалдехид - титриран со алкали во присуство на фенолфталеин).

Во некои случаи, GF го поставува волуменот на титрантот за да ја одреди киселоста или алкалноста.

Понекогаш последователно се додаваат два титрирани раствори: прво киселина, а потоа алкали.

в) со одредување на pH вредноста - за одреден број лекови (и нужно за сите раствори за инјектирање), според NTD е предвидено да се определи pH вредноста.

Техники за подготовка на супстанција при проучување на киселост, алкалност, pH вредност

Подготовка на раствор со одредена концентрација наведена во техничката документација (за супстанции растворливи во вода)
За оние кои се нерастворливи во вода, подгответе суспензија со одредена концентрација и утврдете ги киселинско-базните својства на филтратот.
За течни препарати кои не се мешаат со вода, протресете со вода, потоа одделете го водениот слој и утврдете ги неговите киселинско-базни својства.
За нерастворливи цврсти материи и течности, определувањето може да се изврши директно во суспензија (ZnO)

PH вредноста приближно (до 0,3 единици) може да се одреди со помош на хартија за индикатор или универзален индикатор.

Колориметрискиот метод се заснова на својството на индикаторите да ја менуваат нивната боја во одредени рН опсези. За извршување на тестовите се користат пуферски раствори со константна концентрација на водородни јони, кои се разликуваат едни од други по pH вредност од 0,2. Истата количина (2-3 капки) индикатор се додава на низа такви раствори и на тест растворот. Со совпаѓање на бојата со еден од пуферските раствори, се проценува pH вредноста на растворот за тестирање.

Одредување на испарливи материи и вода.

Испарливите супстанции можат да навлезат во лекови или како резултат на лошо прочистување од растворувачи или посредници, или како резултат на акумулација на производи на распаѓање. Водата во лековитата супстанција може да се содржи во форма на капиларна, апсорбирана врзана, хемиски врзана (хидрат и кристален хидрат) или слободна.

За одредување на испарливи материи и вода, се користат методи на сушење, дестилација и титрација со раствор на Фишер.

Метод на сушење.Методот се користи за одредување на губење на тежината за време на сушењето. Загубите може да се должат на содржината на хигроскопна влага и испарливи материи во супстанцијата. Се суши во шише до постојана тежина на одредена температура. Почесто, супстанцијата се чува на температура од 100-105 ºС, но условите за сушење и доведување до постојана маса може да бидат различни.

Определувањето на испарливи материи може да се изврши за некои производи со калцинирање. Супстанцијата се загрева во сад додека испарливите материи целосно не се отстранат. потоа постепено зголемувајте ја температурата додека целосно не се калцинира на црвена топлина. На пример, GFC го регулира одредувањето на нечистотии на натриум карбонат во медицинската супстанција натриум бикарбонат со методот на калцинација. Натриум бикарбонат се распаѓа на натриум карбонат, јаглерод диоксид и вода:

Теоретски, губењето на тежината е 36,9%. Според GFC, губењето на тежината треба да биде најмалку 36,6%. Разликата помеѓу теоретската и загубата на масата наведена во GPC ја одредува дозволената граница за нечистотии на натриум карбонат во супстанцијата.

Метод на дестилацијаво GF 11 се нарекува „Определување на вода“, ви овозможува да одредите хигроскопска вода. Овој метод се заснова на физичкото својство на испарувањата на две течности што не се мешаат. Мешавина од вода и органски растворувач се дестилира на пониска температура од која било течност. GPC1 препорачува користење толуен или ксилен како органски растворувач. Содржината на вода во супстанцијата за испитување се одредува според нејзиниот волумен во ресиверот по завршувањето на процесот на дестилација.

Титрација со реагенс Фишер.Методот ви овозможува да ја одредите вкупната содржина и на слободна и на кристална хидратна вода во органски и неоргански супстанции и растворувачи. Предноста на овој метод е неговата брзина и селективност во однос на водата. Растворот на Фишер е раствор од сулфур диоксид, јод и пиридин во метанол. Недостатоците на методот, покрај потребата за строго придржување кон затегнатоста, вклучуваат неможност да се одреди вода во присуство на супстанции кои реагираат со компонентите на реагенсот.

Дефиниција за пепел.

Содржината на пепел е предизвикана од минерални нечистотии кои се појавуваат во органските материи при процесот на добивање на помошни материјали и опрема (првенствено метални катјони) од почетните производи, т.е. го карактеризира присуството на неоргански нечистотии во органските материи.

А) Вкупен пепел– утврден со резултатите од согорувањето (пепелување, минерализација) на висока температура, го карактеризира збирот на сите неоргански нечистотии.

Состав на пепел:
Карбонати: CaCO 3, Na 2 CO 3, K 2 CO 3, PbCO 3
Оксиди: CaO, PbO
Сулфати: CaSO 4
Хлориди: CaCl 2
Нитрати: NaNO 3

При добивање лекови од растителни материјали, минералните нечистотии можат да бидат предизвикани од контаминација на растенијата со прашина, апсорпција на микроелементи и неоргански соединенија од почвата, водата итн.

б) Пепел, нерастворлив во хлороводородна киселина, добиен по третирање на вкупниот пепел со разреден HCl. Хемискиот состав на пепелта е хлориди на тешки метали (AgCl, HgCl 2, Hg 2 Cl 2), т.е. високо токсични нечистотии.

V) Сулфатен пепел– Сулфатната пепел се одредува при проценка на добриот квалитет на многу органски материи. Ги карактеризира Mn +n нечистотиите во стабилна сулфатна форма. Добиената сулфатна пепел (Fe 3 (SO 4) 2, PbSO 4, CaSO 4) се користи за последователно определување на нечистотии од тешки метали.

Нечистотии на неоргански јони – С1 –, SO 4 -2, NН 4 +, Ca +2, Fe +3(+2), Рв +2, Аs +3(+5)

Неприфатливи нечистотии:
а) токсични нечистотии (CN нечистотија во јод),
б) има антагонистички ефект (Na и K, Mg и Ca)

Отсуството на нечистотии кои не се дозволени во лековитата супстанција се одредува со негативна реакција со соодветните реагенси. Во овој случај се врши споредба со дел од растворот на кој се додадени сите реагенси, освен главниот што ја отвора оваа нечистотија (контролен експеримент). Позитивната реакција укажува на присуство на нечистотија и лош квалитет на лекот.

Прифатливи нечистотии -нечистотии кои не влијаат на фармаколошкото дејство и чија содржина е дозволена во мали количини утврдени со техничките прописи.

За да се утврди дозволената граница за содржината на јонски нечистотии во лековите, се користат стандардни раствори кои го содржат соодветниот јон во одредена концентрација.

Некои лековити супстанции се тестираат за присуство на нечистотии користејќи метод на титрација, на пример, одредување на нечистотијата на норсулфазол во лекот фталазол. Нечистотијата на норсулфазолот во фталазолот се одредува квантитативно со нитритометрија. За да се титрира 1 g фталазол, не треба да се конзумира повеќе од 0,2 ml од 0,1 mol/l NaNO2.

Општи барања за реакции кои се користат при тестирање за прифатливи и неприфатливи нечистотии:
1. чувствителност,
2. специфичност,
3. репродуктивност на користената реакција.

Резултатите од реакциите кои настануваат со формирање на обоени производи се забележани во рефлектираната светлина на мат бела позадина, а бели талози во форма на заматеност и опалесценција се забележани во пренесената светлина на црна позадина.

Инструментални методи за одредување на нечистотии.

Со развојот на аналитичките методи, барањата за чистота на лековитите супстанции и дозираните форми постојано се зголемуваат. Во современите фармакопеи, заедно со дискутираните методи, се користат и различни инструментални методи, базирани на физичко-хемиските, хемиските и физичките својства на супстанциите. Употребата на УВ и видливата спектроскопија ретко дава позитивни резултати и тоа се должи на фактот што структурата на нечистотиите, особено органските лекови, обично е различна. Тие се блиску до структурата на самиот лек, така што спектрите на апсорпција се разликуваат малку, а концентрацијата на нечистотијата е обично десетици пати помала од главната супстанција, што ги прави методите за диференцијална анализа со мала употреба и овозможува да се процени нечистотијата. само приближно, т.е., како што обично се нарекува полуквантитативно. Резултатите се нешто подобри ако едната супстанција, особено нечистотијата, формира сложено соединение, а другата не, тогаш максимумите на спектрите значително се разликуваат и веќе е можно квантитативно да се одредат нечистотиите.

Во последниве години, уредите IR-Fourier се појавија во претпријатијата, што овозможува да се одреди и содржината на главната супстанција и нечистотиите, особено водата, без да се уништи примерокот, но нивната употреба е попречена од високата цена на уредите и недостаток на стандардизирани методи за анализа.

Одлични резултати во одредувањето на нечистотиите се можни кога нечистотијата флуоресира под влијание на УВ зрачењето. Точноста на ваквите анализи е многу висока, како и нивната чувствителност.

Широко се користи за тестирање на чистотата и квантитативно определување на нечистотии и во лековити супстанции (супстанции) и во дозирани форми, што можеби не е помалку важно, бидејќи При складирањето на лековите се формираат многу нечистотии, добиени со хроматографски методи: HPLC, TLC, GLC.

Овие методи овозможуваат да се одредат нечистотиите квантитативно, и секоја од нечистотиите поединечно, за разлика од другите методи. ХПЛЦ и ГЛЦ методите на хроматографија детално ќе бидат разгледани во предавањето на проф. Мјагких В.И. Ќе се фокусираме само на тенкослојната хроматографија. Методот на хроматографија со тенок слој е откриен од рускиот научник Цвет и првично постоел како хроматографија на хартија. Тенослојната хроматографија (TLC) се заснова на разликата во брзината на движење на компонентите на анализираната смеса во рамен тенок слој сорбент кога растворувач (елуент) се движи низ него. Сорбентите се силика гел, алуминиум оксид и целулоза. Полиамид, елуенти се органски растворувачи со различни поларитети или нивни мешавини едни со други, а понекогаш и со раствори на киселини или алкалии и соли. Механизмот на раздвојување се одредува со коефициентите на дистрибуција помеѓу сорбентот и течната фаза на супстанцијата што се испитува, што пак е поврзано со многу, вклучувајќи хемиски и физичко-хемиски својства на супстанциите.

Во TLC, површината на алуминиумска или стаклена плоча е обложена со суспензија на сорбент, се суши на воздух и се активира за да се отстранат трагите од растворувач (влага). Во пракса, обично се користат индустриски плочи со фиксиран слој на сорбент. На сорбентниот слој се нанесуваат капки од анализираниот раствор со волумен од 1-10 μl. Работ на плочата е потопен во растворувач. Експериментот се изведува во посебна комора - стаклен сад затворен со капак. Растворувачот се движи низ слојот под дејство на капиларните сили. Можно е истовремено раздвојување на неколку различни мешавини. За да се зголеми ефикасноста на раздвојувањето, користете повеќе елуции или во нормална насока со ист или различен елуент.

По завршувањето на процесот, плочата се суши на воздух и положбата на хроматографските зони на компонентите се одредува на различни начини, на пример, со зрачење со УВ зрачење, прскање со реагенси за боење и се чува во јодска пареа. Во добиената слика за дистрибуција (хроматограм), хроматографските зони на компонентите на смесата се лоцирани во форма на дамки во согласност со нивната сорбливост во даден систем.

Положбата на хроматографските зони на хроматограмот се карактеризира со вредноста на Rf. што е еднакво на односот на патеката l i што ја минува i-тата компонента од почетната точка до патеката Vп R f = l i / l.

Вредноста на R f зависи од коефициентот на дистрибуција (адсорпција) K i и односот на волумените на мобилната (V p) и стационарната (V n) фаза.

Раздвојувањето во TLC е под влијание на голем број фактори - составот и својствата на елуентот, природата, дисперзијата и порозноста на сорбентот, температурата, влажноста, големината и дебелината на слојот сорбент и димензиите на комората. Стандардизацијата на експерименталните услови овозможува да се постави Rf со релативно стандардно отстапување од 0,03.

Идентификацијата на компонентите на смесата се врши со вредностите на R f. Квантитативното определување на супстанциите во зоните може да се изврши директно на сорбентниот слој според областа на хроматографската зона, интензитетот на флуоресценција на компонентата или неговата поврзаност со соодветен реагенс или со радиохемиски методи. Инструментите за автоматско скенирање се користат и за мерење на апсорпцијата, преносот, одразот на светлината или радиоактивноста на хроматографските зони. Одделените зони може да се отстранат од плочата заедно со сорбентниот слој, компонентата може да се десорбира во растворувачот и растворот може да се анализира спектрофотометриски. Со користење на TLC, можно е да се одредат супстанции во количини од 10 -9 до 10 -6; грешката во одредувањето е најмалку 5-10%.

Како што е познато, фармакопејската анализа има за цел да ја утврди автентичноста, да ја одреди чистотата и да ја измери активната супстанција или состојките на сложената дозирана форма. И покрај фактот дека секоја од овие фази на фармакопеја анализа решава свој специфичен проблем, тие не можат да се разгледуваат изолирано. Така, извршувањето на реакција на автентичност понекогаш дава одговор на присуството или отсуството на одредена нечистотија. Во препаратот PAS-Na, се врши квалитативна реакција со раствор од железо (III) хлорид (како дериват на салицилна киселина формира виолетово-црвена боја). Но, појавата на талог во овој раствор по три часа укажува на присуство на мешавина од 5-аминосалицилна киселина, која не е фармаколошки активна. Сепак, ваквите примери се доста ретки.

Одредувањето на одредени константи - точка на топење, густина, специфичен индекс на апсорпција - овозможува истовремено да се извлече заклучок за автентичноста и чистотата на дадената супстанција. Бидејќи методите за определување на одредени константи за различни лекови се идентични, ние ги проучуваме во општи методи на анализа. Ќе ви треба познавање на теоретските основи и способност да донесувате определби во последователната анализа на различни групи на лекови.

Фармакопејската анализа е составен дел на фармацевтската анализа и е збир на методи за проучување на лекови и дозирани форми, утврдени во Државната фармакопеја и други ND (FS, FSP, GOST) и се користат за одредување на автентичноста, чистотата и квантитативната анализа.

Во контролата на квалитетот на лековите се користат физички, физичко-хемиски, хемиски и биолошки методи на анализа. НД тестовите вклучуваат неколку главни фази:

опис;

растворливост;

автентичност;

физички константи (точки на топење, вриење или дестилација, индекс на прекршување, специфична ротација, густина, спектрални карактеристики);

транспарентност и боја на решенија;

киселост или алкалност, pH на растворот;

определување на нечистотии;

губење на тежината при сушење;

сулфатен пепел;

квантификација.

Во зависност од природата на лекот, некои од овие тестови може да бидат или отсутни или други вклучени, како што се киселинската вредност, вредноста на јод, вредноста на сапонификација итн.

Приватна фармакопеја монографија за кој било лек започнува со дел "Опис",што главно ги карактеризира физичките својства на супстанцијата:

состојба на агрегација (цврста, течна, гасна), ако супстанцијата е цврста, тогаш се одредува степенот на нејзината дисперзија (ситно-кристална, грубо-кристална) и формата на кристалите (иглести, цилиндрични).

боја на супстанцијата – важен показател за автентичност и чистота. Повеќето лекови се безбојни, односно се бели. Боење визуелно при одредување на состојбата на агрегација. Мала количина од супстанцијата се става во тенок слој на Петри чинија или стакло за часовник и се гледа на бела позадина. Во Државниот фонд X1 има статија „Одредување на степенот на белина на лекови во прав“. Определувањето се врши со помош на инструментален метод со помош на специјални фотометри „Specol-10“. Се заснова на спектралните карактеристики на светлината што се рефлектира од примерокот на лекот. Тие го мерат т.н коефициент на рефлексија– односот на големината на рефлектираниот светлосен флукс со големината на инцидентот. Измерените рефлексии овозможуваат да се одреди присуството или отсуството на боја или сивкаста нијанса во супстанциите со пресметување на степенот на белина (α) и степенот на осветленост (β). Бидејќи појавата на нијанси или промена на бојата е, по правило, последица на хемиски процеси - оксидација, редукција, дури и оваа почетна фаза на проучување на супстанции ни овозможува да извлечеме заклучоци. Ова методот е исклучен од изданието GF X11.

Мирис ретко се одредува веднаш по отворањето на пакувањетона растојание од 4-6 см. Без мирис по отворањето на пакувањето веднаш според методот: 1-2 g од супстанцијата се рамномерно распоредени на часовно стакло со дијаметар од 6-8 cm и по 2 минути мирисот се одредува на растојание од 4-6 cm.

Може да има инструкции во делот „Опис“. за можноста за промени во материите при складирањето. На пример,во препаратот на калциум хлорид е наведено дека е многу хигроскопен и се раствора во воздухот, а натриум јодид - во воздухот станува влажен и се распаѓа со ослободување на јод; кристални хидрати, во случај на атмосферски влијанија или неусогласеност со условите на кристализација во производството, повеќе нема да има посакуваниот изглед или облик кристали, ниту боја.

Така, проучувањето на изгледот на супстанцијата е првата, но многу важна фаза во анализата на супстанциите и неопходно е да се способни промените во изгледот да се поврзат со можни хемиски промени и да се извлече правилен заклучок.

Растворливост(ГФ XI, број 1, стр. 175, ГФ XII, број 1, стр. 92)

Растворливоста е важен показател за квалитетот на супстанцијата на лекот. Како по правило, RD содржи одредена листа на растворувачи кои најцелосно го карактеризираат ова физичко својство, така што во иднина може да се користи за проценка на квалитетот во една или друга фаза од проучувањето на оваа медицинска супстанција. Така, растворливоста во киселини и алкалии е карактеристична за амфотерични соединенија (цинк оксид, сулфонамиди), органски киселини и бази (глутаминска киселина, ацетилсалицилна киселина, кодеин). Промената на растворливоста укажува на присуство или појава при складирање на помалку растворливи нечистотии, што ја карактеризира промената на нејзиниот квалитет.

Во SP XI, растворливост значи не физичка константа, туку својство изразено со приближни податоци и служи за приближните карактеристики на лековите.

Заедно со точката на топење, растворливоста на супстанцијата при константна температура и притисок е еден од параметрите, според кој воспоставуваат автентичноста и чистотата (добар квалитет) на речиси сите лекови.

Се препорачува да се користат растворувачи со различни поларитети (обично три); Не се препорачува употреба на растворувачи со малку вриење и запаливи (диетил етер) или многу токсични (бензен, метилен хлорид).

Фармакопеја XI ед. прифатени два начина за изразување на растворливост :

Во делови (однос на супстанција и растворувач). На пример, за натриум хлорид според FS, растворливоста во вода се изразува во сооднос 1:3, што значи дека не се потребни повеќе од 3 ml вода за растворање на 1 g од супстанцијата на лекот.

Во конвенционални термини(GF XI, стр. 176). На пример, за натриум салицилат во PS растворливоста е дадена во условна смисла - „многу лесно растворлив во вода“. Тоа значи дека за растворање на 1 g супстанција е потребно до 1 ml вода.

Фармакопеја XII издание само во условно (во однос на 1 g)

Конвенционалните термини и нивното значење се дадени во табела. 1. (ГФ XI, број 1, стр. 176, ГФ XII, број 1, стр. 92).

Конвенционални термини за растворливост

Условни услови	Кратенки	Количина на растворувач (ml), потребни за растворање 1гр супстанции
Многу лесно растворлив
Лесно растворлив		Повеќе од 1 до 10
Ајде да се раствориме
Умерено растворлив
Малку растворлив		» 100 до 1000
Многу малку растворлив		» 1000 до 10000
Практично нерастворлив

Условниот термин одговара на одреден опсег на волумени на растворувачи (ml), во рамките на кои треба да дојде до целосно растворање на еден грам од супстанцијата на лекот.

Процесот на растворање се изведува во растворувачи на температура 20°С. За да се спаси медицинската супстанција и растворувачот, масата на лекот се мери на таков начин (со точност од 0,01 g) што не се трошат повеќе од 100 ml за да се утврди растворливоста во водата, а не повеќе од 10- 20 ml органски растворувачи.

Медицинска супстанција (супстанција) се смета за растворлив , ако во растворот не се откријат честички од супстанцијата кога се набљудуваат во пропуштената светлина.

Методологија . (1 начин).Измерената маса на лекот, претходно сомелена во фин прав, се додава на измерениот волумен на растворувач што одговара на неговиот минимален волумен и се протресува. Потоа, во согласност со табелата. 1, постепено додавајте го растворувачот до неговиот максимален волумен и протресете непрекинато 10 минути. По ова време, не треба да се детектираат честички од супстанцијата во растворот со голо око. На пример, измерете 1 g натриум бензоат, ставете го во епрувета со 1 ml вода, протресете и постепено додајте 9 ml вода, бидејќи натриум бензоат е лесно растворлив во вода (од 1 до 10 ml).

За полека растворливлекови за кои е потребно повеќе од 10 минути за целосно растворање, Дозволено е загревање во водена бања до 30°C.Набљудувањето се врши по ладење на растворот на 20°C и силно протресување 1-2 минути. На пример, кофеинот е полека растворлив во вода (1:60), кодеинот е бавно и малку растворлив во вода (100-1000), калциум глуконат е полека растворлив во 50 делови од вода, калциум лактат е полека растворлив во вода, борна киселина полека се раствора за 7 часа .глицерин.

Метод 2. Растворливоста, изразена во делови, го покажува волуменот на растворувачот во ml потребен за растворање на 1 g од супстанцијата.

Методологија. (2-ри метод) Масата на лекот измерена на рачна вага се раствора во наведениот ND волумен на растворувач. Во растворот не треба да има честички од нерастворена супстанција.

Растворливоста во делови е индицирана во фармакопејските монографии за следните лекови: борна киселина(се раствораат во 25 делови од вода, 25 делови од алкохол, 4 делови од врела вода); калиум јодид(растворлив во 0,75 делови вода, 12 делови алкохол и 2,5 делови глицерин); натриум бромид(растворлив во 1,5 делови од вода, 10 делови од алкохол); калиум бромид(растворлив во 1,7 делови од вода и мешан алкохол); калиум хлорид и натриум хлорид(р. во 3 часа вода).

Во случај на тестирање, на пример, натриум бромид, постапете на следниов начин: измерете 1 g натриум бромид на рачна вага, додадете 1,5 ml вода и протресете додека целосно не се раствори.

Општа фармакопеја монографија " Растворливост » SP XII издание е дополнето со опис на методи за определување на растворливост на супстанции со непозната и позната растворливост.

Точка на топење (Т ° pl)

Точката на топење е постојана карактеристика чистотасупстанции а воедно и неговата автентичност. Од физиката е познато дека точката на топење е температурата на која цврстата фаза на супстанцијата е во рамнотежа со топењето. Чистата супстанција има јасна точка на топење. Бидејќи лековите може да имаат мала количина на нечистотии, повеќе нема да гледаме толку јасна слика. Во овој случај, се одредува интервалот во кој супстанцијата се топи. Обично овој интервал е во рамките на 2 ◦ C. Попродолжен интервал укажува на присуство на нечистотии во неприфатливи граници.

Според формулацијата на Државниот фонд Х1 под точка на топењесупстанции разбираат температурниот интервал помеѓу почетокот на топењето (појавата на првата капка течност) и крајот на топењето (целосен премин на супстанцијата во течна состојба).

Ако супстанцијата има нејасен почеток или крај на топење, определи температура само на почетокот или крајот на топењето. Понекогаш супстанцијата се топи со распаѓање, во овој случај се одредува температура на распаѓање, односно температурата на која се јавува ненадејна промена во супстанцијата(на пр. пенење).

Методи определување на точка на топење

Изборот на методот е диктиран две точки:

стабилност на супстанцијата при загревање и

способност да се меле во прав.

Според изданието GF X1, постојат 4 начини да се одреди Т ° pl:

Метод 1 – за супстанции кои можат да се сомелат во прав и се стабилни кога се загреваат

Метод 1а – за супстанции кои можат да се сомелат во прав, Неотпорен на топлина

Методи 2 и 3 - за супстанции кои не се тритурираат во прав

Методите 1, 1а и 2 вклучуваат употреба на 2 уреди:

PTP ( уред за одредување на Tmel): Ви е познат од курсот по органска хемија, ви овозможува да ја одредите точката на топење на супстанциите во од 20 ◦ Од до 360 ◦ СО

Уред кој се состои од колба со тркалезно дно во која е запечатена епрувета, во која е вметнат термометар со прикачен капилар што ја содржи почетната супстанција. Надворешната колба се полни до ¾ од волуменот со течност за ладење:

вода (ви овозможува да одредите топење до 80 ◦ C),

Вазелин масло или течни силикони, концентрирана сулфурна киселина (ви овозможува да го одредите топењето до 260 ◦ C),

мешавина од сулфурна киселина и калиум сулфат во сооднос 7:3 (ви овозможува да го одредите Tmel над 260 ◦ C)

Техниката е општа, без оглед на уредот.

Ситно мелената сува материја се става во капилар со средна големина (6-8 см) и се внесува во уредот на температура за 10 степени пониска од очекуваната. Со прилагодување на стапката на пораст на температурата, се запишува температурниот опсег на промени во супстанцијата во капиларот. Во исто време се вршат најмалку 2 определувања и се зема аритметичкиот просек.

Точката на топење се одредува не само за чистите супстанции, туку и за нивните деривати– оксими, хидразони, бази и киселини изолирани од нивните соли.

За разлика од GF XI во GF XIIед. температура на топење во капиларна метода значи не интервалот помеѓу почетокот и крајот на топењето, туку крајна температура на топење , што е во согласност со Европската фармакопеја.

Ограничувања на температурата на дестилација (Т° кип.)

Вредноста на GF е дефинирана како интервал помеѓу почетната и крајната точка на вриење при нормален притисок. (101,3 kPa – 760 mmHg). Интервалот е обично 2 °.

Под почетнатаТочка на вриење разберете ја температурата на која првите пет капки течност се дестилирани во ресиверот.

Под финалето– температурата на која 95% од течноста поминува во ресиверот.

Попродолжен интервал отколку што е наведен во соодветниот FS укажува на присуство на нечистотии.

Уредот за одредување на ТЕ се состои од

колба отпорна на топлина со термометар во кој се става течноста,

фрижидер и

приемна колба (градиран цилиндар).

Трговско-индустриска комора, забележано експериментално доведува до нормален притисокспоред формулата:

Tispr = Tnabl + K (r – r 1)

Каде: p – нормален барометриски притисок (760 mm Hg)

р 1 – барометриски притисок за време на експериментот

K – зголемување на точката на вриење на 1 mm притисок

Така, одредување на температурните граници на дестилација се утврди автентичност и чистота етер, етанол, хлороетил, флуоротан.

GFS GF XII " Одредување на температурни граници за дестилација » дополнето со дефиниција точки на вриење а приватно ФС препорачува утврдување стврднување или точка на вриење за течни лекови.

Густина(GF XI, број 1, стр. 24)

Густина е масата по единица волумен на супстанцијата. Изразено во g/cm3.

ρ = м/ В

Ако масата се мери во грами, а волуменот во cm3, тогаш густината е масата од 1 cm3 од супстанцијата.

Густината се одредува со помош на пикнометар (до 0,001). или хидрометар (точност на мерење до 0,01)

За дизајнот на уредите, погледнете го изданието GF X1.