ការកំណត់បរិមាណនៃ peptides ដោយ HPLC ។ ការព្យាករណ៍នៃបរិមាណរក្សាទុក និងកាំរស្មី UV នៃ peptides ក្នុងដំណាក់កាលបញ្ច្រាស HPLC

PEPTIDESធម្មជាតិ ឬសំយោគ។ សមាសធាតុដែលជាម៉ូលេគុលដែលត្រូវបានបង្កើតឡើងពីសំណល់អាស៊ីតអាមីណូដែលតភ្ជាប់ទៅគ្នាទៅវិញទៅមកដោយចំណង peptide (amide) C(O) NH ។ ម៉ូលេគុលក៏អាចមានសមាសធាតុអាស៊ីតអាមីណូ (ឧទាហរណ៍ សំណល់កាបូអ៊ីដ្រាត)។ ដោយផ្អែកលើចំនួននៃសំណល់អាស៊ីតអាមីណូរួមបញ្ចូលនៅក្នុងម៉ូលេគុល peptide, di-peptides, tripeptides, tetrapeptides ជាដើមត្រូវបានសម្គាល់។ Peptides ដែលមានសំណល់អាស៊ីតអាមីណូរហូតដល់ 10 ត្រូវបានគេហៅថា។ oligopeptides ដែលមានសំណល់អាស៊ីតអាមីណូច្រើនជាង 10 polypeptides Pri polypeptides ជាមួយ mol ។ m. ជាង 6 ពាន់ឈ្មោះ។ ប្រូតេអ៊ីន

ឯកសារយោងប្រវត្តិសាស្ត្រ។ជាលើកដំបូង peptides ត្រូវបានញែកចេញពីប្រូតេអ៊ីនអ៊ីដ្រូលីសេត។ ពាក្យ "peptides" ត្រូវបានស្នើឡើងដោយ E. Fischer ។ peptide សំយោគដំបូងត្រូវបានទទួលដោយ T. Curtius ក្នុងឆ្នាំ 1881 ។ E. Fischer នៅឆ្នាំ 1905 បានបង្កើតវិធីសាស្រ្តទូទៅដំបូងសម្រាប់ការសំយោគ peptides និងសំយោគចំនួន oligopeptides ។ អគារ។ សត្វ សិស្សរបស់ E. Fischer E. Abdergalden, G. Leike និង M. Bergman បានចូលរួមចំណែកក្នុងការអភិវឌ្ឍន៍គីមីវិទ្យា peptide ។ នៅឆ្នាំ 1932 លោក M. Bergman និង L. Zerwas បានប្រើក្រុម benzyloxycarbonyl (ក្រុម carbobenzoxy) ក្នុងការសំយោគ peptides ដើម្បីការពារក្រុម a-amino នៃអាស៊ីតអាមីណូ ដែលបានសម្គាល់ដំណាក់កាលថ្មីមួយក្នុងការអភិវឌ្ឍនៃការសំយោគ peptide ។ អាស៊ីតអាមីណូការពារ N-protected (អាស៊ីត N-carbobenzoxyamino) ត្រូវបានគេប្រើយ៉ាងទូលំទូលាយដើម្បីទទួលបាន peptides ផ្សេងៗ ដែលត្រូវបានប្រើដោយជោគជ័យដើម្បីសិក្សាបញ្ហាសំខាន់ៗមួយចំនួនក្នុងគីមីវិទ្យា និងជីវគីមីនៃ B-B ទាំងនេះ ឧទាហរណ៍ ដើម្បីសិក្សាពីភាពជាក់លាក់នៃស្រទាប់ខាងក្រោម។ proteolytic ។ អង់ស៊ីម។ peptides ធម្មជាតិ (glutathione, carnosine ជាដើម) ត្រូវបានសំយោគជាលើកដំបូងដោយប្រើអាស៊ីត N-carbobenzoxyamino ។ សមិទ្ធិផលដ៏សំខាន់មួយនៅក្នុងតំបន់នេះបានអភិវឌ្ឍនៅដើមដំបូង។ 50 ស P. Vaughan et al. ការសំយោគ peptides ដោយប្រើវិធីសាស្រ្ត anhydride ចម្រុះ (វិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការសំយោគ peptide ត្រូវបានពិភាក្សាលម្អិតខាងក្រោម)។ នៅឆ្នាំ 1953 V. Du Vigneault បានសំយោគអរម៉ូន peptide ដំបូងបង្អស់គឺអុកស៊ីតូស៊ីន។ ដោយផ្អែកលើគោលគំនិតនៃការសំយោគ peptide ដំណាក់កាលរឹងដែលត្រូវបានបង្កើតឡើងដោយ P. Merrifield ក្នុងឆ្នាំ 1963 ស្វ័យប្រវត្តិត្រូវបានបង្កើតឡើង។ ឧបករណ៍សំយោគ peptide ។ វិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការសំយោគអង់ស៊ីមដែលបានគ្រប់គ្រងនៃ peptides បានទទួលការអភិវឌ្ឍន៍ដែលពឹងផ្អែកខ្លាំង។ ការ​ប្រើ​វិធីសាស្ត្រ​ថ្មី​នេះ​បាន​ធ្វើ​ឱ្យ​វា​អាច​សំយោគ​អ័រម៉ូន​អាំង​ស៊ុយ​លីន​។​ល​។

ជោគជ័យនៃសំយោគ គីមីវិទ្យា peptide ត្រូវបានរៀបចំដោយការជឿនលឿនក្នុងការអភិវឌ្ឍវិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការបំបែក ការបន្សុត និងការវិភាគនៃ peptides ដូចជាការផ្លាស់ប្តូរ ion chromatography, decomposition electrophoresis ។ ប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយ ការច្រោះជែល ដំណើរការខ្ពស់ ក្រូម៉ាតូក្រាមរាវ (HPLC) សារធាតុ immunochemical ។ ការវិភាគ។ល។ វិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការវិភាគក្រុមចុង និងវិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការបំបែក peptides ជាជំហានៗក៏ទទួលបានការអភិវឌ្ឍន៍ដ៏អស្ចារ្យផងដែរ។ ជាពិសេសប្រព័ន្ធស្វ័យប្រវត្តិត្រូវបានបង្កើតឡើង។ ឧបករណ៍វិភាគអាស៊ីតអាមីណូ និងស្វ័យប្រវត្តិ ឧបករណ៍សម្រាប់កំណត់រចនាសម្ព័ន្ធចម្បងនៃ peptides - អ្វីដែលគេហៅថា។ អ្នកបន្តបន្ទាប់។

នាមត្រកូល Peptide ។សំណល់អាស៊ីតអាមីណូនៃ peptides ដឹកដោយឥតគិតថ្លៃ។ ក្រុមអាមីណូដែលហៅថា N-terminal ហើយក្រុមហ៊ុនដឹកជញ្ជូនមិនគិតថ្លៃទេ។ ក្រុម a-carboxyl - ស្ថានីយ C ។ រូបថតរបស់ Peptideមកពីឈ្មោះ។ សំណល់អាស៊ីតអាមីណូរួមបញ្ចូលក្នុងសមាសភាពរបស់វា រាយបញ្ជីជាបន្តបន្ទាប់ ចាប់ផ្តើមពីស្ថានីយ N ។ ក្នុងករណីនេះឈ្មោះមិនសំខាន់ត្រូវបានប្រើ។ អាស៊ីតអាមីណូដែលចុងបញ្ចប់ "in" ត្រូវបានជំនួសដោយ "sil"; ការបដិសេធនៃសំណល់ស្ថានីយ C, ហៅថា ដែលស្របគ្នានឹងឈ្មោះ។ អាស៊ីតអាមីណូដែលត្រូវគ្នា។ សំណល់អាស៊ីតអាមីណូទាំងអស់ដែលមាននៅក្នុង peptides ត្រូវបានដាក់លេខដោយចាប់ផ្តើមពី N-terminus ។ ដើម្បីកត់ត្រារចនាសម្ព័ន្ធចម្បងនៃ peptides (លំដាប់អាស៊ីតអាមីណូ) ការរចនាបីអក្សរ និងអក្សរមួយសម្រាប់សំណល់អាស៊ីតអាមីណូត្រូវបានគេប្រើយ៉ាងទូលំទូលាយ (ឧទាហរណ៍ Ala Ser -Asp Phe -GIy alanyl-seryl-asparagyl-phenylalanyl-glycine) ។

រចនាសម្ព័ន្ធ។ចំណង peptide មានលក្ខណៈសម្បត្តិនៃចំណងទ្វេផ្នែក។ នេះត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុងការថយចុះនៃប្រវែងនៃចំណងនេះ (0.132 nm) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងប្រវែងនៃចំណង C N សាមញ្ញ (0.147 nm) ។ ធម្មជាតិដែលភ្ជាប់ទ្វេរដងនៃចំណង peptide ធ្វើឱ្យវាមិនអាចទៅរួចទេដោយសេរី ការបង្វិលនៃសារធាតុជំនួសនៅជុំវិញវា។ ដូច្នេះ ក្រុម peptide គឺ planar ហើយជាធម្មតាមាន trans configuration (f-la I)។ ដូច្នេះឆ្អឹងខ្នងនៃខ្សែសង្វាក់ peptide គឺជាស៊េរីនៃយន្តហោះរឹងដែលមានសន្លាក់ចល័ត ("ហ៊ីង") នៅកន្លែងដែលផ្នែកមិនស៊ីមេទ្រីស្ថិតនៅ។ អាតូម C (ក្នុងដំណាក់កាល I ត្រូវបានចង្អុលបង្ហាញដោយសញ្ញាផ្កាយ) ។

នៅក្នុងដំណោះស្រាយ peptide ការបង្កើតអនុគ្រោះនៃ conformers ជាក់លាក់ត្រូវបានអង្កេត។ នៅពេលដែលខ្សែសង្វាក់ពង្រីក ធាតុដែលបានបញ្ជាទិញនៃរចនាសម្ព័ន្ធបន្ទាប់បន្សំ (a-helix និង b-structure) ទទួលបានស្ថេរភាពកាន់តែច្បាស់ (ស្រដៀងទៅនឹងប្រូតេអ៊ីន)។ ការបង្កើតរចនាសម្ព័ន្ធបន្ទាប់បន្សំគឺជាលក្ខណៈពិសេសនៃ peptides ធម្មតា ជាពិសេសអាស៊ីត polyamino ។

ទ្រព្យសម្បត្តិ។ Oligopeptides មានលក្ខណៈសម្បត្តិស្រដៀងគ្នាទៅនឹងអាស៊ីតអាមីណូ polypeptides គឺស្រដៀងទៅនឹងប្រូតេអ៊ីន។ Oligopeptides ជាធម្មតាមានគ្រីស្តាល់។ សារធាតុដែលរលួយនៅពេលកំដៅ។ រហូតដល់ 200 300 0 C. ពួកវារលាយបានល្អ។ នៅក្នុងទឹក, dil ។ to-takh និង alkalis ស្ទើរតែគ្មាន sol ។ នៅក្នុង org ។ r-អ្នកលក់រាយ។ ករណីលើកលែង៖ Oligopeptides បង្កើតឡើងពីសំណល់អាស៊ីតអាមីណូ hydrophobic ។

Oligopeptides មានលក្ខណៈសម្បត្តិ amphoteric ហើយអាស្រ័យលើទឹកអាស៊ីតនៃបរិស្ថានអាចមាននៅក្នុងទម្រង់នៃ cations, anions ឬ zwitterions ។ មូលដ្ឋាន ក្រុមស្រូបយកក្នុងវិសាលគម IR សម្រាប់ក្រុម NH គឺ 3300 និង 3080 សង់ទីម៉ែត្រ -1 សម្រាប់ក្រុម C = O 1660 សង់ទីម៉ែត្រ -1 ។ នៅក្នុងវិសាលគមកាំរស្មីយូវីក្រុមស្រូបយកសារធាតុ peptide ស្ថិតនៅក្នុងតំបន់ 180-230 nm ។ អ៊ីសូអេឡិចត្រិច ចំណុច (pI) នៃ peptides ប្រែប្រួលយ៉ាងទូលំទូលាយ និងអាស្រ័យលើសមាសធាតុនៃសំណល់អាស៊ីតអាមីណូនៅក្នុងម៉ូលេគុល។ តម្លៃ pK a នៃ peptides គឺប្រហាក់ប្រហែល។ 3, សម្រាប់ -N H 2 ប្រហាក់ប្រហែល។ ៨.

ចែម។ លក្ខណៈសម្បត្តិរបស់ oligopeptides ត្រូវបានកំណត់ដោយមុខងារដែលវាមាន។ ក្រុមក៏ដូចជាលក្ខណៈពិសេសនៃចំណង peptide ។ គីមីរបស់ពួកគេ។ ការផ្លាស់ប្តូរទៅជាមធ្យោបាយ។ យ៉ាងហោចណាស់ស្រដៀងទៅនឹងសមាមាត្រអាស៊ីតអាមីណូដែលត្រូវគ្នា។ ពួកគេផ្តល់ឱ្យខ្ញុំ។ ប្រតិកម្ម biuret និងប្រតិកម្ម ninhydrin ។ Dipeptides និងនិស្សន្ទវត្ថុរបស់វា (ជាពិសេស esters) វិលជុំយ៉ាងងាយស្រួលដើម្បីបង្កើត diketopiperazines ។ នៅក្រោមឥទ្ធិពលនៃ 5.7 n ។

អាស៊ីត hydrochloric peptides ត្រូវបាន hydrolyzed ទៅអាស៊ីតអាមីណូក្នុងរយៈពេល 24 ម៉ោងនៅ 105 0 C ។

សំយោគ។ចែម។ ការសំយោគ peptide ពាក់ព័ន្ធនឹងការបង្កើតចំណង peptide រវាងក្រុម COOH នៃអាស៊ីតអាមីណូមួយ និង NH 2 នៃអាស៊ីតអាមីណូ ឬ peptide ផ្សេងទៀត។ យោងទៅតាមនេះសមាសធាតុ carboxyl និង amine នៃដំណើរការសំយោគ peptide ត្រូវបានសម្គាល់។ ដើម្បីអនុវត្តការសំយោគ peptides ដែលបានកំណត់គោលដៅ ចាំបាច់ត្រូវធ្វើជាមុនសិន។ ការការពារបណ្តោះអាសន្ននៃមុខងារទាំងអស់ (ឬខ្លះ) ។ ក្រុមដែលមិនចូលរួមក្នុងការបង្កើតចំណង peptide និងជាបឋមផងដែរ។ ការធ្វើឱ្យសកម្មនៃសមាសធាតុមួយនៃការសំយោគ peptide ។ បន្ទាប់ពីបញ្ចប់ការសំយោគក្រុមការពារត្រូវបានដកចេញ។ នៅពេលទទួលបាន peptides សកម្មជីវសាស្រ្ត លក្ខខណ្ឌចាំបាច់មួយគឺការទប់ស្កាត់ការប្រណាំងនៃអាស៊ីតអាមីណូនៅគ្រប់ដំណាក់កាលនៃការសំយោគ peptide ។

ណាអ៊ីប មធ្យោបាយសំខាន់ៗនៃការបង្កើតចំណង peptide នៅពេលអនុវត្ត r-tion នៅក្នុងវិធីសាស្រ្ត r-re-ធ្វើឱ្យសកម្ម។ អេធើរ, carbodiimide, anhydrides ចម្រុះ និងវិធីសាស្រ្ត azide ។

វិធីសាស្រ្តនៃ esters ដែលបានធ្វើឱ្យសកម្មគឺផ្អែកលើមុន ការបង្កើតដេរីវេនៃ ester នៃសមាសធាតុ carboxyl ដោយបញ្ចូលទៅក្នុងវានូវសំណល់ជាតិអាល់កុលដែលមានសារធាតុជំនួសការដកអេឡិចត្រុងដ៏រឹងមាំ។ ជាលទ្ធផល ester ដែលមានប្រតិកម្មខ្ពស់ត្រូវបានបង្កើតឡើង ដែលងាយនឹងទទួលរងនូវ aminolysis ក្រោមសកម្មភាពនៃសមាសធាតុអាមីណូនៃការសំយោគ peptide ។ ជាអ្នកធ្វើឱ្យសកម្ម esters នៅក្នុងការសំយោគនៃ peptides, penta-fluoro-, pentachlor-, trichloro- និង n-nitrophenyl និងចំនួននៃ esters ផ្សេងទៀតនៃអាស៊ីតអាមីណូការពារនិង peptides ត្រូវបានគេប្រើយ៉ាងទូលំទូលាយ។

វិធីសាស្រ្ត carbodiimide នៃការបង្កើតចំណង peptide ពាក់ព័ន្ធនឹងការប្រើប្រាស់ decomp ។ carbodiimides ជំនួស។ Dicyclohexyl-carbodiimide ត្រូវបានគេប្រើយ៉ាងទូលំទូលាយក្នុងការសំយោគ peptides៖

X និង Y-resp ។ ក្រុម N- និង C-protective ជាមួយនឹង reagent condensing នេះ វាអាចធ្វើទៅបានដើម្បីសំយោគ peptides នៅក្នុងប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយ aqueous ចាប់តាំងពីអត្រានៃ hydrolysis និង aminolysis នៃ O-acyl isourea (II) ដែលត្រូវបានបង្កើតឡើងកម្រិតមធ្យមមានភាពខុសគ្នាយ៉ាងខ្លាំង។ សមាសធាតុផ្សេងៗក៏ត្រូវបានគេប្រើផងដែរក្នុងការសំយោគ peptides ។ carbodiimides រលាយក្នុងទឹក (ឧទាហរណ៍ N-dimethylaminopropyl-N"-ethylcarbodiimide) ។

វិធីសាស្រ្ត anhydride ចម្រុះគឺផ្អែកលើការព្យាបាលមុន។ ការធ្វើឱ្យសកម្មនៃសមាសធាតុ carboxylic នៃការសំយោគ peptide ដោយការបង្កើត anhydride ចម្រុះជាមួយ carboxylic ឬ inorg ។ WHO។ ណាអ៊ីប alkyl esters នៃសមាសធាតុ chloroformic (carbonic chloride) ត្រូវបានគេប្រើជាញឹកញាប់ ជាពិសេស ethyl និង isobutyl ethers ជាឧទាហរណ៍៖

ខ - អាមីណូទី ៣

នៅពេលសំយោគ peptides ដោយប្រើវិធីសាស្ត្រនេះ សារធាតុ anhydrides ចម្រុះនៃអាស៊ីតអាមីណូ N-acyl និងអាស៊ីត pivalic (trimethylacetic) មានប្រសិទ្ធភាពណាស់។ សូមអរគុណចំពោះការដាក់ខ្លាំង។ ដោយសារតែឥទ្ធិពលនៃក្រុម tert-butyl អេឡិចត្រូហ្វីលីកនៃអាតូម carboxyl C នៅក្នុងសំណល់អាស៊ីត pivalin ត្រូវបានកាត់បន្ថយយ៉ាងខ្លាំង ហើយនេះរួមជាមួយនឹងសារធាតុ steric ។ ឧបសគ្គ, រារាំងមិនចង់បាន ការបង្កើតវត្ថុបញ្ចាំនៃ urethane និងឥតគិតថ្លៃ។ អាស៊ីត N-acylamino គែមត្រូវបានអនុវត្តតាមគ្រោងការណ៍៖

នៅក្នុងវ៉ារ្យ៉ង់មួយនៃវិធីសាស្រ្ត anhydride ចម្រុះ 1-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydroquinoline ត្រូវបានគេប្រើជាភ្នាក់ងារ condensing ។ នេះគឺជាការតភ្ជាប់។ ងាយស្រួលបង្កើតកម្រិតមធ្យមជាមួយនឹងសមាសធាតុ carboxyl នៃការសំយោគ peptide ។ anhydride ចម្រុះដែលចូលទៅក្នុងដំណោះស្រាយ condensation យ៉ាងឆាប់រហ័សហើយសារធាតុដែលមិនចង់បានត្រូវបានលុបចោលទាំងស្រុង។ ការចែកចាយចំហៀង។

ករណីពិសេសនៃវិធីសាស្ត្រ anhydride ចម្រុះគឺជាវិធីសាស្ត្រស៊ីមេទ្រី។ anhydrides ដែលអាស៊ីតអាមីណូ anhydrides 2 O ត្រូវបានប្រើ។ ការប្រើប្រាស់របស់ពួកគេលុបបំបាត់លទ្ធភាពនៃការមិនសមាមាត្រ ឬ aminolysis មិនត្រឹមត្រូវ។

វិធីសាស្រ្តសំយោគ azide ពាក់ព័ន្ធនឹងការធ្វើឱ្យសកម្មនៃសមាសធាតុ carboxyl ដោយបំប្លែងវាទៅជា azide នៃអាស៊ីតអាមីណូជំនួស N ឬ peptide៖

ដោយសារតែអស្ថិរភាពនៃ azide ពួកគេមានសេរីភាព។ ទម្រង់ពីដំណោះស្រាយជាក្បួនមិនដាច់ពីគេទេ។ ប្រសិនបើជំនួសឱ្យ nitrites ដែកអាល់កាឡាំង អេធើរ alkyl នៃសមាសធាតុអាសូត (ឧទាហរណ៍ tert-butyl nitrite) ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ដំណោះស្រាយជាមួយ hydrazide បន្ទាប់មក condensation azide អាចត្រូវបានអនុវត្តនៅក្នុង org ។ r-ritele; លទ្ធផល HN 3 ត្រូវ​បាន​ចង​ភ្ជាប់​ជាមួយ​នឹង​សារធាតុ​អាមីន​កម្រិត​ទី​៣។ Azide condensation ជារឿយៗមានភាពស្មុគស្មាញដោយផលវិបាកដែលមិនចង់បាន។ ប្រតិកម្មចំហៀង (ការបំប្លែង hydrazide មិនមែនជាអាហ្សីត ប៉ុន្តែទៅជាអាមីដ ដំណោះស្រាយhydrazide ជាមួយ azide ដែលនាំឱ្យមានការបង្កើត 1,2-dacyl-hydrazine; ជាប់ៗគ្នា។ ការបង្កើត isocyanate ដែលជាលទ្ធផលនៃការរៀបចំ Curtius ឡើងវិញអាចនាំឱ្យមានដេរីវេនៃអ៊ុយឬអ៊ុយរ៉េថេនដែលត្រូវគ្នា។ ល។ គុណសម្បត្តិនៃវិធីសាស្រ្ត azide គឺកម្រិតទាបនៃ racemization លទ្ធភាពនៃការប្រើប្រាស់ serine និង threonine ដោយមិនការពារក្រុម hydroxyl ។

ដើម្បីប្រែក្លាយ peptides ដែលត្រូវបានការពារត្រូវបានបំប្លែងទៅជា peptides ដោយឥតគិតថ្លៃដោយប្រើពិសេស វិធីសាស្រ្តនៃការ deblocking ដែលត្រូវបានផ្អែកលើដំណោះស្រាយដែលធានាការផ្ដាច់នៃការ decomposition ។ ក្រុមការពារដែលធានាការរក្សាចំណង peptide ទាំងអស់នៅក្នុងម៉ូលេគុល។ ឧទាហរណ៍នៃការទប់ស្កាត់៖ ការយកចេញនៃក្រុម benzyl oxycarbonyl នៃកាតាលីករ។ hydrogenolysis នៅ atm ។ សម្ពាធ និងសីតុណ្ហភាពក្នុងបន្ទប់ ការលុបបំបាត់ក្រុម tert-butyloxycarbonyl ដោយ acidolysis កម្រិតស្រាល ក៏ដូចជា hydrolytic ។ ការបំបែកនៃក្រុម trifluoroacetyl នៅក្រោមសកម្មភាពនៃ dilute ។ ដំណោះស្រាយគ្រឹះ។

នៅពេលសំយោគ peptides សកម្មជីវសាស្រ្ត វាមានសារៈសំខាន់ដែលថាការប្រណាំងមិនកើតឡើងទេ គែមអាចកើតឡើងជាលទ្ធផលនៃការលុបបំបាត់ H + ដែលអាចបញ្ច្រាស់បានពីអាតូម C នៃអាស៊ីតអាមីណូ N-acyl ឬ peptide ។ ការប្រណាំងត្រូវបានលើកកម្ពស់ដោយមូលដ្ឋាន និងសមាសធាតុ សីតុណ្ហភាពខ្ពស់ និងសមាសធាតុប៉ូល តួនាទីសម្រេចចិត្តត្រូវបានលេងដោយ racemization, catalyzed ដោយមូលដ្ឋាន, ដែលអាចកើតឡើងតាមរយៈអ្វីដែលគេហៅថា។ យន្តការ azlactone ឬតាមរយៈការ enolization យោងទៅតាមគ្រោងការណ៍ខាងក្រោម:

ណាអ៊ីប មធ្យោបាយសំខាន់ៗដើម្បីជៀសវាងការប្រណាំង៖ 1) ការពង្រីកខ្សែសង្វាក់ peptide ក្នុងទិសដៅពី C-terminus ទៅ N-terminusដោយប្រើក្រុមការពារ N ដូចជា ROC(O)។ 2) ការធ្វើឱ្យសកម្មនៃបំណែក peptide ដែលត្រូវបានការពារដោយ N ជាមួយនឹងសំណល់ proline ឬ glycine ស្ថានីយ C ។ 3) ការប្រើប្រាស់វិធីសាស្រ្ត azide (ក្នុងករណីដែលមិនមានមូលដ្ឋានទីបីលើសនិងរក្សាសីតុណ្ហភាពទាបនៅក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុកប្រតិកម្ម) ។ 4) សកម្មភាពកម្មវិធី។ អាមីណូអាស៊ីត esters, aminolysis ដែលដំណើរការតាមរយៈស្ថានភាពផ្លាស់ប្តូរ, ស្ថេរភាព។ ស្ពានអ៊ីដ្រូសែន (ឧទាហរណ៍ esters បង្កើតឡើងដោយ N-hydroxypiperidine និង 8-hydroxyquinoline) ។ 5) ដោយប្រើវិធីសាស្ត្រ carbodiimide ជាមួយនឹងសារធាតុបន្ថែមសមាសធាតុ N-hydroxy ។ ឬការិយាល័យរបស់ Lewis ។

រួមជាមួយនឹងការសំយោគ peptides នៅក្នុងដំណោះស្រាយ ការសំយោគ peptides ដោយប្រើក្រុមហ៊ុនដឹកជញ្ជូនមិនរលាយគឺមានសារៈសំខាន់។ វារួមបញ្ចូលការសំយោគ peptide ដំណាក់កាលរឹង (វិធីសាស្ត្រ Maryfield ឬវិធីសាស្រ្ត) និងការសំយោគ peptide ដោយប្រើសារធាតុប៉ូលីមែរ។

យុទ្ធសាស្ត្រនៃការសំយោគ peptide ដំណាក់កាលរឹង ពាក់ព័ន្ធនឹងការជួសជុលបណ្តោះអាសន្ននៃខ្សែសង្វាក់ peptide ដែលបានសំយោគនៅលើក្រុមហ៊ុនដឹកជញ្ជូនវត្ថុធាតុ polymer ដែលមិនអាចរលាយបាន ហើយត្រូវបានអនុវត្តតាមគ្រោងការណ៍ដូចខាងក្រោមៈ

សូមអរគុណចំពោះវិធីសាស្រ្តនេះ វាអាចធ្វើទៅបានដើម្បីជំនួសនីតិវិធីដ៏ស្មុគស្មាញ និងពឹងផ្អែកលើកម្លាំងពលកម្មសម្រាប់ការបំបែក និងការបន្សុតសារធាតុអន្តរការី។ peptides ដោយប្រតិបត្តិការបោកគក់ និងត្រងសាមញ្ញ ក៏ដូចជាកាត់បន្ថយដំណើរការនៃការសំយោគ peptide ទៅជាលំដាប់ស្តង់ដារនៃនីតិវិធីដដែលៗតាមកាលកំណត់ដែលអាចដោយស្វ័យប្រវត្តិយ៉ាងងាយស្រួល។ វិធីសាស្រ្តរបស់ Merrifield ធ្វើឱ្យវាអាចបង្កើនល្បឿនដំណើរការសំយោគ peptide យ៉ាងសំខាន់។ ដោយផ្អែកលើវិធីសាស្រ្តនេះ, ប្រភេទផ្សេងគ្នានៃ ប្រភេទដោយស្វ័យប្រវត្តិ ឧបករណ៍សំយោគ peptide ។

ការតភ្ជាប់មានផលិតភាពខ្ពស់។ ការសំយោគដំណាក់កាលរឹងនៃ peptides ជាមួយនឹងសមត្ថភាពបំបែកនៃ HPLC ត្រៀមផ្តល់នូវការចូលទៅកាន់កម្រិតថ្មីនៃគីមីសាស្ត្រ។ ការសំយោគ peptides ដែលមានឥទ្ធិពលជន៍លើការអភិវឌ្ឍន៍ផ្សេងៗ។ ពួកគេនិយាយថាផ្នែកជីវគីមី។ ជីវវិទ្យា វិស្វកម្មហ្សែន ជីវបច្ចេកវិទ្យា ឱសថសាស្ត្រ និងឱសថ។

យុទ្ធសាស្ត្រសម្រាប់ការសំយោគ peptides ដោយប្រើសារធាតុប៉ូលីម៊ែរ ពាក់ព័ន្ធនឹងការចងបណ្តោះអាសន្នទៅនឹងទម្ងន់ម៉ូលេគុលខ្ពស់។ ក្រុមហ៊ុនដឹកជញ្ជូនបានដំណើរការ សមាសធាតុ carboxyl ឬភ្នាក់ងារ condensing នៃការសំយោគ peptide ។ អត្ថប្រយោជន៍នៃវិធីសាស្រ្តនេះគឺថា reagents ដែលភ្ជាប់ទៅនឹងវត្ថុធាតុ polymer អាចត្រូវបានណែនាំលើសហើយការបំបែក peptides សំយោគពីវត្ថុធាតុ polymer ដែលមិនរលាយគឺមិនពិបាកទេ។

ឧទាហរណ៏នៃការសំយោគបែបនេះកំពុងឆ្លងកាត់សមាសធាតុអាមីណូនៅក្នុងលំដាប់ដែលបានផ្តល់ឱ្យតាមរយៈជាច្រើន។ ជួរឈរនីមួយៗមានវត្ថុធាតុ polymer ចង

ប្រតិចារិក

1 NOVOSIBIRSK STATE UNIVERSITY មហាវិទ្យាល័យវិទ្យាសាស្ត្រធម្មជាតិ នាយកដ្ឋានគីមីវិទ្យា ការវិភាគការងារ ការព្យាករណ៍នៃបរិមាណរក្សាទុក និងកាំរស្មី UV នៃ peptides ក្នុងដំណាក់កាលបញ្ច្រាស HPLC បញ្ចប់ដោយ៖ Kuchkina A.Yu., gr. 147 អ្នកគ្រប់គ្រងវិទ្យាសាស្ត្រ៖ Ph.D. Azarova I.N. Novosibirsk-2005

2 ខ្លឹមសារ 1. សេចក្តីផ្តើម ការពិនិត្យអក្សរសិល្ប៍ 2.1. ប៉េទីត។ អាស៊ីតអាមីណូនៃ HPLC peptides ការព្យាករណ៍នៃបរិមាណរក្សាទុក និងកាំរស្មី UV នៃ peptides ក្នុង RP HPLC ផ្នែកពិសោធន៍ លទ្ធផល និងការពិភាក្សា 4.1 ។ ការត្រួតពិនិត្យស្ថេរភាពនៃប្រព័ន្ធ chromatographic ការគណនាបរិមាណនៃការរក្សា peptide គំរូ "ការរក្សាសមាសភាព" លីនេអ៊ែរ គំរូ "ការរក្សាសមាសភាព" មិនលីនេអ៊ែរ ការគណនានៃកាំរស្មី UV នៃ peptides សេចក្តីសន្និដ្ឋាន ឧបសម្ព័ន្ធអក្សរសិល្ប៍

3 1. សេចក្តីផ្តើម ការកំណត់អត្តសញ្ញាណប្រូតេអ៊ីនដែលដំណើរការនៅក្នុងកោសិការស់ ដោយផ្អែកលើព័ត៌មានដែលគេស្គាល់អំពីរចនាសម្ព័ន្ធនៃហ្សែន ប្រូតេអូម ត្រូវបានចាត់ទុកថាជាកិច្ចការសំខាន់បំផុតមួយនៃជីវវិទ្យាម៉ូលេគុលទំនើប។ បញ្ហានេះបានកើតឡើងបន្ទាប់ពីការបកស្រាយពេញលេញនៃហ្សែននៃសារពាង្គកាយមួយចំនួនក្នុងរយៈពេលប៉ុន្មានឆ្នាំចុងក្រោយនេះ។ វាបានប្រែក្លាយថាហ្សែនបានអ៊ិនកូដប្រូតេអ៊ីនច្រើនជាងរាងកាយផលិតពួកវា។ ការកំណត់អត្តសញ្ញាណប្រូតេអ៊ីនដែលចាប់អារម្មណ៍លើផលបូកនៃប្រូតេអ៊ីនទាំងអស់គឺជាកិច្ចការវិធីសាស្រ្តដ៏ស្មុគស្មាញ ដែលតាមក្បួនមួយមិនអាចដោះស្រាយបានដោយវិធីសាស្ត្រផ្ទាល់នោះទេ។ វិធីសាស្រ្តមួយក្នុងការដោះស្រាយបញ្ហាប្រភេទនេះ ហៅថា peptidomics គឺថាផលបូកនៃប្រូតេអ៊ីនត្រូវបាន hydrolyzed ជាមួយ protease ជាក់លាក់មួយ ហើយផលបូកនៃ peptides លទ្ធផលត្រូវបានបំបែកដោយ capillary electrophoresis ឬ high-performance liquid chromatography (HPLC) ។ គោលដៅចុងក្រោយគឺដើម្បីរកឱ្យឃើញ peptide (peptides) នៃរចនាសម្ព័ន្ធដែលគេស្គាល់ ដែលជា (គឺ) priori បំណែកនៃប្រូតេអ៊ីនដែលបានអ៊ិនកូដដោយហ្សែននៃសារពាង្គកាយដែលកំពុងសិក្សា។ ប្រសិនបើ peptide (s) បែបនេះត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងគំរូមួយ វាត្រូវបានសន្និដ្ឋានថាប្រូតេអ៊ីនកំពុងត្រូវបានផលិតដោយរាងកាយ។ បញ្ហាវិធីសាស្រ្តដែលកើតឡើងនៅពេលដោះស្រាយបញ្ហានៃប្រភេទនេះអាចត្រូវបានបែងចែកជា 2 ក្រុម។ បញ្ហាទីមួយគឺការបំបែកល្បាយដែលជាធម្មតាមាន peptides ជាច្រើនពាន់។ ទីពីរគឺការកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធនៃ peptides បុគ្គលដាច់ដោយឡែក។ បញ្ហាបំបែកត្រូវបានដោះស្រាយដោយការប្រភាគល្បាយបឋម បន្តដោយការបំបែកប្រភាគដែលបំបែកទៅជាសមាសធាតុនីមួយៗ។ បញ្ហាទី 2 ត្រូវបានដោះស្រាយជាចម្បងដោយវិធីសាស្ត្រម៉ាសដែលនៅទីបំផុតធ្វើឱ្យវាអាចកំណត់ម៉ាស់ម៉ូលេគុលនៃសមាសធាតុនីមួយៗ (peptides) ។ ប្រសិនបើ peptide មានរចនាសម្ព័ន្ធ "តែមួយគត់" ដោយស្មើភាព (សំណុំនៃអាស៊ីតអាមីណូ) - ទាំងនេះជាធម្មតារួមបញ្ចូល peptides វែង (ច្រើនជាងសំណល់អាស៊ីតអាមីណូ) - បន្ទាប់មកទម្ងន់ម៉ូលេគុលរបស់វាក៏នឹងមាន "តែមួយគត់" ហើយប្រូបាប៊ីលីតេនៃការកំណត់អត្តសញ្ញាណខុសនឹងមានការធ្វេសប្រហែស។ . ដោយសារនីតិវិធីបំបែក peptide មានគោលបំណងបំបែក peptide ជាមួយនឹងសំណុំអាស៊ីតអាមីណូដែលគេស្គាល់នោះ សំណួរកើតឡើង៖ តើវាអាចទៅរួចទេក្នុងការទស្សន៍ទាយពេលវេលានៃការបញ្ចេញ peptide ពីជួរឈរ HPLC ដោយដឹងពីសមាសធាតុអាស៊ីតអាមីណូរបស់វា? វិធីសាស្រ្តនេះត្រូវបានបង្ហាញជាលើកដំបូងនៅដើមទសវត្សរ៍ទី 80 ។ គោលបំណងនៃការសិក្សានេះគឺដើម្បីបង្កើតវិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការទស្សន៍ទាយបរិមាណរក្សាទុកនៃ peptides នៅលើ Milichrom A-02 chromatograph ក្នុងរបៀប HPLC ដំណាក់កាលបញ្ច្រាស (RP HPLC) ដោយប្រើដំណាក់កាលចល័តដែលសមរម្យសម្រាប់ការចាក់ដោយផ្ទាល់ទៅក្នុងម៉ាស់ spectrometer ។ ៣

4 2. ការវាយតម្លៃអក្សរសាស្ត្រ 2.1 ។ ប៉េទីត។ អាស៊ីតអាមីណូ Peptides គឺជាសារធាតុជីវប៉ូលីម័រដែលបង្កើតឡើងពីសំណល់អាស៊ីតអាមីណូដែលតភ្ជាប់គ្នាទៅវិញទៅមកដោយចំណង peptide (-NH-CO-) ។ រូបមន្តទូទៅនៃ peptide អាចត្រូវបានបង្ហាញដូចខាងក្រោម: NH 2 CH CO NH CH CO... NH CH R 1 R 2 Rn មិនមានព្រំដែនច្បាស់លាស់រវាងប្រូតេអ៊ីន និង peptides ទេ ជាក្បួន peptides រួមមាន biopolymers ដែលមានមិនលើសពី 100 សំណល់អាស៊ីតអាមីណូ។ អាស៊ីតអាមីណូ គឺជាអាស៊ីតសរីរាង្គណាមួយដែលម៉ូលេគុលរួមមានក្រុមអាមីណូ ឈ្មោះនេះច្រើនតែមានន័យថា អាស៊ីតអាមីណូ ពីព្រោះ ពួកគេមានសារៈសំខាន់ជីវសាស្រ្ត។ ម៉ូលេគុលនៃអាស៊ីតអាមីណូធម្មជាតិភាគច្រើនដែលបង្កើតជាប្រូតេអ៊ីនមានរូបមន្តទូទៅ H 2 NCH R ដូចដែលអាចមើលឃើញពីរូបមន្តរចនាសម្ព័ន្ធអាស៊ីតអាមីណូ (លើកលែងតែប្រូលីន) ខុសគ្នាពីគ្នាទៅវិញទៅមកតែនៅក្នុងរចនាសម្ព័ន្ធនៃខ្សែសង្វាក់ចំហៀង R ។ អាស៊ីតអាមីណូគឺជាសមាសធាតុ amphoteric ចាប់តាំងពីម៉ូលេគុលរបស់វាមានទាំងក្រុម carboxyl អាស៊ីត និងក្រុមអាមីណូមូលដ្ឋាន។ នៅក្នុងបរិយាកាសអាសុីតខ្លាំង ក្រុម carboxyl ត្រូវបានបែងចែកយ៉ាងលើសលុប ហើយក្រុមអាមីណូត្រូវបានប្រូតុង។ នៅក្នុងបរិយាកាសអាល់កាឡាំងខ្លាំង ក្រុមអាមីណូគឺនៅក្នុងទម្រង់នៃមូលដ្ឋានសេរី ហើយក្រុម carboxyl គឺនៅក្នុងទម្រង់នៃ carboxylate anion ។ នៅក្នុងស្ថានភាពគ្រីស្តាល់ អាស៊ីតអាមីណូមានក្នុងទម្រង់ជា zwitterion ដែលប្រូតុងពីក្រុម carboxyl ត្រូវបានផ្ទេរទៅក្រុមអាមីណូ។ មានតែអាស៊ីតអាមីណូចំនួន 20 ប៉ុណ្ណោះដែលត្រូវបានចូលរួមនៅក្នុងការសំយោគនៃ peptides និងប្រូតេអ៊ីនធម្មជាតិ។ អាស៊ីតអាមីណូ និងលក្ខណៈសម្បត្តិរបស់វាត្រូវបានផ្តល់ឱ្យក្នុងតារាង 1. តារាងទី 1. អាស៊ីតអាមីណូ និងលក្ខណៈសម្បត្តិរបស់វា។ ឈ្មោះអាស៊ីតអាមីណូ កូដរចនាសម្ព័ន្ធ p a - -NH 2 -R Glycine G H 2.35 9.78 Alanine A H 3 C 2.35 9.87 Valine V H 3 C CH CH 3 2.29 9.74 4

5 ឈ្មោះអាមីណូអាស៊ីត រចនាសម្ព័ន្ធ p a - -NH 2 -R Leucine L H 3 C CH CH 3 2.33 9.74 Isoleucine I H 3 C * CH CH 3 2.32 9.76 H 2 C Proline P HC NH 1.95 10.64 តូ H2 CH CH 3 2.32 9.76 H 2 C Proline P HC NH 1.95 10.64 Phenyla CH 2000 2 2.46 9.41 Tyrosine Y HO CH NH 2 2.20 9.21 10.46 Serine S HO 2.19 9.21 Threonine T HO * CH CH 3 2.09 9.10 Cysteine ​​​​C HS HS 1.909 10.3 អាសុីត D. 3.36 អាស៊ីត Glutamic E HOOC 2.10 10.47 4.07 Asparagine N H 2 N C O 2.14 8.72 Glutamine Q H 2 N C O 2.17 9.13 Lysine K H 2 N 2.16 9.06 10.54 Arginine R H 2 N C NH 1.82 8.99 12.48 NH Histidine H 4.3th Me.9. ២.១៣ ៩.២៨ ៥

6 អាស្រ័យលើធម្មជាតិនៃខ្សែសង្វាក់ចំហៀង អាស៊ីតអាមីណូត្រូវបានបែងចែកជាពីរក្រុម៖ អាស៊ីតអាមីណូដែលមានក្រុមមិនមែនប៉ូឡា (hydrophobic) aliphatic ឬ aromatic R-groups; អាស៊ីតអាមីណូដែលមានប៉ូល (អ៊ីដ្រូហ្វីលីក) R-ក្រុម។ ក្រុមទី 1 រួមមានអាស៊ីតអាមីណូចំនួន 8: អាឡានីន, វ៉ាលីន, ឡេស៊ីន, អ៊ីសូលស៊ីន, មេតូនីន, ប្រូលីន, ហ្វីនីឡាឡានីន, ទ្រីបតូហ្វាន។ អាស៊ីតអាមីណូចំនួនប្រាំពីរមានក្រុមនៅក្នុងខ្សែសង្វាក់ចំហៀងដែលអាចផ្ទុកបន្ទុកអវិជ្ជមានឬវិជ្ជមាន: អាស៊ីត aspartic និង glutamic ត្រូវបានចោទប្រកាន់អវិជ្ជមាននៅ pH 7.0; lysine, arginine, histidine គឺជាអាស៊ីតអាមីណូមូលដ្ឋានដែលខ្សែសង្វាក់ចំហៀងអាចត្រូវបានចោទប្រកាន់ជាវិជ្ជមាន។ នៅក្រោមលក្ខខណ្ឌអាល់កាឡាំង ក្រុមចំហៀង tyrosine និង cysteine ​​​​នៃ HPLC peptides អាចត្រូវបានចោទប្រកាន់អវិជ្ជមាន។ ការបំបែកល្បាយនៃ peptides គឺជាកិច្ចការដ៏លំបាកមួយ។ បច្ចុប្បន្ននេះ RP HPLC គឺជាវិធីសាស្រ្តដ៏សំខាន់បំផុតសម្រាប់ការបំបែក peptides ។ Peptides គឺជាសារធាតុប៉ូល ដែលការពារអន្តរកម្មរបស់វាជាមួយនឹងផ្ទៃ hydrophobic នៃដំណាក់កាលស្ថានី ហើយនាំឲ្យមានអន្តរកម្មជាមួយក្រុម silanol ដែលនៅសល់។ ដើម្បីកាត់បន្ថយអន្តរកម្មជាមួយក្រុម silanol អាស៊ីតខ្លាំងឬអំបិលត្រូវបានបន្ថែមទៅសារធាតុចម្រាញ់។ ដើម្បីកាត់បន្ថយភាពរាងប៉ូលនៃ peptides ក្រូម៉ូសូមគួរតែត្រូវបានអនុវត្តនៅតម្លៃ pH ទាប (ខាងក្រោម 3) ។ ប្រសិនបើគោលការណ៍ទាំងនេះត្រូវបានអនុវត្តតាម HPLC បង្ហាញថាជាវិធីសាស្រ្តដែលអាចបត់បែនបានសម្រាប់ការបំបែក peptides ។ នេះគឺដោយសារតែការពិតដែលថាវិធីសាស្រ្តនេះត្រូវបានកំណត់លក្ខណៈដោយល្បឿនបំបែកខ្ពស់, ការបង្កើតឡើងវិញនៃលទ្ធផលនិងសមត្ថភាពក្នុងការវិភាគបរិមាណមីក្រូក្រាមនៃសារធាតុ។ អត្ថប្រយោជន៍មួយទៀតរបស់ RP HPLC គឺសមត្ថភាពក្នុងការប្រមូលប្រភាគក្នុងបរិមាណតិចតួចនៃសារធាតុរំលាយដែលងាយនឹងបង្កជាហេតុ ដែលជួយសម្រួលដល់ការវិភាគផ្នែកម៉ាស់បន្ថែមទៀត។ តាមក្បួន 0.1% trifluoroacetic និងអាស៊ីត formic ត្រូវបានគេប្រើជាសារធាតុរំលាយងាយនឹងបង្កជាហេតុ។ អាស៊ីត Trifluoroacetic មានតម្លាភាពនៅក្នុងតំបន់កាំរស្មីយូវីរហូតដល់ 205 nm ដែលជាអត្ថប្រយោជន៍ដ៏អស្ចារ្យនៅពេលដែល chromatography នៃល្បាយស្មុគស្មាញ។ លើសពីនេះទៀត peptides មានភាពរលាយខ្ពស់នៅក្នុងអាស៊ីត trifluoroacetic ។ ការបំប្លែងសារធាតុ peptides ពីដំណាក់កាលបញ្ច្រាសជាធម្មតាត្រូវបានអនុវត្តនៅក្នុងរបៀបជម្រាលជាមួយនឹងការបន្ថែមឧបករណ៍កែប្រែសរីរាង្គ។ ឧបករណ៍កែប្រែសរីរាង្គទូទៅបំផុតគឺ acetonitrile ។ វាមានតម្លាភាពនៅក្នុងតំបន់ UV រហូតដល់ 200 nm និងមានជម្រើសដ៏ល្អ។ ៦

កត្តាមួយទៀតដែលជំរុញឱ្យមានការរីករាលដាលនៃការប្រើប្រាស់ RP HPLC សម្រាប់ការវិភាគនៃ peptides គឺសមត្ថភាពក្នុងការទស្សន៍ទាយឥរិយាបថ chromatographic របស់ពួកគេ ការព្យាករណ៍នៃបរិមាណរក្សាទុក និងកាំរស្មី UV នៃ peptides នៅក្នុង RP HPLC គំនិតដែលថាឥរិយាបថ chromatographic នៃ peptides ដែលមានសំណល់អាស៊ីតអាមីណូតិចជាង 25 អាច​ត្រូវ​បាន​ទស្សន៍ទាយ​ដោយ​ការ​ស្គាល់​ពួក​វា​នូវ​សមាសធាតុ​អាស៊ីត​អាមីណូ ដែល​បាន​បញ្ជាក់​ដំបូង​ដោយ J. Meek ។ ការរក្សាទុក peptides ក្នុងដំណាក់កាលបញ្ច្រាសត្រូវបានកំណត់ដោយ hydrophobicity នៃសំណល់អាស៊ីតអាមីណូរួមបញ្ចូលនៅក្នុងសមាសភាពរបស់វា។ អាស៊ីតអាមីណូដែលមានខ្សែសង្វាក់ aliphatic ឬធំគឺជាអ្នករួមចំណែកដ៏សំខាន់ក្នុងការរក្សា។ ដោយផ្អែកលើខាងលើ Meek បានស្នើឱ្យគណនាបរិមាណរក្សាទុកនៃ peptides ក្នុងដំណាក់កាលបញ្ច្រាសដែលជាផលបូកនៃការរួមចំណែកនៃសំណល់អាស៊ីតអាមីណូដែលបង្កើតជា peptide ។ គាត់បានស្នើគំរូ "ការរក្សាសមាសភាព" លីនេអ៊ែរ (បន្ថែម)៖ V R = V 0 + Z N * + Z C * + Z i (1) ដែល V R peptide retention volume; v 0 គឺជាទំហំទំនេរនៃជួរឈរ។ Z N* និង Z C* រៀងៗខ្លួនគឺជាការរួមចំណែកនៃ -NH 2 និង - ឬក្រុមស្ថានីយដែលបានកែប្រែនៃ peptide; Z i គឺជាការរួមចំណែកនៃអាស៊ីតអាមីណូ i-th (រក្សាថេរ) ។ Meek chromatographed 25 peptides នៅក្រោមលក្ខខណ្ឌ RP HPLC ជម្រាល ហើយការដោះស្រាយបញ្ហាបញ្ច្រាសបានគណនាថេររក្សាអាស៊ីតអាមីណូ។ មេគុណទំនាក់ទំនងនៃការពឹងផ្អែក V R (calc.)=f(v R (exp.)) គឺ 0.997 (នៅ ph 2.1) និង 0.999 (នៅ ph 7.4) ។ ទោះបីជាមានមេគុណជាប់ទាក់ទងគ្នាខ្ពស់ក៏ដោយ គំរូនេះផ្ទុយនឹងអត្ថន័យរូបវន្ត ដោយហេតុថាថេររក្សាអាស៊ីតអាមីណូដែលទទួលបានតាមវិធីនេះមិនឆ្លុះបញ្ចាំងពីភាពខុសគ្នាពិតប្រាកដនៃ hydrophobicity របស់ពួកគេ ហើយការរួមចំណែកខ្លះមានតម្លៃអវិជ្ជមាន។ លើសពីនេះទៀតមានការពិតជាច្រើនដែលយោងទៅតាមការកើនឡើងនៃចំនួនសំណល់អាស៊ីតអាមីណូនៅក្នុង peptide ផ្ទៃនៃទំនាក់ទំនង hydrophobic របស់វាជាមួយនឹងដំណាក់កាលបញ្ច្រាសដែលកំណត់ការរក្សាទុកកើនឡើងដោយគ្មានលីនេអ៊ែរ។ អ្នកនិពន្ធនៃការងារក៏បានធ្វើការសន្មត់ថាបរិមាណរក្សាទុកនៃ peptides ត្រូវបានគណនាពីផលបូកនៃការរួមចំណែកនៃសំណល់អាស៊ីតអាមីណូ។ ដើម្បីគណនាបរិមាណរក្សាទុកនៃ peptides ពួកគេបានស្នើគំរូដូចខាងក្រោមៈ V R = A* ln (1+ Z j * n j) + B (2) 7

8 ដែល Z j គឺជាប៉ារ៉ាម៉ែត្ររក្សាទុកជាក់ស្តែង ដែលត្រូវបានគណនាដោយផ្អែកលើ hydrophobicity នៃអាស៊ីតអាមីណូ; ថេរ A និង B; n j គឺជាចំនួននៃសំណល់អាស៊ីតអាមីណូ j ក្នុង peptide ។ គំរូនេះផ្តល់នូវទំនាក់ទំនងដ៏ល្អរវាងបរិមាណរក្សា peptide ដែលបានគណនា និងពិសោធន៍។ គុណវិបត្តិនៃម៉ូដែលនេះគឺថាវាមានសុពលភាពសម្រាប់តែប្រព័ន្ធ chromatographic ជាក់លាក់មួយ (ជម្រាលលីនេអ៊ែរជាមួយនឹងជម្រាលដែលបានផ្តល់ឱ្យ អត្រាលំហូរថេរ ដំណាក់កាលចល័ត និងស្ថានី)។ ដូច្នេះការអនុវត្តនៃគំរូនេះគឺមានកម្រិតខ្លាំងណាស់។ ដូច្នេះអ្នកនិពន្ធនៃការងារដែលកំពុងត្រួតពិនិត្យបានស្នើគំរូមួយផ្សេងទៀតដោយផ្អែកលើទ្រឹស្តីនៃការ elution ជម្រាលដែលអនុញ្ញាតឱ្យមនុស្សម្នាក់ដើម្បីគណនាបរិមាណរក្សាទុកនៃ peptides សម្រាប់ជួរធំទូលាយនៃប្រព័ន្ធ chromatographic ។ ដោយពិចារណាថាតំបន់ដែលមានទំនាក់ទំនង hydrophobic នៃ peptide ជាមួយដំណាក់កាលស្ថានីប្រែប្រួលតាមសមាមាត្រទៅនឹងទម្ងន់ម៉ូលេគុលរបស់វាទៅនឹងថាមពលនៃ 2/3 អ្នកនិពន្ធបានជ្រើសរើសមុខងារសម្រាប់គណនាបរិមាណរក្សាទុកនៃ peptides: V R = f (3 ) ដែល a, b, c គឺថេរអាស្រ័យលើលក្ខណៈសម្បត្តិនៃប្រព័ន្ធ chromatographic ជាក់លាក់មួយត្រូវបានកំណត់ដោយពិសោធន៍ពីទិន្នន័យ chromatography នៃ 15 peptides ដែលបានជ្រើសរើសសម្រាប់គោលបំណងនេះ។ មេគុណទំនាក់ទំនងនៃការពឹងផ្អែក V R (calc.)=f(v R (exp.)) គឺ 0.98 ។ គុណវិបត្តិដ៏សំខាន់ដែលកំណត់ការប្រើប្រាស់វិធីសាស្រ្តនេះគឺតម្រូវការក្នុងការគណនាថេរ a, b និង c សម្រាប់ប្រព័ន្ធ chromatographic ជាក់លាក់មួយពីការពិសោធន៍បឋមជាមួយ peptides គំរូ ដែលជានីតិវិធីដែលពឹងផ្អែកខ្លាំងលើកម្លាំងពលកម្ម។ ការងារនេះបានគណនាបរិមាណរក្សាទុក និងកាំរស្មី UV នៃ peptides ជាមួយនឹងលំដាប់អាស៊ីតអាមីណូដែលគេស្គាល់ ដោយបានកំណត់ពីមុនការរួមចំណែកនៃអាស៊ីតអាមីណូទៅនឹងប៉ារ៉ាម៉ែត្រខាងលើ។ តម្លៃនៃការរួមចំណែកទាំងនេះត្រូវបានរកឃើញដោយពិសោធន៍ពីក្រូម៉ាតូក្រាមនៃដំណោះស្រាយនៃអាស៊ីតអាមីណូនីមួយៗដែលទទួលបានដោយការរកឃើញ photometric ពហុរលកក្រោមលក្ខខណ្ឌដូចគ្នាដែល peptides ត្រូវបាន chromatographed ។ អ្នកនិពន្ធនៃការងារបានស្នើសមីការដូចខាងក្រោមសម្រាប់ការគណនាបរិមាណរក្សានៃ peptides: V R = 209 [(Z i) + Z C*+N* + V 0] 1/3 990 (4) ដែល Z i គឺជាមេគុណរក្សានៃ អាស៊ីតអាមីណូ "i"; V 0 បរិមាណទំនេរនៃជួរឈរ; Z C*+N* គឺជាចំនួនថេររក្សាសរុបនៃក្រុមស្ថានីយនៃ peptide ។ នៅពេលគណនាវិសាលគម UV នៃ peptides វិសាលគមនៃ peptide ត្រូវបានចាត់ទុកថាជាផលបូកនៃវិសាលគមនៃធាតុរចនាសម្ព័ន្ធទាំងអស់របស់វា។ ដើម្បី​សាកល្បង​វិធីសាស្ត្រ​ដែល​បាន​ស្នើ​ឡើង​មាន ៨

9, 30 peptides ត្រូវបានគេធ្វើក្រាហ្វិច ហើយមេគុណទំនាក់ទំនងរវាងបរិមាណរក្សាទុកដែលបានគណនា និងពិសោធន៍គឺ 0.95។ វិធីសាស្រ្តដែលបានស្នើឡើងសម្រាប់ការគណនាវិសាលគមកាំរស្មី UV នៃ peptides ក៏មានថាមពលទស្សន៍ទាយគួរឱ្យពេញចិត្តផងដែរ។ នៅក្នុងការងារនេះ acetonitrile និងដំណោះស្រាយ aqueous នៃ lithium perchlorate (0.2 M LiCLO M HClO 4) ដែលជាសារធាតុមិនងាយនឹងបង្កជាហេតុ ត្រូវបានគេប្រើជា eluents ដែលធ្វើឱ្យការកំណត់អត្តសញ្ញាណម៉ាស់ជាបន្តបន្ទាប់នៃ peptides មានការលំបាកយ៉ាងខ្លាំង។ ដូច្នេះវាហាក់ដូចជាសមរម្យសម្រាប់ពួកយើងក្នុងការអភិវឌ្ឍវិធីសាស្រ្តដោយប្រើដំណាក់កាលចល័តនៃសមាសធាតុ acetonitrile - អាស៊ីត trifluoroacetic ដែលសមាសធាតុទាំងអស់នៃសារធាតុងាយនឹងបង្កជាហេតុនិងមិនជ្រៀតជ្រែកក្នុងការវិភាគម៉ាស់។ ៩

10 3. ពិសោធន៍ HPLC ត្រូវបានអនុវត្តនៅលើក្រូម៉ាតូក្រាហ្វ Milichrome A-02 នៅលើជួរឈរ 2x75 ម.ម ជាមួយនឹងដំណាក់កាល ProntoSIL C 18 AQ (Bischoff Analysentechnik und Geräte GmbH ប្រទេសអាល្លឺម៉ង់) ក្រោមលក្ខខណ្ឌដូចខាងក្រោម៖ eluent A: 0.01 M trifluoroacetic acid; សារធាតុ B: acetonitrile; ជម្រាលលីនេអ៊ែរ: 40 នាទីពី 5 ទៅ 100% B; អត្រាលំហូរ: 100 μl / នាទី; សីតុណ្ហភាពជួរឈរ: 40 C; ការរកឃើញ: នៅ 210, 220, 230, 240, 250, 260, 280 និង 300 nm, τ = 0.18 s; បរិមាណគំរូ: 4 μl។ ដំណោះស្រាយសម្រាប់ការធ្វើតេស្តប្រព័ន្ធក្រូម៉ាតៈ KBr - 0.2 mg/ml; uridine - 0,2 មីលីក្រាម / មីលីលីត្រ; ជាតិកាហ្វេអ៊ីន - 1 មីលីក្រាម / មីលីលីត្រ; m-nitroaniline - 0,1 មីលីក្រាម / មីលីលីត្រ; o-nitroaniline-0.1 មីលីក្រាម / មីលីលីត្រ; សារធាតុរំលាយ 2% acetonitrile ក្នុងទឹក។ សារធាតុប្រតិកម្មទាំងអស់ដែលមានប្រភាគធំនៃសារធាតុសំខាន់យ៉ាងហោចណាស់ 98% ។ អាស៊ីតអាមីណូ (Serva, អាល្លឺម៉ង់), acetonitrile “ថ្នាក់ទី 0” (NPF “Kriochrome”, St. Petersburg) និងអាស៊ីត trifluoroacetic ដែលគ្មានជាតិទឹក (ICN Biomedicals សហរដ្ឋអាមេរិក) ត្រូវបានប្រើប្រាស់ក្នុងការងារនេះ។ សំណាក Peptide ត្រូវបានផ្តល់ដោយ V.V. Samukov (NPO “Vector”, Novosibirsk) និង I.V. Nazimov (IBCh RAS, Moscow) ។ ការប្រមូលផ្តុំអាស៊ីតអាមីណូនៅក្នុងដំណោះស្រាយក្រូម៉ាតូក្រាហ្វគឺ 0,2 1 មីលីក្រាម / មីលីលីត្រ peptides 0,1 2 មីលីក្រាម / មីលីលីត្រ។ Chromatograms ត្រូវបានដំណើរការដោយប្រើកម្មវិធី Multichrome (Ampersend JSC, Moscow)។ ដើម្បីគណនា VR តំបន់នៃកំពូល chromatographic នៅពេលរកឃើញនៅ 8 រលកពន្លឺ (S λ) និងការតំណាងក្រាហ្វិកនៃ chromatograms peptide កម្មវិធី "CHROM P" (វិទ្យាស្ថាន ZAO នៃក្រូម៉ាតូក្រាម "EcoNova" Novosibirsk) ត្រូវបានប្រើ។ លីនេអ៊ែរនៃខ្សែកោងដែលបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 1 ត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើកម្មវិធី Microsoft Excel (Microsoft Corporation) ។ ១០

11 4. លទ្ធផល និងការពិភាក្សារបស់ពួកគេ 4.1. ការត្រួតពិនិត្យស្ថេរភាពនៃប្រព័ន្ធ chromatographic ស្ថេរភាពនៃប្រព័ន្ធ chromatographic ត្រូវបានត្រួតពិនិត្យដោយប្រើនីតិវិធីគ្រប់គ្រងដោយវិធីសាស្រ្ត។ ដំណោះស្រាយតេស្តត្រូវបានគណនាដោយ chromatographed និង 14 ប៉ារ៉ាម៉ែត្រត្រូវបានគណនាពីលទ្ធផល chromatograms ដែលនីមួយៗគ្រប់គ្រងសូចនាករជាក់លាក់នៃប្រព័ន្ធ chromatographic: VR bromide ion free volume of the column; សមាមាត្រវិសាលគម S 280 / S 250 នៃ uridine; ភាពត្រឹមត្រូវនៃការលៃតម្រូវឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាក្នុងចន្លោះពី 250 ទៅ 280 nm; សមាមាត្រវិសាលគម S 260 / S 280 ជួរលីនេអ៊ែរជាតិកាហ្វេអ៊ីននៃឧបករណ៍ចាប់; សមាមាត្រវិសាលគម S 260 / S 230 m - ភាពសមស្របរបស់ nitroaniline នៃ eluent A. កំពូល o-nitroaniline ត្រូវបានប្រើដើម្បីគ្រប់គ្រង៖ គម្លាត V R នៃជម្រាលពីរូបរាងដែលបានផ្តល់ឱ្យ សមាមាត្រវិសាលគម ភាពត្រឹមត្រូវនៃការលៃតម្រូវឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាក្នុងចន្លោះពី 210 ទៅ 300 nm ។ asymmetry នៃកំពូល A ការរំលោភ 10% ក្នុងការវេចខ្ចប់ជួរឈរ ភាពត្រឹមត្រូវនៃការចាក់ថ្នាំគំរូ S 210 ។ ការវាស់វែងតាមកាលកំណត់នៃប៉ារ៉ាម៉ែត្រ chromatographic និង spectral នៃដំណោះស្រាយគំរូបានអនុញ្ញាតឱ្យយើងផ្ទៀងផ្ទាត់លទ្ធភាពនៃការផលិតឡើងវិញនៃប្រតិបត្តិការនៃប្រព័ន្ធ chromatographic ដែលបានប្រើ។ លទ្ធផលនៃការធ្វើតេស្តត្រូវបានបង្ហាញក្នុងតារាង 2. តារាងទី 2. លទ្ធផលនៃការធ្វើតេស្តប្រព័ន្ធក្រូម៉ាត, n = 8. ប៉ារ៉ាម៉ែត្រសារធាតុ 11 តម្លៃមធ្យមនៃប៉ារ៉ាម៉ែត្រ S r (%) Bromide V R, µl 148 1.0 Uridine S 280 /S 250 0.53 1.3 ជាតិកាហ្វេអ៊ីន S 260 /S 280 0.73 0.6 m-nitroaniline S 260 /S 230 0.80 1.0 o-nitroaniline V R, µl,6 S 220 /S 210 1.71 0.5 S 230 /S 210 .S.210 1.710 60 / ស 210 0.58 0.9 S 250 /S 210 0.40 1.4 S 280 /S 210 0.59 0.9 S 300 /S 210 0.32 1.2 A 10% 1.05 1.1 សញ្ញាទិន្នផល (តំបន់កំពូល, 10 ព. µl 25.00 1.4

12 តម្លៃដែលទទួលបាននៃ S r អនុញ្ញាតឱ្យយើងធ្វើការសន្និដ្ឋានអំពីស្ថេរភាពនៃប្រព័ន្ធ chromatographic ដែលបានពិពណ៌នា ការគណនាបរិមាណរក្សា peptide ទិន្នន័យ chromatographic ដំបូងដែលចាំបាច់សម្រាប់ការគណនាមេគុណរក្សាអាស៊ីតអាមីណូត្រូវបានទទួលពី chromatograms នៃអាស៊ីតអាមីណូទាំងនេះ និង peptides GG និង GGG ក្រោមលក្ខខណ្ឌដែលបានបញ្ជាក់ក្នុងផ្នែកទី 3 ។ មេគុណរក្សាអាស៊ីតអាមីណូដែលគណនាដោយប្រើសមីការ៖ Z i = V Ri V 0 Z C*+N* (5) ដែល V Ri គឺជាបរិមាណរក្សាអាស៊ីតអាមីណូ “i”; V 0 បរិមាណទំនេរនៃជួរឈរ (បរិមាណរក្សា Br -, នៅក្នុងប្រព័ន្ធ chromatographic នេះគឺ 148 µl); Z C + N គឺជាថេររក្សាសរុបនៃក្រុមស្ថានីយនៃ peptide ។ Z C+N ត្រូវបានគណនាដោយប្រើសមីការ៖ Z C*+N* = V R (G) V 0 ((6) ដែល V R (G) គឺជាបរិមាណរក្សាទុកនៃ glycine, μL; V R (GGG) និង v R (GG) គឺជាបរិមាណរក្សានៃ GGG និង GG peptides , µl ផលបូកនៃមេគុណរក្សានៃក្រុមចុង [(-NH 2) + (-CONH 2)] ត្រូវបានចាត់ទុកថាស្មើនឹងផលបូកនៃមេគុណរក្សានៃក្រុម [(- NH 2) + (-)].ទិន្នន័យ Chromatographic និងគណនាថេររក្សានៃធាតុរចនាសម្ព័ន្ធនៃ peptides ត្រូវបានផ្តល់ឱ្យក្នុងតារាងទី 3 ។ តារាងទី 3. បរិមាណរក្សាទុកនៃអាស៊ីតអាមីណូ និង peptides GG និង GGG រក្សាថេរនៃធាតុរចនាសម្ព័ន្ធនៃ peptides លេខកូដ V R , μl Z i, μl កូដ V R, μl Z i, μl N P S V G M Q Y D I H L T F E W K GG C GGG A (C*+N*) បញ្ចប់ - 25 R

13 គំរូលីនេអ៊ែរ "ការរក្សាសមាសភាព" ដើម្បីទស្សន៍ទាយបរិមាណរក្សាទុកនៃ peptides ក្នុងក្របខ័ណ្ឌនៃគំរូលីនេអ៊ែរដែលបានស្នើឡើងក្នុងការងារ យើងបានគណនាបរិមាណរក្សាទុកនៃ peptides 28 (តារាងទី 4) ហើយប្រៀបធៀបទិន្នន័យដែលទទួលបានជាមួយនឹងទិន្នន័យដែលបានរកឃើញដោយពិសោធន៍ (រូបភាព ១). តារាងទី 4. បានរកឃើញដោយពិសោធន៍ និងគណនាបរិមាណរក្សា peptide (គំរូលីនេអ៊ែរ)។ Peptide V R (exp.), µl V R (calc.), µl 1 GG GGG AS GRGDS TKPR WAGGDASGE GL MY KPVGKKKRRPVKVYP W-D-YGGDASGE W-D-AGGDA NCMLDY SYSMEHFRWG W-D-VGGGDASGE YFRPGHFRYPWG F YGGFLRRRPKL K YGGFM DRVYIHPF QATVGDINTERPGMLDFTGK ELYENKRPRRPYIL DRVYIHPFHL Y-D-AGFL RPKPQQFFGLM -NH PQQFFGLM-NH GIGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ-NH

14 V VR R(calc.), µl VR(exp.), R µl រូប។ 1. ការប្រៀបធៀបនៃការពិសោធន៍ដែលបានរកឃើញ និងគណនាបរិមាណរក្សាទុក peptide ។ ការគណនាតម្លៃ VR ត្រូវបានអនុវត្តតាមសមីការ (1) ។ ដូចដែលអាចមើលឃើញពីទិន្នន័យដែលទទួលបាន គំរូលីនេអ៊ែរផ្តល់លទ្ធផលជាទីគាប់ចិត្តសម្រាប់តែ peptides hydrophilic ប៉ុណ្ណោះ។ សម្រាប់ peptides hydrophobic តម្លៃដែលបានគណនាគឺខ្ពស់ជាងការពិសោធន៍គួរឱ្យកត់សម្គាល់។ លទ្ធផលស្រដៀងគ្នានេះត្រូវបានទទួលនៅក្នុងការងារគំរូ "ការរក្សាសមាសភាព" មិនលីនេអ៊ែរ លីនេអ៊ែរនៃខ្សែកោងដែលបង្ហាញក្នុងរូបភព។ 1 ផ្តល់សមីការ៖ V R = 173 [(n Z i) + V 0 ] 1/3 785 (7) ការប្រៀបធៀបតម្លៃដែលបានគណនា និងបរិមាណរក្សាទុកដែលបានរកឃើញដោយពិសោធន៍សម្រាប់ 28 peptides ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងតារាងទី 5 និងរូបភព។

15 V R (calc.), µl VR VR (exp.), µl V R រូប។ 2. ការប្រៀបធៀបនៃការពិសោធន៍ដែលបានរកឃើញ និងគណនាបរិមាណរក្សាទុក peptide ។ ការគណនាតម្លៃ VR ត្រូវបានអនុវត្តតាមសមីការ (7) ។ ១៥

16 តារាងទី 5. បានរកឃើញដោយពិសោធន៍ និងគណនាបរិមាណរក្សាទុក peptide (គំរូមិនមែនលីនេអ៊ែរ)។ Peptide V R (exp.), µl V R (calc.), µl 1 GG GGG AS GRGDS TKPR WAGGDASGE GL MY KPVGKKKRRPVKVYP W-D-YGGDASGE W-D-AGGDA NCMLDY SYSMEHFRWG W-D-VGGGDASGE YFRPGHFRYPWG F YGGFLRRRPKL K YGGFM DRVYIHPF QATVGDINTERPGMLDFTGK ELYENKRPRRPYIL DRVYIHPFHL Y-D-AGFL RPKPQQFFGLM -NH PQQFFGLM-NH GIGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ-NH មេគុណទំនាក់ទំនងនៃការពឹងផ្អែក V R (calc.)=f(v R (exp.)) គឺ 0.96 ។ ឧបសម្ព័ន្ធបង្ហាញពីការពិសោធន៍ និងគណនាក្រូម៉ាតូក្រាមនៃល្បាយគំរូនៃ 11 peptides ។ ១៦

១៧ ៤.៣. ការគណនាវិសាលគមកាំរស្មី UV នៃ peptides មេគុណវិសាលគមជាក់លាក់នៃធាតុរចនាសម្ព័ន្ធនៃ peptides ត្រូវបានយកចេញពីការងារដោយសារតែ នៅក្នុងប្រព័ន្ធ chromatographic ដែលយើងប្រើ ការគណនាត្រឹមត្រូវនៃសមាមាត្រវិសាលគមត្រូវបានរារាំងដោយប្រព័ន្ធកំពូល ក៏ដូចជាការរក្សាទុកអាស៊ីតអាមីណូ hydrophilic និង peptides ខ្លី។ តម្លៃនៃមេគុណវិសាលគមជាក់លាក់ត្រូវបានផ្តល់ក្នុងតារាងទី 6 e.o.p. μl) ។ λ, nm W F Y H C M R Q N E D N*+C* PS ដែល S C*+N* មេគុណវិសាលគមនៃផលបូកនៃក្រុម (-NH+ -) នៃ peptide ការស្រូបយក S PS នៃចំណង peptide ។ លក្ខណៈវិសាលគមនៃ peptides ជាតំបន់នៃកំពូល chromatographic របស់ពួកគេនៅ C = 1 mM និងបរិមាណគំរូនៃ 4 μl ត្រូវបានគណនាដោយប្រើសមីការ: a λ peptide = a λ N * + C * + (m-1) a λ λ PS + a i (9) ដែល m គឺជាចំនួនសរុបនៃសំណល់អាស៊ីតអាមីណូនៅក្នុង peptide មួយ λ N * + C* គឺជាតំបន់កំពូលតាមលក្ខខណ្ឌនៃក្រុមស្ថានីយនៃ peptide ហើយ λ PS គឺជាក់លាក់ ការស្រូបយកចំណង peptide នៅចម្ងាយរលក λ λ ហើយ i គឺជាលក្ខណៈវិសាលគមនៃសំណល់អាស៊ីតអាមីណូសម្រាប់រលក λ ។ បរិមាណដែលរួមបញ្ចូលក្នុងសមីការ (9) ត្រូវបានទទួលដូចខាងក្រោម។ លក្ខណៈវិសាលគមជាក់លាក់នៃធាតុរចនាសម្ព័ន្ធនៃ peptides នៅរលកចម្ងាយλ = 210 nm (a 210 i) ត្រូវបានគណនាជាតំបន់នៃកំពូល chromatographic របស់ពួកគេសម្រាប់ដំណោះស្រាយដែលមានកំហាប់ 1 mM និងបរិមាណគំរូ 4 μl យោងទៅតាម ទៅសមីការ៖ a 210 i = a 210 AA a 210 N*+C *, (10) ដែល 210 AA គឺជាតំបន់កំពូលនៃអាស៊ីតអាមីណូ; a 210 N*+C* គឺជាតំបន់កំពូលធម្មតានៃក្រុមស្ថានីយនៃ peptide ។ តម្លៃនៃ 210 N*+C* ត្រូវបានគេយកស្មើនឹង 210 Leu ចាប់តាំងពីក្រុម NH 2 គឺជាក្រូម៉ូសូម Leu តែមួយគត់នៅក្នុងជួររលក nm ។ ១៧

18 ការស្រូបយកជាក់លាក់នៃចំណង peptide (a 210 PS) ត្រូវបានគណនាថាជាភាពខុសគ្នារវាងការស្រូបយកជាក់លាក់នៃ GGG និង GG peptides: a 210 PS = a GGG a GG (11) លក្ខណៈវិសាលគមសម្រាប់រលក λ ត្រូវបានគណនាដោយប្រើសមីការ : a λ i = a 210 i (S λ /S 210), (12) ដែល S λ / S 210 គឺជាសមាមាត្រវិសាលគមនៃអាស៊ីតអាមីណូ និង peptides GG និង GGG ដែលជាសមាមាត្រនៃតំបន់កំពូលនៅចម្ងាយរលក λ ទៅ តំបន់កំពូលនៅ λ = 210 nm ។ តារាងទី 7 បង្ហាញពីការប្រៀបធៀបនៃសមាមាត្រវិសាលគមដែលបានគណនា S λ / S 210 សម្រាប់ 28 peptides ជាមួយនឹងអ្នកដែលទទួលបានដោយពិសោធន៍។ អនុបាតវិសាលគមដែលបានទទួល និងគណនាដោយពិសោធន៍នៃ peptides គឺស្ថិតក្នុងការព្រមព្រៀងគ្នាយ៉ាងល្អ។ ក្នុងករណីភាគច្រើន ភាពខុសគ្នាគឺមិនលើសពី 0.06 ទេ។ សម្រាប់ peptides មួយចំនួន (5, 9, 12, 16, 18, 22, 23, 26, 27) ភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់បន្ថែមទៀតនៅក្នុងសមាមាត្រទស្សន៍ទាយ និងការពិសោធន៍ត្រូវបានអង្កេត។ ហេតុផលសម្រាប់ភាពខុសគ្នាទាំងនេះតម្រូវឱ្យមានការស្រាវជ្រាវបន្ថែម។ តារាងទី 7. ការប្រៀបធៀបតម្លៃពិសោធន៍និងគណនានៃសមាមាត្រវិសាលគមនៃ peptides ។ សមាមាត្រតម្លៃ Spectral របស់ Peptide S λ /S 210 សម្រាប់រលកប្រវែង λ(nm): Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp

19 សមាមាត្រតម្លៃ Spectral នៃ Peptide S λ /S 210 សម្រាប់រលកប្រវែង λ(nm): Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Vych Exp Calc Exp Calc Exp

20 សមាមាត្រតម្លៃ Spectral នៃ Peptide S λ /S 210 សម្រាប់ប្រវែងរលក λ(nm): Vt Exp V V Exp ពីទិន្នន័យដែលទទួលបាន វាច្បាស់ណាស់ថាវិធីសាស្ត្រដែលបានពិពណ៌នាសម្រាប់ការគណនាបរិមាណរក្សាទុកនៃ peptides នៃសមាសភាពដែលគេស្គាល់ និងកាំរស្មី UV របស់ពួកគេនៅក្រោមលក្ខខណ្ឌនៃជម្រាល RP HPLC មានថាមពលទស្សន៍ទាយដែលគួរឱ្យពេញចិត្ត ហើយអាចមានប្រយោជន៍ក្នុងការសិក្សាដែលពាក់ព័ន្ធនឹងការបំបែកល្បាយនៃ peptides ។ ២០

21 5. សេចក្តីសន្និដ្ឋាន 1. វិធីសាស្រ្តមួយត្រូវបានបង្កើតឡើងដែលធ្វើឱ្យវាអាចទស្សន៍ទាយបរិមាណរក្សាទុកនៃ peptides នៃសមាសធាតុដែលគេស្គាល់នៅក្នុងរបៀប RP HPLC ជម្រាលនៅលើ Milichrome A-02 chromatograph ដោយប្រើដំណាក់កាលចល័តងាយនឹងបង្កជាហេតុដែលសមរម្យសម្រាប់ការណែនាំដោយផ្ទាល់នៃប្រភាគដាច់ដោយឡែក។ ចូលទៅក្នុងម៉ាស់ spectrometer ។ 2. វិធីសាស្រ្តមួយត្រូវបានបង្កើតឡើងសម្រាប់ការគណនាការស្រូបយកអុបទិកនៃ peptides នៅរលកនៃ 210, 220, 230, 240, 250, 260, 280 និង 300 nm ដោយផ្ទាល់នៅក្នុងដំណាក់កាលចល័តដែលប្រើដើម្បីបំបែក peptides ។ 3. វិធីសាស្រ្តដែលបានបង្កើតត្រូវបានសាកល្បងសម្រាប់ 28 peptides គំរូ។ មេគុណទំនាក់ទំនងនៃបរិមាណរក្សាទុកដែលបានគណនាជាមួយនឹងតម្លៃពិសោធន៍ដែលត្រូវគ្នាគឺ 0.96 ។ ភាពខុសគ្នារវាងសមាមាត្រដែលបានគណនា និងពិសោធន៍ដែលទទួលបាន S λ / S 210 គឺមិនលើសពី 0, ឯកសារយោង 1. Reznikov V.A., Shteingarts V.D. អាស៊ីតអាមីណូ។ Novosibirsk: NSU, S. Dawson R., Elliott D., Elliott W., Jones K. Handbook of a biochemist. ទីក្រុងម៉ូស្គូ: Mir, ទំ។ 3. Ovchinnikov Yu.A. ជីវគីមីវិទ្យា។ ទីក្រុងម៉ូស្គូ: ការត្រាស់ដឹង, ទំ។ 4. ជីវគីមីវិទ្យាដែលមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់ (កែសម្រួលដោយ Henschen A.)។ ទីក្រុងម៉ូស្គូ: Mir, ទំ។ 5. Meek J.L. // ប្រូក ណាតល អាកាដ។ វិទ្យាសាស្ត្រ។ សហរដ្ឋអាមេរិក។ ឆ្នាំ 1980, V. 77. លេខ 3 ។ P Sakamoto Y., Kawakami N., Sasagawa T. // J. Chromatogr V P Sasagawa T., Okuyama T., Teller D.C. // J. Chromatogr V P Browne C.A., Bennet H.P.J., Solomon S. // រន្ធគូថ។ ជីវគីមី V.124. P Meek J.L., Rossetti Z.L. // J. Chromatogr V P Azarova I.N., Baram G.I., Goldberg E.L. // ជីវគីមីវិទ្យា។ នៅក្នុងសារព័ត៌មាន។ 11. ការប្រមូលផ្តុំដ៏ធំនៃសារធាតុស្រូបយកកាំរស្មីយូវី។ វិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការអនុវត្តការវាស់វែងដោយប្រើក្រូម៉ាតូក្រាមរាវដែលមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់។ FR Irkutsk

22 7. ឧបសម្ព័ន្ធពិសោធន៍ (A) និងគណនា (B) chromatograms នៃល្បាយនៃ 11 peptides ។ លេខ peptide ស្របតាមតារាង A 0.5 e.o.p nm B nm Volume, µl

ក្រសួងអប់រំ និងវិទ្យាសាស្ត្រនៃសហព័ន្ធរុស្ស៊ី ទីភ្នាក់ងារសហព័ន្ធសម្រាប់ការអប់រំ NOVOSIBIRSK STATE UNIVERSITY មហាវិទ្យាល័យវិទ្យាសាស្ត្រធម្មជាតិ នាយកដ្ឋាន៖ គីមីវិទ្យា វិភាគ

មេរៀនទី១៖ រចនាសម្ព័ន្ធបឋមនៃប្រូតេអ៊ីន - អាស៊ីតអាមីណូ 1 ភាពចម្រុះនៃប្រូតេអ៊ីន មុខងារជីវសាស្ត្រជាច្រើនរបស់រាងកាយត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រូតេអ៊ីន។ មុខងារទាំងនេះរួមមានការដឹកជញ្ជូន និងការផ្ទុកអុកស៊ីសែន (អេម៉ូក្លូប៊ីន

273 UDC 543. 544 ការបំបែកធាតុបង្កកំណើតនៃអាស៊ីតអាមីណូលើ β-cyclodextrin នៃអាមីនដោយវិធីសាស្រ្តនៃដំណើរការខ្ពស់នៃអង្គធាតុរាវ ក្រូម៉ាតូក្រាម I. A. Ananyeva, E. N. S. Shapovalova

1. ចំណង covalent នៅក្នុងប្រូតេអ៊ីន និងអង់ស៊ីម។ ផ្តល់ឧទាហរណ៍។ TICKET 1 2. តើអ្វីជាមូលដ្ឋានសម្រាប់ការបំបែកប្រូតេអ៊ីនដោយប្រភាគនៅក្នុងវត្តមាននៃកំហាប់អំបិលខុសៗគ្នា។ តើ​វិធី​នេះ​កម្ចាត់​ជាតិពុល​អ្វីខ្លះ​?

ប្រធានបទ 23. អាមីន។ អាស៊ីតអាមីណូ និង peptides ខ្លឹមសារប្រធានបទ៖ អាមីណេ ចំណាត់ថ្នាក់ និងនាមនាមរបស់វា។ វិធីសាស្រ្តនៃការរៀបចំនិងលក្ខណៈសម្បត្តិគីមីនៃអាមីន។ Aniline ដែលជារចនាសម្ព័ន្ធអេឡិចត្រូនិចរបស់វា។ ភាពអាស្រ័យនៃលក្ខណៈសម្បត្តិមូលដ្ឋាន

T.P. វ៉ាវីឡូវ៉ា A.E. Medvedev គីមីវិទ្យាជីវគីមី ជីវគីមីនៃបែហោងធ្មែញមាត់ សៀវភៅសិក្សា ក្រសួងអប់រំ និងវិទ្យាសាស្ត្រនៃសហព័ន្ធរុស្ស៊ី ណែនាំដោយស្ថាប័នអប់រំថវិការដ្ឋនៃការអប់រំវិជ្ជាជីវៈខ្ពស់ "សាកលវិទ្យាល័យវេជ្ជសាស្ត្ររដ្ឋមូស្គូដំបូងគេដាក់ឈ្មោះតាម

វិទ្យាស្ថានរូបវិទ្យា និងបច្ចេកវិទ្យាទីក្រុងមូស្គូ (សាកលវិទ្យាល័យរដ្ឋ) នាយកដ្ឋានរូបវិទ្យា ម៉ូលេគុល និងជីវវិទ្យា វិធីសាស្រ្តស្រាវជ្រាវរូបវិទ្យា មេរៀនទី 9 Liquid chromatography វិធីសាស្រ្ត និងបច្ចេកវិទ្យា

ក្រសួងសុខភាពនៃសហព័ន្ធរុស្សី អត្ថបទឱសថស្ថាន Indapamide FS.2.1.0017.15 Indapamide Indapamide ជំនួស FS 42-0303-08 N-[(2RS)-2-Methyl-2,1-Dyl]hydro 3-sulfamoyl -4-chlorobenzamide

អាស៊ីតអាមីណូ។ PEPTIDES ។ ប្រូតេអ៊ីនអាស៊ីតអាមីណូគឺជាអាស៊ីត carboxylic ដែលអាតូមអ៊ីដ្រូសែនមួយឬច្រើនត្រូវបានជំនួសដោយក្រុមអាមីណូនៅក្នុងរ៉ាឌីកាល់អ៊ីដ្រូកាបូន។ អាស្រ័យលើទីតាំងដែលទាក់ទង

ជីវគីមីវិទ្យា កែសម្រួលដោយសមាជិកដែលត្រូវគ្នានៃបណ្ឌិត្យសភាវិទ្យាសាស្ត្ររុស្ស៊ី សាស្រ្តាចារ្យ E.S. ការបោះពុម្ពលើកទី 5 របស់ SEVERINA ដែលត្រូវបានកែសម្រួល និងពង្រីកសៀវភៅសិក្សាដែលត្រូវបានណែនាំដោយសមាគមអប់រំ និងវិធីសាស្រ្តសម្រាប់វេជ្ជសាស្ត្រ និងឱសថ

1 អាស៊ីតអាមីណូ និងប្រូតេអ៊ីន រចនាសម្ព័ន្ធ លក្ខណៈសម្បត្តិ Spirals ត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងផ្នែកជាច្រើន៖ នៅក្នុងស្ថាបត្យកម្ម នៅក្នុង macromolecules នៃប្រូតេអ៊ីន អាស៊ីត nucleic និងសូម្បីតែនៅក្នុង polysaccharides (Loretto hapel, Santa Fe, NM/ Sarbo)

ក្រសួងអប់រំ និងវិទ្យាសាស្ត្រនៃរដ្ឋសហព័ន្ធរុស្ស៊ី ស្ថាប័នអប់រំស្វយ័តនៃរដ្ឋសហព័ន្ធនៃការអប់រំឧត្តមសិក្សា "NOVOSIBIRSK NATIONAL RESEARCH STATE UNIVERSITY" មហាវិទ្យាល័យវិទ្យាសាស្ត្រធម្មជាតិ

APP NOTE-16/2016LC សមត្ថភាពវិភាគនៃវត្ថុធាតុរាវ MaestroHPLC ជាមួយនឹងឧបករណ៍ចាប់រំហួតពន្លឺដែលមានសីតុណ្ហភាពទាប MAESTRO ELSD ដោយប្រើឧទាហរណ៍នៃការកំណត់អាស៊ីតអាមីណូនៅក្នុង hydrolyzate

8. សំណួរ 1. កំណត់ chromatography ។ 2. តើលក្ខណៈពិសេសអ្វីខ្លះនៃក្រូម៉ូសូមធ្វើឱ្យវាអាចសម្រេចបាននូវការបំបែកសារធាតុដែលមានលក្ខណៈសម្បត្តិស្រដៀងគ្នាបើប្រៀបធៀបទៅនឹងវិធីសាស្ត្របំបែកផ្សេងទៀត។ 3. បញ្ជី

ក្រសួងអប់រំ និងវិទ្យាសាស្ត្រនៃ RF សហព័ន្ធរដ្ឋថវិកា វិទ្យាស្ថានអប់រំនៃការអប់រំវិជ្ជាជីវៈកម្រិតខ្ពស់ “NIZHNY NOVGOROD សាកលវិទ្យាល័យបច្ចេកទេសរដ្ឋ បានដាក់ឈ្មោះតាម R.E.

1 លក្ខណៈពិសេសនៃរចនាសម្ព័ន្ធ ប្រតិកម្ម និងវិធីសាស្រ្តនៃការសំយោគអាស៊ីតអាមីណូ។ ប្រូតេអ៊ីន សមាសធាតុដែលមានទាំងក្រុមមុខងារអាស៊ីត និងក្រុមអាមីណូគឺជាអាស៊ីតអាមីណូ។ អាស៊ីត - មូលដ្ឋាន

អត្ថប្រយោជន៍ពី Agilent AdvanceBio SEC Size Exclusion Chromatography Columns សម្រាប់ការវិភាគ Biopharmaceutical ប្រៀបធៀបជួរឈរពីក្រុមហ៊ុនផលិតជាច្រើនសម្រាប់ការកែលម្អគុណភាពទិន្នន័យ ទិដ្ឋភាពទូទៅបច្ចេកទេស

"មន្ទីរពិសោធន៍រោងចក្រ។ ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យនៃសម្ភារៈ" 4. 2007. លេខ 73 23 UDC 543.544 ការកំណត់អាស៊ីតអាមីណូនៅក្នុងគ្រឿងញៀនដោយដំណាក់កាលបញ្ច្រាស HPLC ជាមួយ AMPEROMETRIC DETECTION M. G.

UDC 615.22.074: 543.544.5.068.7.062 សុពលភាពនៃវិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការកំណត់បរិមាណនៃ TRIMETAZIDINE DIHYDROCHLORIDE ក្នុង 0.02 ក្រាម ថេប្លេត E. V.Kompanorsyb.Marttseva

ការ​ត្រៀម​ខ្លួន​សម័យ​ទំនើប FLASH CHROMATOGRAPHY Part 2* A. Abolin, Ph.D., "GalaKhim" [អ៊ីមែលការពារ] P.-F. Icarus, Interchim (បារាំង) យើងបន្តបោះពុម្ពសម្ភារៈលើវិធីសាស្រ្តទំនើបនៃការរៀបចំ

ឧបសម្ព័ន្ធនៃវិញ្ញាបនបត្រ 44071 សន្លឹកទី 1 ស្តីពីការអនុម័តលើប្រភេទឧបករណ៍វាស់ ការពិពណ៌នាអំពីប្រភេទនៃឧបករណ៍វាស់វែង ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វរាវដែលមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់ “Milichrome A-02”, “Alphachrom A-02” (“Alphachrom A-02”)

ស្តង់ដាររដ្ឋនៃប្រទេសរុស្ស៊ី វិទ្យាស្ថានស្រាវជ្រាវស៊ីបេរីខាងកើត នៃវិធានការរូបវិទ្យា-បច្ចេកទេស និងវិទ្យុ-បច្ចេកទេស វិញ្ញាបនប័ត្រវិញ្ញាបនបត្រ MVI 02-2002 វិធីសាស្រ្តសម្រាប់អនុវត្តការវាស់វែងកំហាប់ម៉ាស

ផ្នែកទី 1 ការកំណត់ចម្ងាយវិវត្តន៍ និងអត្រានៃការវិវត្តន៍នៃអាស៊ីតអាមីណូ 1.1 ។ ទ្រឹស្តីជាមូលដ្ឋាន ចម្ងាយវិវត្តន៍រវាងលំដាប់អាស៊ីតអាមីណូ (ទំ, ឃ) មធ្យម

01/2016:20255 2.2.55. PEPTIDE MAPPING ការគូសផែនទី Peptide គឺជាវិធីសាស្ត្រមួយសម្រាប់កំណត់អត្តសញ្ញាណប្រូតេអ៊ីន ជាពិសេសអ្នកដែលផលិតដោយ DNA ផ្សំឡើងវិញ។ វិធីសាស្រ្តរួមមានគីមីឬអង់ស៊ីម

ក្រសួងអប់រំនិងវិទ្យាសាស្ត្រនៃសហព័ន្ធរុស្ស៊ីថវិការដ្ឋសហព័ន្ធវិទ្យាស្ថានអប់រំនៃឧត្តមសិក្សា "សាកលវិទ្យាល័យស្រាវជ្រាវជាតិសារ៉ាតូវ"

ការអនុលោមតាមប្រូតេអ៊ីន៖ គោលការណ៍នៃការបង្កើត 1. ចំណងដែលកំណត់ការអនុលោមតាមម៉ូលេគុលប្រូតេអ៊ីន ចំណង covalent: peptide disulfide អន្តរកម្មមិន-covalent: អន្តរកម្មអ៊ីយ៉ុង ចំណងអ៊ីដ្រូសែន

ទីភ្នាក់ងារអប់រំសហព័ន្ធ ស្ថាប័នអប់រំរដ្ឋនៃការអប់រំវិជ្ជាជីវៈខ្ពស់ “សាកលវិទ្យាល័យ Ural State ដាក់ឈ្មោះតាម។ A.M. Gorky" IONC "បរិស្ថានវិទ្យា និងការគ្រប់គ្រងធម្មជាតិ"

ក្រសួងសុខភាពនៃសហព័ន្ធរុស្ស៊ី អត្ថបទឱសថសាស្ត្រ Ketorolac trometamol FS.2.1.0022.15 Ketorolac trometamol Ketorolacum trometamolum ជំនួសឱ្យ GF XII, ផ្នែកទី 1, FS4-1.0022-Benzo 42-22-Benzohydro-5-Benzo 1H- pyrrolysine-1 -carboxylate

វិទ្យាស្ថានរូបវិទ្យា និងបច្ចេកវិទ្យាមូស្គូ (សាកលវិទ្យាល័យរដ្ឋ) នាយកដ្ឋានរូបវិទ្យា ម៉ូលេគុល និងជីវសាស្រ្ត វិធីសាស្រ្តស្រាវជ្រាវរូបវិទ្យា បាឋកថា 8 ឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាក្នុងក្រូម៉ាតូក្រាម Liquid chromatography

ក្រសួងសុខភាពនៃសហព័ន្ធរុស្សី អត្ថបទឱសថសាស្ត្រ Meloxicam FS.2.1.0025.15 Meloxicam Meloxicamum ជំនួសឱ្យ GF XII ផ្នែកទី 1 FS 42-0254-07 4-3-Methyloxy-1-2-methylazol -2- អ៊ីល)-1,1-dioxo-1λ

វិទ្យាស្ថានជាតិនៃវិទ្យាសាស្ត្រនៃបេឡារុស្ស RUE "មជ្ឈមណ្ឌលស្រាវជ្រាវនិងការអនុវត្តជាក់ស្តែងនៃបណ្ឌិត្យសភាជាតិនៃវិទ្យាសាស្ត្របេឡារុស្សសម្រាប់អាហារ" បច្ចេកវិទ្យាច្នៃប្រឌិតក្នុងឧស្សាហកម្មម្ហូបអាហារ សម្ភារៈនៃវិទ្យាសាស្ត្រអន្តរជាតិ XI និងអន្តរជាតិ

លក្ខណៈទូទៅនៃការងារ ភាពពាក់ព័ន្ធនៃការងារ បច្ចុប្បន្ននេះ វិធីសាស្ត្រនៃក្រូម៉ាតូក្រាមរាវដែលមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់ (HPLC) ត្រូវបានគេប្រើយ៉ាងទូលំទូលាយដើម្បីកំណត់ និងកំណត់ខ្លឹមសារនៃសារធាតុសរីរាង្គស្មុគស្មាញ។

សុពលភាពនៃវិធីសាស្ត្រវិភាគ៖ ការអនុវត្តជាក់ស្តែង។ Pisarev V.V., Ph.D., MBA, អគ្គនាយករងនៃសហគ្រាសឯកតារដ្ឋសហព័ន្ធ "មជ្ឈមណ្ឌលវិទ្យាសាស្ត្ររដ្ឋសម្រាប់ថ្នាំអង់ទីប៊ីយោទិច", ទីក្រុងម៉ូស្គូ (www.pisarev.ru) សេចក្តីផ្តើម

២.២.២៩. ក្រូម៉ាតូក្រាមរាវដែលមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់ (HPLC) គឺជាវិធីសាស្ត្របំបែកដោយផ្អែកទៅលើការបែងចែកឌីផេរ៉ង់ស្យែលនៃសារធាតុរវាង immiscible ពីរ។

ក្រសួងអប់រំ និងវិទ្យាសាស្ត្រនៃការស្រាវជ្រាវជាតិរុស្ស៊ី TOMSK STATE UNIVERSITY FACULTY OF CHEMISTRY កម្មវិធីការងារកំណត់សម្គាល់នៃវិន័យ វិធីសាស្រ្តនៃការវិភាគក្រូម៉ូសូម ទិសដៅនៃការបណ្តុះបណ្តាល

ការប្រើប្រាស់ផលិតផល Agilent Bond Elut Plexa ដើម្បីកាត់បន្ថយការបង្រ្កាបអ៊ីយ៉ុង និងធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវភាពរសើបរបស់ Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS) Sensitivity Guidelines Pharmaceuticals

ក្រសួងសុខភាពនៃសហព័ន្ធរុស្សី អត្ថបទឱសថ Carbamazepine FS.2.1.0020.15 Carbamazepine ជំនួស FS 42-2803-96; Carbamazepinum ជំនួសឱ្យ GF XII, ផ្នែកទី 1, FS 42-0240-07 5H-Dibenzazepine-5-carboxamide

មេរៀនទី ២២ អាមីណូអាស៊ីត។ Squirrels Work គឺជាវិធីដ៏ល្អបំផុតដើម្បីរីករាយនឹងជីវិត។ I. Kant នាមត្រកូលនៃអាស៊ីតអាមីណូ។ អាស៊ីតអាមីណូធម្មជាតិ។ Chirality នៃអាស៊ីតអាមីណូដែលបង្កើតជាប្រូតេអ៊ីន។ លក្ខណៈសម្បត្តិអាស៊ីត - មូលដ្ឋាន,

APP NOTE-10/2016LC សមត្ថភាពវិភាគនៃវត្ថុធាតុរាវ MaestroHPLC ជាមួយនឹងឧបករណ៍ចាប់អារេឌីអូត និងឧបករណ៍ចាប់រូបភាពដែលមានរលកពន្លឺថេរ (LED) ដោយប្រើឧទាហរណ៍នៃការកំណត់

មេរៀនគីមីវិទ្យា 3 α-អាមីណូអាស៊ីត peptides ប្រូតេអ៊ីន។ បាឋកថានេះត្រូវបានផ្តល់ដោយ Prof. Belavin Ivan Yuryevich 2. α-អាស៊ីតអាមីណូ peptides ប្រូតេអ៊ីន α-អាស៊ីតអាមីណូប្រូតេអ៊ីន bioregulators ប្រភពថាមពល α-អាស៊ីតអាមីណូ មុខងារច្រើន

ការងារមន្ទីរពិសោធន៍ 11. យន្តការនៃដំណើរការហ្សែនម៉ូលេគុលមូលដ្ឋាន គោលបំណងនៃមេរៀន៖ ដើម្បីស្គាល់សមាសភាពនៃ DNA និង RNA ដំណើរការនៃការចម្លង ការចម្លង និងការបកប្រែដោយប្រើឧទាហរណ៍នៃការដោះស្រាយធម្មតា

APP NOTE-34/2018LC សមត្ថភាពវិភាគរបស់ Maestro HPLC liquid chromatograph ជាមួយនឹងឧបករណ៍ចាប់អារេ diode ដោយប្រើឧទាហរណ៍នៃការកំណត់មាតិកានៃសមាសធាតុ phenolic និង furan នៅក្នុង cognacs យោងទៅតាម

សាកល្បងថ្នាំផ្សំក្នុងកម្រិតថេរសម្រាប់ភាពមិនបរិសុទ្ធដោយប្រើដំណោះស្រាយ Agilent 129 Infinity II HDR-DAD Impurity Analyzer

APP NOTE-18/2017LC សមត្ថភាពវិភាគនៃវត្ថុរាវ MaestroHPLC ដែលមានឧបករណ៍ចាប់សញ្ញា amperometric ដោយប្រើឧទាហរណ៍នៃការកំណត់ catecholamines ក្នុងប្លាស្មាឈាម Yashin A. Ya ។ Sc., វិស្វករឈានមុខគេ

GOST R 51435-99 ទឹកផ្លែប៉ោម ទឹកផ្លែប៉ោមប្រមូលផ្តុំ និងភេសជ្ជៈដែលមានទឹកផ្លែប៉ោម។ វិធីសាស្រ្តសម្រាប់កំណត់មាតិកា patulin ដោយប្រើ chromatography រាវដែលមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់។ យល់ព្រម 67.160.20

ការពិនិត្យឡើងវិញរបស់អ្នកបើកការស៊ើបអង្កេតផ្លូវការអំពីការធ្វើនិយតកម្មរបស់ Mikhail Vadimovich Shashkov "ការសិក្សានៃដំណាក់កាលរាវស្ថានីប៉ូលខ្ពស់ដោយផ្អែកលើវត្ថុរាវអ៊ីយ៉ុងសម្រាប់ chromatography ឧស្ម័ន capillary" សម្រាប់ការប្រកួតប្រជែង

ជាសាត្រាស្លឹករឹត

MELNIKOV Igor Olegovich

ការអភិវឌ្ឍន៍វិធីសាស្ត្រមីក្រូសម្រាប់ការវិភាគអាស៊ីតអាមីណូ,

PEPTIDES ខ្លី និង OLIGONUCLEOTIDES

ដោយប្រើ RP HPLC និងកាប៉ាល់

អេឡិចត្រុផូរ៉េស៊ីស

ឯកទេស៖ ០២.០០.០២ - គីមីវិទ្យាវិភាគ

វិញ្ញាសាសម្រាប់កម្រិតបេក្ខជននៃវិទ្យាសាស្ត្រគីមី

MOSCOW 2006 ការងារនិក្ខេបបទត្រូវបានបញ្ចប់នៅនាយកដ្ឋានគីមីវិទ្យាវិភាគនៃបណ្ឌិតសភាបច្ចេកទេសគីមីល្អរបស់រដ្ឋម៉ូស្គូដាក់ឈ្មោះតាម។

M.V. Lomonosov និងនៅក្នុងក្រុមនៃគីមីវិទ្យាប្រូតេអ៊ីនវិភាគនៃវិទ្យាស្ថានគីមីវិទ្យាជីវសរីរាង្គបានដាក់ឈ្មោះតាម។ អ្នកសិក្សា M.M. Shemyakin និង Yu.A. Ovchinnikov RAS ។

នាយកវិទ្យាសាស្ត្រ:

បេក្ខជននៃវិទ្យាសាស្ត្រគីមីសាស្ត្រាចារ្យរង Glubokov Yuri Mikhailovich

គូប្រជែងផ្លូវការ:

បណ្ឌិតវិទ្យាសាស្ត្រគីមីសាស្ត្រាចារ្យ Makarov Nikolay Vasilievich បេក្ខជនវិទ្យាសាស្ត្រគីមី Kirillova Yulia Gennadievna

អង្គការនាំមុខ:

វិទ្យាស្ថានរូបវិទ្យាគីមីវិទ្យា ដាក់ឈ្មោះតាម។ N.M. Emanuel RAS

ការការពារជាតិនឹងប្រព្រឹត្តទៅនៅថ្ងៃទី 20 ខែធ្នូ ឆ្នាំ 2006 វេលាម៉ោង 12:00 នៅឯកិច្ចប្រជុំនៃក្រុមប្រឹក្សានិក្ខេបបទ D 212.120.05 នៅ Moscow State Academy of Fine Chemical Technology ដាក់ឈ្មោះតាម។ M.V. Lomonosov នៅអាសយដ្ឋាន: 119571, Moscow, Vernadsky Avenue, 86, បន្ទប់។ M-119 ។

និក្ខេបបទអាចត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងបណ្ណាល័យនៃបណ្ឌិត្យសភានៃរដ្ឋម៉ូស្គូនៃបច្ចេកវិទ្យាគីមីល្អិតដែលដាក់ឈ្មោះតាម។ M.V. ឡូម៉ូណូសូវ។

លេខាធិការវិទ្យាសាស្ត្រនៃក្រុមប្រឹក្សានិក្ខេបបទបេក្ខជននៃវិទ្យាសាស្ត្រគីមី Yu.A. អេហ្វីម៉ូវ៉ា ភាពពាក់ព័ន្ធការងារ។ បច្ចុប្បន្ននេះ ការស្រាវជ្រាវផ្នែកព្យាបាលត្រូវបានផ្តោតកាន់តែខ្លាំងឡើងលើការប្រើប្រាស់វិធីសាស្ត្រមីក្រូវិភាគជាឧបករណ៍សម្រាប់ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យជំងឺសំខាន់ៗក្នុងសង្គមដែលមានគ្រោះថ្នាក់ និងទូទៅបំផុត។ ផ្នែកសំខាន់នៃវិធីសាស្រ្តទាំងនេះមិនពេញលេញនិងមិនតែងតែផ្តល់នូវការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យទាន់ពេលវេលានិងគុណភាពខ្ពស់ដែលជារឿយៗមិនបំពេញតាមតម្រូវការទំនើបសម្រាប់ការត្រួតពិនិត្យស្ថានភាពជីវគីមីរបស់មនុស្ស។

អាស៊ីតអាមីណូឥតគិតថ្លៃ និង peptides ខ្លីដែលជាផ្នែកមួយនៃសារធាតុរាវសរីរវិទ្យាមានសារៈសំខាន់មុខងារ។ ក្នុងករណីខ្លះពួកគេអាចដើរតួជាសញ្ញាសម្គាល់ម៉ូលេគុលនៃជំងឺមួយចំនួន។

ការផ្លាស់ប្តូរនៃការផ្តោតអារម្មណ៍របស់ពួកគេជារឿយៗត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងបញ្ហាមេតាប៉ូលីសដែលបង្ហាញពីការវិវត្តនៃជំងឺជាក់លាក់មួយ។ វិធីសាស្រ្តដែលមានស្រាប់ភាគច្រើនសម្រាប់ការវិភាគអាស៊ីតអាមីណូគឺមិនមានភាពរសើប និងជ្រើសរើសគ្រប់គ្រាន់សម្រាប់ការកំណត់អត្តសញ្ញាណរបស់ពួកគេ ឬតម្រូវឱ្យមានការចម្លងនៃអាស៊ីតអាមីណូ ដែលធ្វើអោយស្មុគស្មាញយ៉ាងខ្លាំងដល់ដំណើរការនៃការកំណត់របស់វា។ បញ្ហានៃការវិភាគដ៏សាមញ្ញ និងមានប្រសិទ្ធភាពនៃអាស៊ីតអាមីណូដែលបានអ៊ិនកូដហ្សែនដោយឥតគិតថ្លៃមិនទាន់ត្រូវបានដោះស្រាយពេញលេញនៅឡើយ។ ទន្ទឹមនឹងនេះ ការវិភាគគ្លីនិកនៃអាស៊ីតអាមីណូតម្រូវឱ្យមានការកែប្រែមុន ឬក្រោយជួរឈររបស់ពួកគេសម្រាប់ការប្តេជ្ញាចិត្តខ្ពស់ និងជ្រើសរើស។ ការផ្លាស់ប្តូរខ្លឹមសារនៃសញ្ញាសម្គាល់ម៉ូលេគុលនៅក្នុងអង្គធាតុរាវសរីរវិទ្យាក៏អាចត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងកត្តាហ្សែនរបស់អ្នកជំងឺចំពោះជំងឺជាក់លាក់មួយ។ ដូច្នេះហើយ ចាំបាច់ត្រូវធ្វើការវិភាគប្រៀបធៀបនៃបំណែក DNA ដើម្បីបង្កើនភាពជឿជាក់នៃការកំណត់ពីមូលហេតុនៃជំងឺដែលកំពុងសិក្សា និងមានប្រសិទ្ធភាពជាងការព្យាបាលរបស់វា។

ទន្ទឹមនឹងនេះ ឧបករណ៍នាំចូលដែលចាំបាច់សម្រាប់ការវិភាគអាស៊ីតអាមីណូ និងនុយក្លេអូទីត ជាក្បួនមានតម្លៃថ្លៃ និងមិនអាចចូលទៅដល់មន្ទីរពិសោធន៍គ្លីនិកភាគច្រើនបាន។ ស្ថានការណ៍កាន់តែធ្ងន់ធ្ងរទៅៗដោយការពិតដែលថាឧបករណ៍ជាច្រើនមានឯកទេសខ្ពស់សម្រាប់ប្រភេទជំងឺនីមួយៗ ជាលទ្ធផលមានវិធីសាស្រ្តវិនិច្ឆ័យរោគស្ទួនច្រើន ទាំងឧបករណ៍ និងវិធីសាស្រ្ត។

នេះបង្កើនការចំណាយលើការសិក្សាគ្លីនិកយ៉ាងខ្លាំង និងធ្វើឱ្យមានភាពស្មុគស្មាញដល់ការប្រៀបធៀប។ អ្នកនិពន្ធសូមថ្លែងអំណរគុណចំពោះប្រធានក្រុមនៃគីមីវិទ្យាប្រូតេអ៊ីនវិភាគនៅវិទ្យាស្ថានជីវសរីរាង្គគីមីវិទ្យានៃបណ្ឌិត្យសភាវិទ្យាសាស្ត្ររុស្ស៊ី អ្នកស្រាវជ្រាវជាន់ខ្ពស់ បេក្ខជនវិទ្យាសាស្ត្រគីមី។ I.V. Nazimov សម្រាប់ជំនួយឥតឈប់ឈរការយកចិត្តទុកដាក់និងការពិភាក្សាអំពីលទ្ធផល។

ការបកស្រាយលទ្ធផលវិភាគដែលទទួលបាន។ ដូច្នេះ ការអភិវឌ្ឍនៃវិធីសាស្រ្តថ្មីដែលពង្រីកលទ្ធភាពនៃការប្រើប្រាស់ឧបករណ៍វិភាគដែលអាចរកបានជាសាធារណៈនៃផលិតកម្មក្នុងស្រុកសម្រាប់ការកំណត់យ៉ាងរសើប រហ័ស និងអាចទុកចិត្តបាននៃអាស៊ីដអាមីណូដោយឥតគិតថ្លៃ និងកែប្រែ ភីបទីតខ្លី និងអូលីហ្គុនក្លូទីត ទាំងសម្រាប់ការវិភាគរចនាសម្ព័ន្ធនៃជីវប៉ូលីម័រ និងបំណែករបស់វា។ ហើយសម្រាប់គោលបំណងវិនិច្ឆ័យរោគគឺជាកិច្ចការវិទ្យាសាស្ត្របន្ទាន់។

គោលដៅនៃការងារ. គោលបំណងការងារធ្វើនិក្ខេបបទគឺជាការអភិវឌ្ឍនៃស្មុគស្មាញនៃវិធីសាស្ត្រមីក្រូដែលមានភាពរសើបខ្លាំងសម្រាប់ការវិភាគអាស៊ីដអាមីណូសេរី និងកែប្រែ peptides ខ្លី និង oligonucleotides ដោយប្រើមូលដ្ឋានឧបករណ៍ក្នុងស្រុក។

ភាពថ្មីថ្មោងបែបវិទ្យាសាស្ត្រ.

1. វិធីសាស្រ្តត្រូវបានបង្កើតឡើងសម្រាប់ការកំណត់នៃអាស៊ីត α-amino ដែលបានអ៊ិនកូដហ្សែនដែលមិនបានកែប្រែដោយប្រើ electrophoresis តំបន់ capillary និង micellar electrokinetic chromatography ជាមួយនឹងវិធីសាស្រ្តនៃការរកឃើញកាំរស្មី UV ដោយផ្ទាល់ និង refractometric ។

2. វិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការប្តេជ្ញាចិត្តរួមគ្នានៃ aminothiols ម៉ូលេគុលទាបនៅក្នុងប្លាស្មាឈាមដោយប្រើប្រាស់ reverse-phase-proformance high-performance liquid chromatography and capillary zone electrophoresis with fluorimetric and direct UV photometric method detection ត្រូវបានបង្កើតឡើង និងអនុវត្តក្នុងការអនុវត្តគ្លីនិក។

3. វិធីសាស្រ្តមួយត្រូវបានបង្កើតឡើងសម្រាប់កំណត់បំណែកនៃហ្សែន mutant សម្រាប់ការស្ទះសរសៃឈាមវ៉ែន ដោយផ្អែកលើការវិភាគនៃផលិតផលប្រតិកម្មខ្សែសង្វាក់ polymerase ជាក់លាក់ allele ដោយប្រើ capillary gel electrophoresis ជាមួយការរកឃើញ fluorimetric ។

សារៈសំខាន់ជាក់ស្តែង . វិធីសាស្រ្តដែលបានអភិវឌ្ឍនៃការវិភាគអាស៊ីតអាមីណូធ្វើឱ្យវាអាចកំណត់បរិមាណមីក្រូនៃអាស៊ីតអាមីណូដែលបានអ៊ិនកូដហ្សែនដោយមិនចាំបាច់មានដេរីវេដំបូងរបស់ពួកគេ ដែលជួយសម្រួលយ៉ាងខ្លាំងដល់គ្រោងការណ៍ការវិភាគដែលមានស្រាប់។ សំណុំនៃវិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការវិភាគសញ្ញាសម្គាល់ម៉ូលេគុលនៃគ្រោះថ្នាក់សរសៃឈាម (homocysteine, cysteine, glutathione) ក៏ដូចជាបំណែកនៃហ្សែន mutant សម្រាប់ជំងឺស្ទះសរសៃឈាមវ៉ែន ត្រូវបានបង្កើតឡើង និងស្នើឡើងសម្រាប់ការប្រើប្រាស់ជាក់ស្តែង។ ជាលទ្ធផលនៃការងារដែលបានអនុវត្តវាអាចធ្វើទៅបានដើម្បីបង្ហាញពីលទ្ធភាពនៃការប្រើប្រាស់ប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាពនៃឧបករណ៍ក្នុងស្រុកសម្រាប់ការវិភាគជីវគីមីនៃសមាសធាតុប្រូតេអ៊ីននិង nucleic ទាំងពីរនៅលើឧបករណ៍ដូចគ្នាសម្រាប់ capillary electrophoresis ។ ការកំណត់អាស៊ីតអាមីណូដែលមានផ្ទុកស្ពាន់ធ័រ និង peptides នៅក្នុងប្លាស្មាឈាមដោយប្រើវិធីសាស្ត្រដែលត្រូវបានបង្កើតឡើងក្នុងការងារនេះ ត្រូវបានប្រើដើម្បីវាយតម្លៃកត្តាហានិភ័យនៃអ្នកជំងឺរាប់សិបនាក់ដែលមានជំងឺគាំងបេះដូង និងលក្ខខណ្ឌមុនកើតជំងឺដែលអាចទុកចិត្តបាន។ លទ្ធផលនៃការងារដែលបានអនុវត្តត្រូវបានប្រើប្រាស់ក្នុងការបង្កើត និងការធ្វើតេស្តក្នុងការអនុវត្តការវិភាគជីវវេជ្ជសាស្ត្រនៃស្មុគស្មាញស្វ័យប្រវត្តិកម្មសេដ្ឋកិច្ចសកល នៃឧបករណ៍ និងវិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការវិនិច្ឆ័យម៉ូលេគុលនៃជំងឺសំខាន់ៗក្នុងសង្គមមួយចំនួន (គាំងបេះដូង ដាច់សរសៃឈាមខួរក្បាល ដុំឈាមកក) ដែលត្រូវបានបង្កើតឡើងនៅ វិទ្យាស្ថានឧបករណ៍វិភាគនៃបណ្ឌិត្យសភាវិទ្យាសាស្ត្ររុស្ស៊ី។

បានដាក់ស្នើសម្រាប់ការការពារ:

វិធីសាស្រ្តសម្រាប់កំណត់អាស៊ីតអាមីណូដែលបានអ៊ិនកូដហ្សែននៅក្នុងដំណោះស្រាយ aqueous ដោយគ្មាន derivatization បឋមរបស់ពួកគេដោយប្រើ electrophoresis តំបន់ capillary និង micellar electrokinetic chromatography;

លក្ខខណ្ឌល្អប្រសើរបំផុតសម្រាប់ការចម្លងនៃ aminothiols ប្លាស្មាទម្ងន់ម៉ូលេគុលទាបដោយប្រើ reagents fluorogenic (monobromobimane និង 5-iodoacetamidofluorescein);

វិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការវិភាគទម្ងន់ម៉ូលេគុលទាបនៃ aminothiols នៅក្នុងប្លាស្មាឈាមដោយប្រើ RP HPLC និង capillary electrophoresis;

លទ្ធផលនៃការកំណត់នៃមាតិកា homocysteine ​​​​នៅក្នុងប្លាស្មាឈាមដោយ RP HPLC និងវិធីសាស្រ្ត electrophoresis តំបន់ capillary;

វិធីសាស្រ្តសម្រាប់កំណត់ហ្សែន mutant សម្រាប់ការស្ទះសរសៃឈាមវ៉ែនដោយប្រើ capillary gel electrophoresis នៅក្នុងលីនេអ៊ែរ poly-N, N'dimethylacrylamide ។

ការអនុម័តការងារ. លទ្ធផលចម្បងស្នាដៃត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុងសន្និសិទរុស្ស៊ីទាំងអស់លើកទី 8 ស្តីពីម៉ូលេគុលរាវក្រូម៉ាតូរីសនិងអេឡិចត្រុងកាពីឡារី (ថ្ងៃទី 15-19 ខែតុលាឆ្នាំ 2001 នៅទីក្រុងមូស្គូប្រទេសរុស្ស៊ី) សន្និសីទអន្តរជាតិលើកទី 3 ស្តីពីវិធីសាស្ត្របំបែកនៅក្នុងជីវវិទ្យា (ថ្ងៃទី 13-18 ខែឧសភាឆ្នាំ 2001 នៅទីក្រុងមូស្គូប្រទេសរុស្ស៊ីឆ្នាំ 2001) , ), សន្និសិទអន្តរជាតិនៃនិស្សិតថ្នាក់បរិញ្ញាបត្រ និងក្រោយឧត្តមសិក្សាក្នុងវិទ្យាសាស្ត្រមូលដ្ឋាន "Lomonosov-2005" (ផ្នែកគីមីវិទ្យា។ ថ្ងៃទី 12-15 ខែមេសា ឆ្នាំ 2005 ទីក្រុងម៉ូស្គូ ប្រទេសរុស្ស៊ី) សន្និសីទវិទ្យាសាស្ត្រ និងការអនុវត្តលើកទី 2 "បញ្ហាបច្ចុប្បន្ននៃបច្ចេកវិទ្យាជីវសាស្ត្រវេជ្ជសាស្ត្រ" (ថ្ងៃទី 12 ខែកញ្ញា។ -14 2005, Anapa, Russia), សមាជលើកទី 3 នៃសង្គមជីវបច្ចេកវិទ្យានៃប្រទេសរុស្ស៊ីបានដាក់ឈ្មោះតាម។ Yu.A. Ovchinnikov (ថ្ងៃទី 25-27 ខែតុលា ឆ្នាំ 2005 ទីក្រុងម៉ូស្គូ ប្រទេសរុស្ស៊ី) សន្និសីទលើកទី 1 របស់អ្នកវិទ្យាសាស្ត្រវ័យក្មេងនៅ MITHT ។ M.V. Lomonosov (ថ្ងៃទី 13-14 ខែតុលា ឆ្នាំ 2005 ទីក្រុងម៉ូស្គូ ប្រទេសរុស្ស៊ី) សមាជអន្តរជាតិស្តីពីវិទ្យាសាស្ត្រវិភាគ ICAS-2006 (ថ្ងៃទី 25-30 ខែមិថុនា ឆ្នាំ 2006 ទីក្រុងម៉ូស្គូ ប្រទេសរុស្ស៊ី) សមាជអន្តរជាតិលើកទី 31 នៃសហព័ន្ធនៃសង្គមគីមីជីវៈអឺរ៉ុប (24-29 ខែមិថុនា) , Istanbul, Turkey), សន្និសីទអន្តរជាតិលើកទី 26 ស្តីពីការបំបែកប្រូតេអ៊ីន, Peptides និង Polynucleotides (16-20 តុលា 2006, Innsbruck, Austria)។

ការបោះពុម្ពផ្សាយ. ដោយផ្អែកលើឯកសារនិក្ខេបបទ ស្នាដៃចំនួន ១២ ត្រូវបានបោះពុម្ពជាទម្រង់អត្ថបទ និងអរូបី។

រចនាសម្ព័ន្ធវិញ្ញាសា. និក្ខេបបទរួមមាន សេចក្តីផ្តើម ការពិនិត្យអក្សរសិល្ប៍ ផ្នែកពិសោធន៍ ការពិភាក្សាអំពីលទ្ធផល ការសន្និដ្ឋាន និងបញ្ជីអក្សរសិល្ប៍ដែលបានដកស្រង់។

ឯកសារនិក្ខេបបទត្រូវបានបង្ហាញនៅលើទំព័រ 147 មាន 19 តារាងនិង 42 តួលេខ។ បញ្ជីនៃប្រភពអក្សរសាស្ត្រមាន 187 ចំណងជើង។

នៅក្នុងការណែនាំហេតុផលសម្រាប់ប្រធានបទត្រូវបានផ្តល់ឱ្យ គោលដៅនៃការស្រាវជ្រាវ និងបទប្បញ្ញត្តិដែលបានដាក់ជូនសម្រាប់ការការពារត្រូវបានបង្កើតឡើង ភាពថ្មីថ្មោងផ្នែកវិទ្យាសាស្ត្រ និងសារៈសំខាន់ជាក់ស្តែងរបស់វាត្រូវបានកត់សម្គាល់។ ទិន្នន័យត្រូវបានផ្តល់ជូននៅលើការធ្វើតេស្ត និងការបោះពុម្ពផ្សាយលទ្ធផលស្រាវជ្រាវ ក៏ដូចជាលើរចនាសម្ព័ន្ធ និងវិសាលភាពនៃនិក្ខេបបទ។

ជំពូកទី 1 ។ ព័ត៌មានទូទៅអំពីវិធីសាស្រ្តដែលមានស្រាប់សម្រាប់ការវិភាគសមាសធាតុដែលកំពុងសិក្សាត្រូវបានផ្តល់ជូន។ វិធីសាស្រ្ត Chromatographic និងវិធីសាស្រ្តកំណត់អត្តសញ្ញាណដែលទទួលយកជាទូទៅមួយចំនួនត្រូវបានពិពណ៌នាលម្អិតបន្ថែមទៀត។ វិធីសាស្រ្តសម្រាប់កំណត់ទម្ងន់ម៉ូលេគុលទាបនៃ aminothiols នៅក្នុងប្លាស្មាឈាម ក៏ដូចជាបំណែក DNA ត្រូវបានពិចារណា។ ការប្រៀបធៀបនៃវិធីសាស្រ្តដែលមានស្រាប់សម្រាប់ការវិភាគអាស៊ីតអាមីណូ peptides ខ្លី និង oligonucleotides ត្រូវបានអនុវត្ត ហើយភាពពាក់ព័ន្ធនៃការស្រាវជ្រាវបន្ថែមនៅក្នុងតំបន់នេះត្រូវបានបញ្ជាក់។

ជំពូក 2។ ទិន្នន័យត្រូវបានផ្តល់ជូនលើសម្ភារៈ សារធាតុប្រតិកម្ម វិធីសាស្រ្តនៃការរៀបចំដំណោះស្រាយដែលបានប្រើ និងការអនុវត្តការងារ។

ជំពូកទី 3 ។ លទ្ធផល​និង​ការ​ពី​ភា​ក្សា។

ខ្លឹមសារនៃអាស៊ីតអាមីណូឥតគិតថ្លៃ (AA) នៅក្នុងសារធាតុរាវសរីរវិទ្យាគឺជាប៉ារ៉ាម៉ែត្រវិនិច្ឆ័យសម្រាប់ជំងឺមួយចំនួន។ ការស្រាវជ្រាវដែលបានអនុវត្តគឺសំដៅបង្កើតបច្ចេកទេសដែលអនុញ្ញាតឱ្យពួកគេបំបែក និងកំណត់អត្តសញ្ញាណពួកវាបានយ៉ាងឆាប់រហ័ស និងគួរឱ្យទុកចិត្ត។ ការវិភាគនៃល្បាយនៃ AA បែបនេះត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើ capillary zone electrophoresis (CZE) និង micellar electrokinetic chromatography ។ សន្ទស្សន៍ចំណាំងបែរនៃ AA ដោយវិធីសាស្ត្រ CZE ដោយប្រើល្បាយនៃ AA ដោយវិធីសាស្ត្រ CZE ជាមួយនឹងប្រវែងរកឃើញ refractometric ប្រវែង 90 សង់ទីម៉ែត្រ ប្រវែងមានប្រសិទ្ធភាព 75 សង់ទីម៉ែត្រ។ .

ក) សតិបណ្ដោះអាសន្ន៖ 60 mM sodium borate, pH 11.0 ។ វ៉ុល: 20 kV ។ ចរន្ត៖ 93 µA ។ សីតុណ្ហភាព: 21.0 °C នៃសមាសភាពល្អបំផុតនៃគំរូអគ្គិសនីផ្ទៃខាងក្រោយ ពេលវេលាចាក់: 7.0 s (electrokinetic, វ៉ុលកំឡុងពេលចាក់គំរូ - 5 kV) ។ ណែនាំ troll ។ ចំពោះគោលបំណងនេះបរិមាណ AA ត្រូវបានសាកល្បង - 0,1 ng; អាឡានីន, tyrosine - 0,2 ng ។

4 - ប្រូលីន; 5 - អាឡានីន; 6 - ទីរ៉ូស៊ីន; 7 - សេរិន; - អាស៊ីត aspartic; ៩- មេតូនីន។

ប្រព័ន្ធសតិបណ្ដោះអាសន្ន CAPS ក៏ដូចជាការផ្សំផ្សេងៗរបស់ពួកគេដោយប្រើឧទាហរណ៍នៃល្បាយគំរូនៃ 8 AA ជាមួយនឹងរ៉ាឌីកាល់នៃធម្មជាតិ និងលក្ខណៈសម្បត្តិផ្សេងៗគ្នា និងតម្លៃ pKa ផ្សេងគ្នាបំផុតនៃក្រុមអាមីណូ។ ឧទាហរណ៏នៃការបំបែកនៃល្បាយបែបនេះដោយប្រើអេឡិចត្រូលីតគាំទ្រ borate ត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុងរូបភាពទី 1 ។

អេឡិចត្រូលីតផ្ទៃខាងក្រោយល្អបំផុតសម្រាប់ការបំបែក AA ដោយឥតគិតថ្លៃដោយវិធីសាស្រ្តនេះគឺជាដំណោះស្រាយដែលមានផ្ទុក 60 mM borate buffer (pH 11.0) ។

ដោយប្រើវា ឥទ្ធិពលនៃកត្តាផ្សេងៗ (វ៉ុល ចរន្ត អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង និងប្រវែងដ៏មានប្រសិទ្ធិភាពនៃ capillary វិធីសាស្រ្តនៃការណែនាំគំរូ) លើប្រសិទ្ធភាពនៃការបំបែកត្រូវបានសិក្សា ហើយវាត្រូវបានបង្ហាញថានៅក្រោមលក្ខខណ្ឌពិសោធន៍វាមិនអាចបំបែកល្បាយទាំងស្រុងបានទេ។ នៃ AAs ដែលបានអ៊ិនកូដទាំងអស់។ វាធ្វើតាមការពិសោធន៍ដែល ACs ដែលភាពខុសគ្នានៃពេលវេលាធ្វើចំណាកស្រុកលើសពី 1 នាទីត្រូវបានបំបែកដោយទទួលយកបាន។ សម្រាប់ហេតុផលនេះ វិធីសាស្ត្រ CZE បុរាណមិនអាចបំបែក និងកំណត់អត្តសញ្ញាណវត្តមានរួមគ្នានៃ glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, histidine, phenylalanine និង tyrosine ក៏ដូចជា aspartic, glutamic acids និង cysteine ​​ផងដែរ។ មេគុណជ្រើសរើសសម្រាប់ពួកវាគឺទាបណាស់ ហើយនៅជិត 1. Arginine, lysine, proline, serine, aspartic acid និង methionine ងាយបំបែក និងកំណត់អត្តសញ្ញាណបានយ៉ាងងាយស្រួល ពោលគឺឧ។ AKs មានពេលធ្វើចំណាកស្រុក 5.5-10.0, 15 និង 19.5-20.8 នាទី។ មេគុណជ្រើសរើសសម្រាប់ក្រុម AKs នេះគឺស្ថិតនៅក្នុងចន្លោះ 1.1 - 1.3 ។ នៅពេលប្រើ phosphate supporting electrolyte (pH 11.4) គំរូបំបែករួមស្រដៀងគ្នាត្រូវបានគេសង្កេតឃើញ ប៉ុន្តែជាមួយនឹងគុណភាពបង្ហាញទាបជាង។ ការសិក្សាដែលបានអនុវត្តបង្ហាញថា CZE បុរាណជាមួយនឹងការបញ្ចប់ refractometric អនុញ្ញាតឱ្យនៅក្នុងករណីដ៏ល្អបំផុតការបំបែកពេញលេញនិងការកំណត់អត្តសញ្ញាណមិនលើសពី 8 AA នៅក្នុងដំណោះស្រាយ aqueous ។ ក្នុងករណីនេះខ្លឹមសារនៃ AA បុគ្គលពីវត្ថុដែលមិនអាចបំបែកបានដែលបានចង្អុលបង្ហាញនៅក្នុងល្បាយបែបនេះមិនគួរលើសពីពីរទេ។

ប្រសិទ្ធភាពនៃការបំបែក AA ត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់ដោយការបន្ថែមមេតាណុលទៅអេឡិចត្រូលីតផ្ទៃខាងក្រោយជាមួយនឹង pH 7 ។ នៅពេលប្រើ 150 mM phosphate buffer (pH 2.0) ជាមួយនឹងការបន្ថែម 30% vol ។ មេតាណុល វាអាចបំបែកបាន 16 ក្នុងចំណោម 20 AAs ដែលបានអ៊ិនកូដហ្សែន (រូបភាពទី 2) ។ ជាអកុសល វាត្រូវការពេលវេលាច្រើនដើម្បីបំបែកល្បាយនេះទាំងស្រុង។

Capillary: អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 75 μm, ប្រវែងសរុប - 65 សង់ទីម៉ែត្រ, ប្រវែងមានប្រសិទ្ធិភាព - 50 សង់ទីម៉ែត្រ។

សីតុណ្ហភាព: 28.0 oC ។ ពេលវេលាចាក់គំរូ: 1.5 s (បូមធូលី) ។

ការកំណត់អត្តសញ្ញាណ៖ 1 - លីស៊ីន, 2 - arginine, 3 - histidine, 4 - glycine, 5 - alanine, 6 - valine, 7 - isoleucine, 8 - leucine, 9 - serine, 10 - threonine, 11 - methionine, lanine, 12, phenylaine 13 - អាស៊ីត glutamic, 14 - proline, 15 - អាស៊ីត aspartic, 16 - tyrosine ។

ដោយសារ CZE បុរាណដែលបានអនុវត្តនៅ pH 7 មិនបានផ្តល់នូវគុណភាពដែលត្រូវការនៃការបំបែក វាត្រូវបានគេសម្រេចចិត្តអនុវត្តវិធីសាស្ត្រ MEKC ជាមួយនឹងការរកឃើញកាំរស្មី UV ដោយផ្ទាល់ទៅនឹងការវិភាគនៃ AAs ដោយឥតគិតថ្លៃ។ សូដ្យូម dodecyl sulfate (SDS) ត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងដំណោះស្រាយសតិបណ្ដោះអាសន្នជាសារធាតុសាប៊ូ។ ក្នុងអំឡុងពេលការងារការប្រមូលផ្តុំផ្សេងៗនៃសមាសធាតុនៃអេឡិចត្រូលីតផ្ទៃខាងក្រោយត្រូវបានប្រើ។ លទ្ធផលល្អបំផុតត្រូវបានទទួលដោយប្រើអេឡិចត្រូលីតផ្ទៃខាងក្រោយដែលមានអាស៊ីត boric 133 mM, 33 mM sodium borate និង 100 mM SDS, pH 9.5 ។ ការប្រើប្រាស់អេឡិចត្រូលីតនៃសមាសធាតុដែលបានបញ្ជាក់បានបង្កើនចំនួននៃ AA ដែលត្រូវបានវិភាគយ៉ាងខ្លាំងខណៈពេលដែលកំណត់ពួកវាក្នុងពេលដំណាលគ្នានៅតម្លៃ pH នៃអេឡិចត្រូលីតផ្ទៃខាងក្រោយដែលស្ថិតនៅក្នុងតំបន់មេ។ នៅក្នុងរូបភព។ រូបភាពទី 3 បង្ហាញពី electropherogram នៃល្បាយនៃ 14 AA ។

អង្ករ។ 3. ការបំបែកល្បាយនៃ AAs ឥតគិតថ្លៃចំនួន 14 ដោយ micellar electrokinetic chromatography ជាមួយការរកឃើញកាំរស្មី UV ដោយផ្ទាល់ Capillary: អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 50 μm, ប្រវែងសរុប 122 សង់ទីម៉ែត្រ, ប្រវែងមានប្រសិទ្ធិភាព 35 សង់ទីម៉ែត្រ។ ទ្រនាប់៖

អាស៊ីត boric 133 mM, 33 mM sodium tetraborate (pH 9.5) 100 mM sodium dodecyl sulfate ។ វ៉ុល: 20 kV ។ បច្ចុប្បន្ន: 48 µA ។ សីតុណ្ហភាព៖ ២៧.៥ អង្សាសេ។ ពេលវេលាចាក់គំរូ: 3.0 s (បូមធូលី) ។

បរិមាណគ្រប់គ្រង AA គឺ 5.0 ng ។ Alanine, valine, isoleucine និង glycine - 7.0 ng ។

ការកំណត់អត្តសញ្ញាណ៖ ១-វ៉ាលីន, ២-អាឡានីន, ៣-អ៊ីសូលស៊ីន, ៤-គ្លីស៊ីន, ៥-សេរិន, ៦-ថូរិនីន, ៧-ទីរ៉ូស៊ីន, ៨-អ៊ីស្ទីឌីន, ៩-ផេនីឡាឡានីន, ១០-អាហ្គីនីន, ១១-លីស៊ីន, ១២-ស៊ីស្ទីន។ ១៣- មេទីយ៉ូនីន ១៤-អាស៊ីត glutamic ។ * - ប្រព័ន្ធកំពូល។

តម្លៃដែលទទួលបាននៃពេលវេលាធ្វើចំណាកស្រុកគឺគួរឱ្យកត់សម្គាល់។

ទោះបីជាប្រវែង capillary មានប្រសិទ្ធភាពតូចជាងក៏ដោយ, តាមក្បួនមួយ, ពួកវាគឺខ្ពស់ជាងនៅក្នុងករណីនៃ CZE បុរាណ, ដែលនៅក្នុងកិច្ចព្រមព្រៀងដ៏ល្អជាមួយធម្មជាតិនៃ MEKC នេះ។ នេះក៏អាចទាក់ទងទៅនឹងទំហំនៃវ៉ុលដែលបានអនុវត្តក្នុងមួយឯកតាប្រវែងនៃ capillary ។ ភាពខុសគ្នានៃពេលវេលានៃការធ្វើចំណាកស្រុកដែលត្រូវការសម្រាប់ការបំបែក AC គឺតិចជាងនៅក្នុងករណីនៃ CZE ។ វាគ្រប់គ្រាន់សម្រាប់វា 0.5 នាទី។

ការសិក្សាលម្អិតបន្ថែមទៀតត្រូវបានអនុវត្តលើលក្ខខណ្ឌសម្រាប់ការបំបែក AAs ដែលបានអ៊ិនកូដហ្សែនចំនួន 14 ដែលជាធម្មតាមានវត្តមាននៅក្នុងប្លាស្មាឈាមរបស់អ្នកបរិច្ចាគដែលមានសុខភាពល្អក្នុងស្ថានភាពឥតគិតថ្លៃ។ ឥទ្ធិពលនៃ pH និងការបន្ថែមសារធាតុរំលាយសរីរាង្គផ្សេងៗទៅនឹងអេឡិចត្រូលីតផ្ទៃខាងក្រោយលើកម្រិតនៃដំណោះស្រាយខ្ពស់បំផុតត្រូវបានសិក្សា។ ពីការពិសោធន៍វាធ្វើតាមថាដើម្បីសម្រេចបាននូវការបំបែកពេញលេញនៃល្បាយនៃ 14 AA តម្លៃ pH ត្រូវតែស្ថិតនៅក្នុងចន្លោះ 9.0-10.0 ។ នៅតម្លៃ pH នៅខាងក្រៅជួរដែលបានបញ្ជាក់ដំណោះស្រាយចាំបាច់នៃ AK មិនត្រូវបានផ្តល់ឱ្យទេ។ ជាក់ស្តែងនៅ pH 9 នេះគឺដោយសារតែភាពខុសគ្នារវាងតម្លៃ pKa (AA) ហើយនៅ pH 10 វាគឺដោយសារតែការ decomposition ផ្នែកនៃ DDSNAC conjugates ។ ឥទ្ធិពលនៃការបន្ថែមសារធាតុរំលាយសរីរាង្គត្រូវបានសិក្សាដោយប្រើមេតាណុល 2-propanol និង acetonitrile ។ ទិន្នន័យដែលទទួលបានបង្ហាញថាការបន្ថែមសារធាតុរំលាយសរីរាង្គណាមួយនាំឱ្យមានការផ្លាស់ប្តូរដ៏សំខាន់នៅក្នុងពេលវេលានៃការធ្វើចំណាកស្រុក និងមេគុណជ្រើសរើស។ ធម្មជាតិនៃការផ្លាស់ប្តូរត្រូវបានកំណត់ដោយធម្មជាតិនិងការប្រមូលផ្តុំនៃសារធាតុបន្ថែម។ មេតាណុល និងអាសេតូនីទ្រីល មិនធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវការបំបែកនៃ AA ដែលបានសិក្សានោះទេ ដែលជាក់ស្តែងដោយសារតែសមត្ថភាពទាបរបស់ពួកគេក្នុងការបង្កើត AA-SDS-R conjugates ចម្រុះ ដែល R គឺជាម៉ូលេគុលសារធាតុរំលាយសរីរាង្គ។ ការបន្ថែម 3-5% 2-propanol ធ្វើអោយប្រសើរឡើងយ៉ាងខ្លាំងនូវកម្រិតនៃការដោះស្រាយនៃសមាសធាតុជាមួយនឹងការកើនឡើងតិចតួចនៃពេលវេលានៃការធ្វើចំណាកស្រុករបស់ AA ។ ជាមួយនឹងការកើនឡើងនៃកំហាប់នៃ 2-propanol ការកើនឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃពេលវេលាធ្វើចំណាកស្រុករបស់ AA ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញដែលនាំឱ្យមានការថយចុះនៃភាពឆាប់រហ័សនៃការកំណត់។ ការសិក្សាដែលបានធ្វើឡើងជាពិសេសបានបង្ហាញថាការបំបែកល្អបំផុតនៃ AA នៅក្នុងវត្តមាននៃបរិមាណដ៏មានប្រសិទ្ធិភាពនៃសារធាតុរំលាយសរីរាង្គ (2-propanol) កើតឡើងប្រសិនបើអេឡិចត្រូលីតផ្ទៃខាងក្រោយមានអាស៊ីត boric 50 mM, 33 mM sodium borate និង 50 mM SDS ។ នៅក្នុងរូបភព។ រូបភាពទី 4 បង្ហាញពី electropherogram នៃល្បាយនៃ 14 AA ។

ទិន្នន័យដែលបានបង្ហាញបង្ហាញពីការបំបែកយ៉ាងមានប្រសិទ្ធភាពនៃ 13 ក្នុងចំណោម 14 AAs ដែលបានអ៊ិនកូដហ្សែន។ ពេលវេលាបំបែកសរុបមិនលើសពីអប្បបរមាទេ។ ពេលវេលាធ្វើចំណាកស្រុក Sr គឺ 0.03 ។ តម្លៃ Sr ធំជាងបន្តិច ជិត 0.06-0.08 ត្រូវបានសង្កេតឃើញសម្រាប់ alanine, valine និង histidine ។

អង្ករ។ 4. ការបំបែកល្បាយនៃ 14 AA ដោយ MEKC ជាមួយនឹងការរកឃើញកាំរស្មី UV ដោយផ្ទាល់ Capillary: អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 75 μm, ប្រវែងសរុប 61 សង់ទីម៉ែត្រ, ប្រវែងមានប្រសិទ្ធិភាព 41 សង់ទីម៉ែត្រ។

សតិបណ្ដោះអាសន្ន៖ 33 mM សូដ្យូម tetraborate, អាស៊ីត boric 100 mM, 50 mM SDS, 5% 2-propanol, pH = 10.2 ។ វ៉ុល: 25 kV ។ ចរន្ត: 65 µA ។ សីតុណ្ហភាព៖ ២៩.៥ អង្សាសេ។ ពេលវេលាចាក់គំរូ: 1.5 s (បូមធូលី) ។ បរិមាណគ្រប់គ្រង AA គឺ 0.5 ng ។

ការកំណត់អត្តសញ្ញាណ: 1 - Lysine; 2 - ប្រូលីន; 3 - ភីនីឡាឡានីន; 4 - អាឡានីន; 5 - វ៉ាលីន; 6 - គ្លីសេរីន;

7 - អ៊ីស្ទីឌីន; 8 - Tyrosine; 9 - Leucine + Isoleucine; 10 - សេរិន; 11 - Threonine; 12 - អាស៊ីត glutamic; 13 - ស៊ីស្ទីន។

កម្រិតសម្រេចបាននៃដំណោះស្រាយធ្វើឱ្យវាអាចធ្វើការសិក្សាលើការកំណត់បរិមាណនៃ AAs ដែលត្រូវបានពិចារណា។ ការវិភាគនៃល្បាយគំរូនៃ 14 AA នៃសមាសភាពដែលគេស្គាល់ត្រូវបានអនុវត្ត។ ការសិក្សាបានបង្ហាញថាវិធីសាស្ត្រ MEKC ជាមួយនឹងការរកឃើញកាំរស្មីយូវីដោយផ្ទាល់ដោយប្រើដំណោះស្រាយសតិបណ្ដោះអាសន្ន borate ដែលមានផ្ទុក 3-5% 2-propanol ធ្វើឱ្យវាអាចកំណត់បរិមាណ AAs ដែលបានអ៊ិនកូដហ្សែន 14-16 ជាមួយនឹងកំហុស (Sr) នៃ 6-8% ក្នុងរយៈពេលតិចជាង 30 នាទី ភាពត្រឹមត្រូវនៃលទ្ធផលដែលទទួលបានត្រូវបានអនុវត្តបន្ថែមដោយប្រើវិធីសាស្ត្រ "បញ្ចូល - រកឃើញ" (តារាងទី 1) ។ ការផ្ទៀងផ្ទាត់ភាពត្រឹមត្រូវនៃការកំណត់មាតិកានៃ AAs ដែលបានអ៊ិនកូដហ្សែនដោយប្រើវិធីសាស្ត្រ MEKC (mo(AA) = 0.50 ng; បានបញ្ចូល - 1.00 ng) ការវិភាគនៃ homocysteine ​​​​និង aminothiols ទម្ងន់ម៉ូលេគុលទាបផ្សេងទៀតនៅក្នុងឈាមប្លាស្មា Homocysteine ​​​​(Hcy) និង aminothiols អមជាមួយរបស់វា (AT) (អាស៊ីតអាមីណូដែលបានអ៊ិនកូដ - cysteine ​​​​(Cys), tripeptide glutathione (GSH)) នៅក្នុង ប្លាស្មាឈាមគឺជាសញ្ញាសម្គាល់ម៉ូលេគុលនៃភាពមិនដំណើរការនៃប្រព័ន្ធសរសៃឈាមបេះដូង។ គោលដៅចម្បងនៃការសិក្សានេះគឺដើម្បីបង្កើតវិធីសាស្រ្តសម្រាប់កំណត់មាតិកា homocysteine ​​​​ជាកត្តាហានិភ័យដែលអាចទុកចិត្តបានសម្រាប់ជំងឺបែបនេះ។

ការវិភាគបរិមាណនៃ aminothiols ទម្ងន់ម៉ូលេគុលទាបក្នុងប្លាស្មាឈាមរួមមាន ការកាត់បន្ថយចំណង disulfide ការបន្សាបជាតិប្រូតេអ៊ីននៃប្លាស្មាឈាម ការកែប្រែ aminothiols ជាមួយនឹង reagents សមស្រប ការបំបែក និងការកំណត់អត្តសញ្ញាណនៃ aminothiols ដែលបានកែប្រែដោយ RP HPLC ឬ CE ជាមួយនឹងវិធីសាស្រ្តរាវរកមួយ ឬមួយផ្សេងទៀត។ នៅក្នុងការងារនេះ aminothiols កត់សុីនិងប្រូតេអ៊ីនត្រូវបានកាត់បន្ថយជាមួយនឹង triphenylphosphine ។ ដើម្បីលុបជាតិដែកធ្ងន់ សារធាតុបន្ថែម EDTA ត្រូវបានប្រើ។ បច្ចេកទេសកាត់បន្ថយដែលបានស្នើឡើងបានផ្តល់នូវយ៉ាងឆាប់រហ័ស (15 នាទី) និងការកាត់បន្ថយពេញលេញ (96%) នៃ disulfides និងការបញ្ចេញក្រុម sulfhydryl នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។ ទិន្នផលនៃប្រតិកម្មកាត់បន្ថយត្រូវបានកំណត់ដោយប្រើនីតិវិធីស្តង់ដារសម្រាប់វាស់មាតិកានៃ AT ឥតគិតថ្លៃ។ ប្រូតេអ៊ីនប្លាស្មាដែលមានទម្ងន់ម៉ូលេគុលខ្ពស់ត្រូវបានប្រោះដោយអាស៊ីត 5-sulfosalicylic ។

ការផ្តោតអារម្មណ៍របស់វាត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរក្នុងអំឡុងពេលនៃការសិក្សា ដែលជៀសវាងការបាត់បង់ភាពប្រែប្រួលដោយសារតែការពនរក្នុងដំណាក់កាលអព្យាក្រឹតភាព។

ការកែប្រែ sulfhydryls ដោយឥតគិតថ្លៃត្រូវបានអនុវត្តជាមួយ monobromobimane (mBrB) ឬ 5-iodoacetamido-fluorescein (5-IAF) ។ តម្លៃ pH ដែលត្រូវការត្រូវបានរក្សាដោយប្រើ diethanolamine (pK a = 8.9) និងសូដ្យូម orthophosphate អាស្រ័យលើ reagent ដែលប្រើសម្រាប់ការកែប្រែ AT ។ ការប្រើប្រាស់ថ្នាំ diethanolamine ធ្វើឱ្យវាអាចគ្រប់គ្រងដោយផ្ទាល់នូវការបង្កើតផលិតផលគោលដៅដោយម៉ាស់។ ដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណនិស្សន្ទវត្ថុរបស់ AT វិធីសាស្ត្ររកឃើញ photometric និង fluorimetric ត្រូវបានប្រើប្រាស់។ និស្សន្ទវត្ថុ​ត្រូវ​បាន​កំណត់​លក្ខណៈ​ដោយ​ការ​ស្រូប​យក fluorimetric និង​ម៉ាស់ (MALDI-TOF, ESI) spectroscopy ។ ការរកឃើញ photometric និង fluorimetric ត្រូវបានអនុវត្តនៅចម្ងាយរលកដែលបានជ្រើសរើសយោងទៅតាមវិសាលគមស្រូប (Hcy-MB - 234 nm) និង fluorescence spectra នៃ Hcy derivatives (390 nm (រំភើប) និង 478 nm (fluorescence)) ។ ពីវិសាលគម fluorescence នៃ Hcy-AF conjugate វាដូចខាងក្រោមថាក្នុងអំឡុងពេលរកឃើញ fluorimetric ប្រវែងរលកល្អបំផុតសម្រាប់ការរំភើបគឺ 462 nm និងសម្រាប់ fluorescence 504 nm ។

ដើម្បីបង្រួបបង្រួមវិធីសាស្រ្តក្នុងការកំណត់ និងផ្ទៀងផ្ទាត់លទ្ធភាពជាមូលដ្ឋាននៃការប្រើប្រាស់ឧបករណ៍រាវរកដូចគ្នាដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណទាំងនិស្សន្ទវត្ថុ monobimane និង fluorescein ប្រសិទ្ធភាពនៃការរំភើបចិត្តនៅរលកចម្ងាយ 390 nm ត្រូវបានសិក្សា។ អាំងតង់ស៊ីតេនៃលទ្ធផល fluorescence អតិបរមា ហើយជាលទ្ធផល ភាពរសើបនៃការរកឃើញគឺជាលំដាប់នៃរ៉ិចទ័រទាបជាងពេលប្រើវិទ្យុសកម្មនៅរលកចម្ងាយ 462 nm សម្រាប់ការរំភើប។

និស្សន្ទវត្ថុ monobromobimane (MB) និង acetamidofluorescein (AF) AT ក៏ដូចជាល្បាយគំរូរបស់ពួកគេត្រូវបានវិភាគ។ និស្សន្ទវត្ថុ monobromobimane បុគ្គល Cys, Hcy និង GSH ត្រូវបានដកចេញជាមួយនឹងពេលវេលារក្សាទុក (អប្បបរមា) នៃ 6.01 ±0.19, 10.76 ±0.17 និង 11.89 ±0.11 រៀងគ្នា (រូបភាព 5)1 ។

ពេលវេលារក្សាដូចគ្នាត្រូវបានរក្សានៅពេលប្រើល្បាយនៃ aminothiols នៃសមាសភាពដែលគេស្គាល់។ ទិន្នន័យពិសោធន៍ដែលទទួលបានធ្វើឱ្យវាអាចគណនាទិន្នផលនៃប្រតិកម្មកែប្រែ។ វាមិនតិចជាង 97% ដែលជាការព្រមព្រៀងល្អជាមួយទិន្នន័យដែលគេស្គាល់ ប៉ុន្តែទទួលបានក្រោមលក្ខខណ្ឌនៃការរៀបចំគំរូដ៏តឹងរ៉ឹងជាងនេះ។ ដេរីវេនៃលទ្ធផលត្រូវបានញែកចេញពីល្បាយ និងកំណត់លក្ខណៈដោយម៉ាស់។

និស្សន្ទវត្ថុ fluorescein Cys, Hcy និង GSH ត្រូវ​បាន​គេ​ដក​ចេញ​ដោយ​មាន​រយៈពេល​រក្សា​ទុក (នាទី) នៃ 8.49 ± 0.12; 10.46 ±0.15 និង 12.96 ±0.14 រៀងគ្នា (រូបភាព 6) ។

ការវិភាគក្រូម៉ូសូមត្រូវបានអនុវត្តលើក្រូម៉ាតូក្រាមរាវដែលមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់ក្នុងស្រុក "MiliChrom A-02" (EkoNova, Novosibirsk) រូបភព។ 5. RP HPLC នៃល្បាយគំរូនៃ aminothiols កែប្រែជាមួយ monobromobimane ។ Cys-MB-50.0 µM, Hcy-MB-25.0 µM, GS-MB-25.0 µM ។

ការរកឃើញ Fluorimetric (exc = 390 nm, exp = 478 nm) រូប។ 6. RP HPLC នៃល្បាយគំរូនៃ aminothiols ដែលបានកែប្រែជាមួយនឹង 5-iodoacetamidofluorescein ។ Cys-AF-100.0 µM, Hcy-AF-150.0 µM, GS-AFµM ។ ការរកឃើញ Fluorimetric (abs = 390 nm, esp = 478 nm) នៅពេលប្រើ 5-IAF ជាស្លាក ដំណោះស្រាយល្អប្រសើរនៃកំពូលនៃ thiol-fluorescent conjugates ត្រូវបានសម្រេចបើប្រៀបធៀបទៅនឹង thiol-monobimane conjugates ។ ទិន្នផលនៃប្រតិកម្មកែប្រែ AT 5-IAF ដែលកំណត់ដោយពិសោធន៍ដោយកាត់បន្ថយអាំងតង់ស៊ីតេនៃកំពូលស្លាក fluorescent គឺ 95% ។ ដេរីវេនៃលទ្ធផលទាំងអស់ត្រូវបានញែកចេញពីល្បាយ និងកំណត់លក្ខណៈដោយម៉ាស់។

ទិន្នន័យដែលទទួលបានបានបម្រើជាមូលដ្ឋានសម្រាប់ការអភិវឌ្ឍនៃវិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការកំណត់បរិមាណនៃ homocysteine ​​​​។ ដើម្បីបង្កើតខ្សែកោងការក្រិតតាមខ្នាតគំរូនៃល្បាយដែលមានមាតិការបស់វាពី 2.5 ទៅ 100 μM ត្រូវបានប្រើប្រាស់។ ចន្លោះពេលដែលបានជ្រើសរើសរួមមានជួរនៃការប្រមូលផ្តុំសរីរវិទ្យានៃ Hcy (5-50 μM) ។ mBrB ត្រូវបានប្រើជាស្លាក។ ការពឹងផ្អែកនៃការក្រិតតាមខ្នាតជាលទ្ធផលនៃតំបន់កំពូលនៃក្រូម៉ាតនៅលើមាតិកា homocysteine ​​​​នៅក្នុងល្បាយគឺលីនេអ៊ែរនៅទូទាំងជួរប្រមូលផ្តុំដែលបានសិក្សាហើយត្រូវបានពិពណ៌នាដោយសមីការ:

គម្លាតស្តង់ដារដែលទាក់ទងនៃលទ្ធផលនៃការកំណត់ដោយតំបន់កំពូលមិនលើសពី 0.083 ហើយដោយពេលវេលានៃការស្តារឡើងវិញ - 0.026 ។ ដែនកំណត់នៃការរកឃើញនៃការរកឃើញ fluorimetric នៃដេរីវេនៃ MB គឺ 1 μM (រូបភាព 7) ។

អង្ករ។ 7. ការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុងតំបន់នៃកំពូល chromatographic អាស្រ័យលើកំហាប់នៃ Hcy ប្រសិទ្ធភាពនៃវិធីសាស្រ្តត្រូវបានបញ្ជាក់ដោយការប្រៀបធៀប chromatograms ដែលទទួលបានសម្រាប់សារធាតុបុគ្គលនិងសម្រាប់សំណាកប្លាស្មាឈាមដែលបានរៀបចំដោយប្រើវិធីសាស្រ្តដែលបានស្នើឡើង។ ការសិក្សាដែលបានអនុវត្តបានធ្វើឱ្យវាអាចបង្កើតវិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការកំណត់បរិមាណនៃ homocysteine ​​​​, cysteine ​​​​និង glutathione ក្នុងប្លាស្មាឈាម ហើយប្រើវាដោយជោគជ័យសម្រាប់ការវិភាគជាប្រចាំនៃអង្គបដិប្រាណដែលបានរៀបរាប់ខាងលើក្នុងទម្រង់ជាដេរីវេនៃ MB របស់ពួកគេ (រូបភាព 8) . នៅពេលបង្កើតវិធីសាស្ត្រ ការត្រួតពិនិត្យបន្ថែមត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើវិធីសាស្ត្រ "បញ្ចូល-រកឃើញ" (តារាងទី 2) ។

អង្ករ។ 8. RP HPLC នៃប្លាស្មាឈាមពីអ្នកបរិច្ចាគដែលមានសុខភាពល្អ។ Cys-MB-192.4 µM, HcyMB-10.1 µM, GS-MB-15.7 µM ។ ការរកឃើញ Fluorimetric ការកំណត់ Hcy ក្នុងទម្រង់ជាដេរីវេនៃ MB ដោយប្រើ microcolumn HPLC ដោយប្រើវិធីសាស្ត្រដែលបានអភិវឌ្ឍ គំរូប្លាស្មាឈាមច្រើនជាង 50 ពីអ្នកជំងឺដែលមានសុខភាពល្អ និងអ្នកដែលទទួលរងពីជំងឺសរសៃឈាមបេះដូងនៃភាពធ្ងន់ធ្ងរផ្សេងៗគ្នាត្រូវបានវិភាគ។ ចំពោះអ្នកជំងឺដែលមានសុខភាពល្អ មាតិកាមធ្យម (μM) នៃ AT ក្នុងប្លាស្មាឈាមដែលទទួលបានពីសរសៃវ៉ែននៅលើពោះទទេនៅពេលព្រឹកគឺ៖

សម្រាប់ Hcy 12.75 ±3.21 សម្រាប់ GSH 9.53 ±1.17 និងសម្រាប់ Cys 206.34 ±24.61។ តម្លៃ​កំហាប់​ដែល​ទទួល​បាន​ធ្លាក់​ក្នុង​ចន្លោះ​តម្លៃ​យោង​ដែល​បាន​ផ្ដល់​ក្នុង​អក្សរសិល្ប៍។ ចំពោះអ្នកជំងឺដែលមានជំងឺសរសៃឈាមបេះដូង កំហាប់នៃ Hcy នៅក្នុងប្លាស្មាឈាម អាស្រ័យលើភាពធ្ងន់ធ្ងរនៃជំងឺ។ លទ្ធផលទាក់ទងនឹងស្ថានភាពគ្លីនិករបស់អ្នកជំងឺ។

លទ្ធភាពនៃការវិភាគ AT ដោយប្រើវិធីសាស្ត្ររាវរកដែលមានតម្លៃថោក និងសាមញ្ញជាងនេះ ដោយសារការថតរូបភាពត្រូវបានស៊ើបអង្កេត។ ការពិសោធន៍បានបង្ហាញថាវាផ្តល់នូវភាពប្រែប្រួលដែលអនុញ្ញាតឱ្យមនុស្សម្នាក់កំណត់កម្រិតខ្ពស់នៃ AT នៅក្នុងប្លាស្មាឈាម។ នៅពេលប្រើការរកឃើញ photometric វាជាការប្រសើរក្នុងការប្រើ 5-IAF ជាស្លាកព្រោះវាដោះស្រាយកម្រិតកំពូលទៅបន្ទាត់មូលដ្ឋាន (រូបភាពទី 9) ដែលអនុញ្ញាតឱ្យមានបរិមាណ។

អង្ករ។ 9. RP HPLC នៃល្បាយគំរូនៃ aminothiols ដែលបានកែប្រែជាមួយ monobromobimane (a) និង 5-iodoacetamidofluorescein (b) ។ ក) Cys-MB-50.0 µM, HcyMB-25.0 µM, GS-MB-25.0 µM ។ ខ) Cys-AF-50.0 µM, Hcy-AF-75.0 µM, GS-AF- 25.0 µM ។ ការរកឃើញ photometric (a = 234 nm, b = 250 និង 300 nm) ដូច្នេះការងារដែលបានអនុវត្តបានធ្វើឱ្យវាអាចធ្វើទៅបានដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពដំណាក់កាលនៃការរៀបចំគំរូដោយអនុវត្តវានៅក្រោម "លក្ខខណ្ឌស្រាល" ជាមួយនឹងទិន្នផលបរិមាណធានានៃសមាសធាតុដែលបានវិភាគ។ នៅលើមូលដ្ឋានរបស់វា វិធីសាស្រ្តមួយត្រូវបានបង្កើតឡើងដែលអនុញ្ញាតឱ្យមនុស្សម្នាក់កំណត់យ៉ាងឆាប់រហ័ស និងអាចទុកចិត្តបានអំពីខ្លឹមសារនៃអង្គបដិប្រាណទម្ងន់ម៉ូលេគុលទាបនៅក្នុងប្លាស្មាឈាមរបស់អ្នកជំងឺដែលមានសុខភាពល្អ និងឈឺ។ កំហុសនៃការវាស់វែងមិនលើសពី 8,5% ។ ដែនកំណត់ទាបនៃជួរនៃកំហាប់ដែលបានវាស់ (2.5 μM) បង្ហាញពីលទ្ធភាពជាមូលដ្ឋាននៃការប្រើប្រាស់បច្ចេកទេសនេះដើម្បីកំណត់បរិមាណថយចុះនៃ Hcy នៅក្នុងប្លាស្មាឈាម។ ដែនកំណត់នៃការរកឃើញនៃវិធីសាស្ត្រដែលបានពិពណ៌នាគឺ 1 µM ។ វិធីសាស្រ្តដែលត្រូវបានបង្កើតឡើងត្រូវបានធ្វើតេស្តលើសំណាកពិតនៃប្លាស្មាឈាមរបស់អ្នកជំងឺ ហើយអាចត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការប្រើប្រាស់ជាប្រចាំ។

ការកំណត់ homocysteine ​​​​និង aminothiols ទម្ងន់ម៉ូលេគុលទាបផ្សេងទៀតនៅក្នុងប្លាស្មា រូបភព។ 10. CZE នៃល្បាយគំរូ AT មានពេលធ្វើចំណាកស្រុក 6.18 ±0.16; cysteine ​​​​បានកែប្រែ mBrB Hcy-MB-700.0 µM, Cys-MB-300.0 µM 6.83 ± 0.20 និង glutathione - 8.54 ± 0.17 នាទីរៀងគ្នា (រូបភាព 10) ។ បើប្រៀបធៀបទៅនឹង GS-MB- 700.0 µM ។ (ស្រូប = 234 nm) ។

Capillary: អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 50 µm វិធីសាស្រ្ត HPLC CZE ពេញលេញបានប្រើ អនុញ្ញាតឱ្យមានប្រវែង 82 សង់ទីម៉ែត្រ ប្រវែងមានប្រសិទ្ធភាព 62 សង់ទីម៉ែត្រ។

សតិបណ្ដោះអាសន្ន៖ 50 mM សូដ្យូម tetraborate pH = 11.0 ។ កាត់បន្ថយពេលវេលានៃការវិភាគ AT ដោយ 2-3 នាទី។

វ៉ុល: 25 kV ។ ចរន្ត៖ 58 µA ។

(ខ្វះចន្លោះ) ការរកឃើញកាំរស្មីយូវីដោយផ្ទាល់គឺមិនគ្រប់គ្រាន់ដើម្បីកំណត់បរិមាណ Hcy តិចតួចនៅក្នុងប្លាស្មាឈាមនោះទេ។ នៅមាតិកា homocysten នៃ 10 µM សមាមាត្រសញ្ញា / ផ្ទៃខាងក្រោយគឺ 2.5-3 ហើយគម្លាតស្តង់ដារដែលទាក់ទងគឺស្ថិតនៅក្នុងចន្លោះ 0.3-0.5 ។ វិធីសាស្រ្តនេះអាចអនុវត្តបានដើម្បីគ្រប់គ្រងមាតិកានៃ Hcy នៅក្នុងប្លាស្មាឈាមរបស់អ្នកជំងឺដែលមានកម្រិតខ្ពស់នៃរោគសាស្ត្រ (25 µM) ។ គម្លាតស្តង់ដារដែលទាក់ទងនៅពេលកំណត់ការប្រមូលផ្តុំទាំងនេះគឺ 0.12 សម្រាប់ MB-Cys, 0.18 សម្រាប់ MB-Hcy និង 0.17 សម្រាប់ MB-GS ។

Capillary zonal electrophoresis ជាមួយនឹងការរកឃើញ fluorimetric ត្រូវបានអនុវត្តនៅលើឧបករណ៍វិភាគអ៊ីយ៉ុង capillary "Nanofor 02" (INP RAS, St. Petersburg) ការវិភាគនៃ Hcy ក្នុងទម្រង់ជានិស្សន្ទវត្ថុ MV ដោយប្រើ RP HPLC ជាមួយ fluorimetric និង CZE ជាមួយការរកឃើញ photometric (n = 5; P = 0.95 ) ល្បាយគំរូនៃដេរីវេទីវ័រ AF ត្រូវបានសិក្សាដោយវិធីសាស្ត្រ CZE ជាមួយនឹង photometric ផ្ទាល់ (រូបភាព 11) និងការរកឃើញ fluorimetric (រូបភាព 12) (តារាង 3) ។ ការរកឃើញ Photometric ត្រូវបានអនុវត្តនៅរលកនៃ 492 nm ដែលត្រូវគ្នាទៅនឹងរលកនៃការរំភើបនៃ 5-IAF ។ សម្រាប់ការរកឃើញ fluorimetric ប្រវែងរលករំភើបគឺ 473 nm និងរលកនៃការបំភាយគឺ 514 nm ។ វាត្រូវបានបង្កើតឡើងដែលថាការប្រើប្រាស់ 5-IAP ធ្វើឱ្យវាអាចបង្កើនភាពប្រែប្រួលនៃការកំណត់ Hcy ដោយវិធីសាស្ត្រ CZE ជាមួយនឹងការរកឃើញ fluorimetric ។

ការស្រូបយក, 492 nm រូបភាព។ រូបទី 11. CZE នៃល្បាយគំរូនៃ AT, mo- រូបភព។ 12. CZE នៃល្បាយគំរូនៃ ATs ដែលបានកែប្រែជាមួយ 5-iodoacetamido-កែប្រែ 5-iodoacetamidofluorescein ជាមួយនឹងកាំរស្មី UV fluorescein ផ្ទាល់ជាមួយនឹង fluorimetric Hcy-AF-100.0 µM, Cys-AF-300.0 µM, GS-AF-Hcy-AF-15, µM, Cys-AF-15.0 µM, GS-AFµM ។ (abs = 473 nm, exp = 514 nm) 700.0 µM ។ (ស្រូប = 492 nm) ។

Capillary: អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 50 µm, Capillary សរុប: អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 50 µm, ប្រវែងសរុប 68 សង់ទីម៉ែត្រ, ប្រវែងមានប្រសិទ្ធភាព 53 សង់ទីម៉ែត្រ ប្រវែង 65 សង់ទីម៉ែត្រ, ប្រវែងមានប្រសិទ្ធភាព 57 សង់ទីម៉ែត្រ។

Buffer: 25 mM sodium tetraborate, 25 mM phosphate Buffer: 25 mM sodium tetraborate, 25 mM sodium phosphate pH = 11.2 ។ វ៉ុល: 20 kV ។ កម្លាំងបច្ចុប្បន្ន៖ សូដ្យូម pH = 11.2 ។ វ៉ុល: 20 kV ។ កម្លាំងបច្ចុប្បន្ន៖

២២ µA។ សីតុណ្ហភាព: 25.0 oC ។ ពេលវេលាបញ្ចូលគឺ 18 µA ។ សីតុណ្ហភាព: 25.0 oC ។ ពេលវេលាចាក់គំរូ៖ 5 s (electrokinetic, voltage at: 5 s (electrokinetic, voltage at) វិធីសាស្រ្តដែលបានបង្កើតសម្រាប់កំណត់មាតិកា homocysteine ​​​​នៅក្នុងប្លាស្មាឈាមដោយប្រើ RP HPLC និង capillary electrophoresis ត្រូវបានណែនាំទៅក្នុងការអនុវត្តការវិភាគជីវវេជ្ជសាស្ត្រដោយ JSC បច្ចេកវិទ្យាវេជ្ជសាស្រ្ត, Ltd.

ដោយប្រើ electrophoresis capillary gel ។ ការផ្លាស់ប្តូរខ្លឹមសារនៃសញ្ញាសម្គាល់ម៉ូលេគុលនៅក្នុងសារធាតុរាវសរីរវិទ្យាក៏អាចបណ្តាលមកពីហ្សែនរបស់អ្នកជំងឺចំពោះជំងឺជាក់លាក់មួយ។ ដូច្នេះហើយ ចាំបាច់ត្រូវធ្វើការវិភាគប្រៀបធៀបនៃបំណែក DNA ដើម្បីបង្កើនភាពជឿជាក់នៃការកំណត់ពីមូលហេតុនៃជំងឺដែលកំពុងសិក្សា និងមានប្រសិទ្ធភាពជាងការព្យាបាលរបស់វា។

នៅក្នុងការងារនេះ យើងបានស៊ើបអង្កេតលទ្ធភាពនៃការប្រើប្រាស់ឧបករណ៍ CE ក្នុងស្រុកដែលអាចរកបានដើម្បីកំណត់ការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុងម៉ូលេគុល DNA ដោយប្រើឧទាហរណ៍នៃបំណែកនៃហ្សែន mutant សម្រាប់ការស្ទះសរសៃឈាមវ៉ែន ដោយប្រើ PCR ជាក់លាក់ allele ។ Nucleotides ត្រូវបានបំបែកដោយ capillary gel electrophoresis (CGE) ដោយប្រើ capillaries កែវរ៉ែថ្មខៀវដែលមិនបានកែប្រែដែលមានអង្កត់ផ្ចិតពី 25 ទៅ 100 μm។ លីនេអ៊ែរ poly-N, N-dimethylacrylamide (pDMA) នៃផលិតកម្មក្នុងស្រុកត្រូវបានគេប្រើជាម៉ាទ្រីសបំបែក។ ជម្រើសនៃវត្ថុធាតុ polymer នេះគឺទាក់ទងទៅនឹងលទ្ធភាពនៃការប្រើប្រាស់របស់វានៅក្នុងកំណែបន្ទះឈីបរបស់ CGE ។ pDMA ត្រូវបានសំយោគនៅ Synthol JSC ពី dimethylacrylamide monomer ដោយវត្ថុធាតុ polymerization រ៉ាឌីកាល់។ ប្រវែងខ្សែសង្វាក់ត្រូវបានគ្រប់គ្រងដោយការផ្លាស់ប្តូរសីតុណ្ហភាពឬបន្ថែមឧបករណ៍រើសអេតចាយរ៉ាឌីកាល់។ ប៉ូលីម័រដែលមាន 5-8% pDMA monomer ត្រូវបានប្រើប្រាស់។ 0.1 M TBE (0.1 M TRIS, 0.1 M អាស៊ីត boric និង 2.5 mM EDTA; pH = 8.3) និង 0.1 M TAPS (N-tris(hydroxymethyl)methyl) ត្រូវបានគេប្រើជាអេឡិចត្រូលីតផ្ទៃខាងក្រោយ។ សារធាតុប៉ូលីម៊ែរដែលបានសិក្សាទាំងអស់មានកម្រិតទាបនៃហ្វ្លុយអូរីសដើម (0.5 AU)។ ប៉ូលីមែរដែលបានរៀបចំដោយប្រើ 0.1M TAPS អនុញ្ញាតឱ្យមានការបំបែករហូតដល់ទៅ 5 ដោយមិនចាំបាច់បំពេញ capillary ជាមួយជែល ខណៈដែលវត្ថុដែលមាន TBE អនុញ្ញាតមិនលើសពី 3 ។ ប៉ូលីមែរទាំងនេះផ្តល់នូវដំណោះស្រាយដែលអាចប្រៀបធៀបទៅនឹងសមភាគីលោកខាងលិចដែលត្រូវគ្នា ប៉ុន្តែក៏មានតម្លៃសមរម្យជាងផងដែរ។

ការសិក្សាអំពីល្បាយនៃសារធាតុ polynucleotides ដែលមានស្លាក fluorescent ដែលមានប្រវែង 5-15 nucleotides ។ រៀងគ្នាជាមួយនឹងមាតិកា 10-9 M នៃពួកវានីមួយៗវាអាចធ្វើទៅបានដើម្បីកំណត់សមាសភាពវត្ថុធាតុ polymer ល្អបំផុតសម្រាប់ការបំបែក oligonucleotides ដែលមានប្រវែងខ្សែសង្វាក់រហូតដល់ 100 nt ។ (រូបទី 13) ។ នេះគឺជាជែលដែលមានមូលដ្ឋានលើ pDMA ដែលមានសារធាតុ monomer 6%, អ៊ុយ 7M និង 0.1M TAPS ។

អង្ករ។ 13. ការបំបែកល្បាយនៃសារធាតុប៉ូលីណូទីតដែលមានប្រវែង Capillary: អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង - 50 µm, ប្រវែងសរុប - 45 សង់ទីម៉ែត្រ, ប្រវែងមានប្រសិទ្ធិភាព - 38.5 សង់ទីម៉ែត្រ Polymer: 6% pDMA monomer, 0.1M TAPS, 7M អ៊ុយ។ អេឡិចត្រូលីតដែលកំពុងដំណើរការ: 0.1M TAPS ។ វ៉ុល៖

10 kV ។ ចរន្ត៖ 4.3 µA ។ សីតុណ្ហភាព: 25.0 oC ។ ពេលវេលាចាក់គំរូគឺ 10 វិនាទី (អេឡិចត្រូគីនទិក វ៉ុលប្រមូលគំរូគឺ 10 kV) ។

ការបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃលក្ខខណ្ឌនៃការបំបែក (វ៉ុល ចរន្ត ប្រវែងមានប្រសិទ្ធភាព និងអង្កត់ផ្ចិត capillary) ធ្វើឱ្យវាអាចសម្រេចបាននូវការបំបែកទៅជាបន្ទាត់មូលដ្ឋាននៃ oligonucleotides ដែលមានប្រវែងសរុបតិចជាង 100 nt ។ និងភាពខុសគ្នានៃប្រវែង 1 n.o. (រូបភាព 14 ។ ) ។

អង្ករ។ 14. ការបំបែកនៃល្បាយនៃ polynucleotides ជាមួយនឹងភាពខុសគ្នានៃប្រវែង 1 bp ។

Capillary: អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង - 50 µm, ប្រវែងសរុប - 65 សង់ទីម៉ែត្រ, ប្រវែងមានប្រសិទ្ធិភាព - 57,5 ​​សង់ទីម៉ែត្រ Polymer: 6% pDMA monomer, 0.1M TAPS, 7M អ៊ុយ។ អេឡិចត្រូលីតដែលកំពុងដំណើរការ: 0.1M TAPS ។ វ៉ុល៖

11 kV ។ ចរន្ត៖ 5.1 µA ។ សីតុណ្ហភាព: 25.0 oC ។ ពេលវេលាចាក់គំរូគឺ 10 វិនាទី (អេឡិចត្រូគីនទិក វ៉ុលប្រមូលគំរូគឺ 10 kV) ។

ទិន្នន័យដែលទទួលបានបានបម្រើជាមូលដ្ឋានសម្រាប់ការបង្កើតប្រព័ន្ធសម្រាប់ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យយ៉ាងឆាប់រហ័ស និងមានប្រសិទ្ធភាពនៃហ្សែន mutant សម្រាប់ការស្ទះសរសៃឈាមវ៉ែន (ហ្សែន Leiden នៃកត្តា V នៃប្រព័ន្ធ coagulation ឈាមរបស់មនុស្ស) ។

ដើម្បីបញ្ជាក់ពីលទ្ធភាពនៃការកំណត់រួមគ្នានៃផលិតផលព្រៃ និងប្រភេទ mutant (ភាពខុសគ្នា 5 bp) PCRs ខាងក្រោមត្រូវបានអនុវត្ត៖ 1.

ប្រភេទ DNA ប្រភេទព្រៃ (គ្មានការផ្លាស់ប្តូរ) + ប្រភេទ primer ប្រភេទព្រៃ; 2. ប្រភេទ DNA ព្រៃ (ដោយគ្មានការផ្លាស់ប្តូរ) + FV Leiden primer; 3. DNA ជាមួយនឹងការផ្លាស់ប្តូរ heterozygous FV Leiden + primer FV Leiden; 4. FV Leiden primer ដោយគ្មាន DNA ។ ផលិតផលប្រតិកម្មបន្ទាប់ពីការព្យាបាលជាមួយ formamide និងការពនឺជាមួយទឹកត្រូវបានវិភាគដោយ CGE ជាមួយនឹងការរកឃើញ fluorimetric ។ ការវិភាគលើគំរូទី 1 និងទី 3 បានបង្ហាញពីវត្តមានរបស់ផលិតផលនៅក្នុងល្បាយបន្ទាប់ពី PCR ហើយសំណាកទី 2 និងទី 4 បានបង្ហាញពីអវត្តមានរបស់វា។ ដើម្បីបញ្ជាក់គំរូនេះ យើងបានវិភាគល្បាយនៃផលិតផល primer/mutant mutant និងគំរូផលិតផល primer/wild-type ក្នុងសមាមាត្រ 1:1 (រូបភាព 15)។

អង្ករ។ 15. ការប្តេជ្ញាចិត្តរួមគ្នានៃផលិតផល PCR ដែលផ្លាស់ប្តូរនិងមិនផ្លាស់ប្តូរ Capillary: អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង – 50 µm ប្រវែងសរុប – 45 សង់ទីម៉ែត្រ ប្រវែងមានប្រសិទ្ធភាព – 38.5 សង់ទីម៉ែត្រ Polymer 6% pDMA monomer, 0.1 M TAPS, 7 M អ៊ុយ។ អេឡិចត្រូលីតដែលកំពុងដំណើរការ: 0.1M TAPS ។ វ៉ុល: 12 kV ។

ចរន្ត៖ 6.5 µA ។ សីតុណ្ហភាព: 25.0 oC ។ ពេលវេលាប្រមូលគំរូ៖ 10 s (electrokinetic, វ៉ុលប្រមូលគំរូ - 10 kV) ។

ទិន្នន័យដែលទទួលបានបង្ហាញពីលទ្ធភាពនៃការកំណត់រួមគ្នានៃផលិតផល PCR ជាក់លាក់ allele នៃការផ្លាស់ប្តូរ FV Leiden និងប្រភេទព្រៃ។ វិធីសាស្រ្តដែលបានស្នើឡើងគឺការជ្រើសរើស និងការសំយោគនៃ primers ជាក់លាក់ allele នៃប្រវែងផ្សេងគ្នា និង primer counter ទូទៅ អមដោយការវិភាគដោយ CGE ជាមួយនឹងការរកឃើញ fluorimetric អាចត្រូវបានពង្រីកដើម្បីធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យជំងឺដែលបានកំណត់ហ្សែនផ្សេងទៀត។ វាគួរតែត្រូវបានគេកត់សម្គាល់ផងដែរថាវាអាចធ្វើទៅបានដើម្បីវិភាគ oligonucleotides ដោយប្រើឧបករណ៍ក្នុងស្រុកស្តង់ដារដែលត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការវិភាគនៃអាស៊ីតអាមីណូនិង peptides ខ្លី។

1. វិធីសាស្រ្តត្រូវបានបង្កើតឡើងសម្រាប់ការវិភាគនៃអាស៊ីតអាមីណូដែលបានអ៊ិនកូដហ្សែនដោយមិនមានដេរីវេបឋមរបស់វាដោយប្រើ micellar electrokinetic chromatography និង capillary zone electrophoresis ជាមួយនឹង refractometric និងការរកឃើញកាំរស្មីយូវីដោយផ្ទាល់។ ឥទ្ធិពលនៃសមាសភាព និងតម្លៃ pH នៃអេឡិចត្រូលីតផ្ទៃខាងក្រោយ ក៏ដូចជាការបន្ថែមសារធាតុរំលាយសរីរាង្គលើប្រសិទ្ធភាពនៃការបំបែកត្រូវបានសិក្សា។

2. ដោយប្រើវិធីសាស្រ្តនៃ micellar electrokinetic chromatography ជាមួយការរកឃើញកាំរស្មី UV ដោយផ្ទាល់ ការកំណត់បរិមាណនៃល្បាយគំរូនៃអាស៊ីតអាមីណូឥតគិតថ្លៃចំនួន 14 ដែលត្រូវបានអ៊ិនកូដហ្សែនត្រូវបានអនុវត្ត។

3. វិធីសាស្រ្តមួយត្រូវបានបង្កើតឡើងសម្រាប់ការកំណត់យ៉ាងឆាប់រហ័ស និងគួរឱ្យទុកចិត្តនៃមាតិកានៃ aminothiols ទម្ងន់ម៉ូលេគុលទាបនៅក្នុងប្លាស្មាឈាមរបស់អ្នកជំងឺដែលមានសុខភាពល្អ និងឈឺដោយប្រើ HPLC ដំណាក់កាលបញ្ច្រាសជាមួយនឹងការរកឃើញ fluorimetric ។ លទ្ធភាពជាមូលដ្ឋាននៃការប្រើប្រាស់បច្ចេកទេសនេះដើម្បីកំណត់កម្រិតទាបនៃ homocysteine ​​​​ក្នុងប្លាស្មាឈាមត្រូវបានបង្ហាញ។ វិធីសាស្រ្តដែលត្រូវបានបង្កើតឡើងត្រូវបានធ្វើតេស្តលើគំរូពិតនៃប្លាស្មាឈាមរបស់អ្នកជំងឺ។

4. លទ្ធភាពនៃការកំណត់កំហាប់ខ្ពស់នៃសារធាតុ homocysteine ​​​​ក្នុងប្លាស្មាឈាមដោយ electrophoresis តំបន់ capillary ជាមួយនឹងការរកឃើញ photometric ត្រូវបានបង្ហាញ។ វិធីសាស្រ្តដែលត្រូវបានបង្កើតឡើងត្រូវបានធ្វើតេស្តលើគំរូពិតនៃប្លាស្មាឈាមរបស់អ្នកជំងឺ។ លទ្ធភាពនៃការប្រើប្រាស់ 5-iodoacetamidofluorescein ជាស្លាកស្រូប និង fluorogenic ត្រូវបានសិក្សា។

5. វិធីសាស្រ្តមួយត្រូវបានបង្កើតឡើងសម្រាប់ការកំណត់ជ្រើសរើសបំណែកនៃហ្សែន mutant សម្រាប់ការស្ទះសរសៃឈាមវ៉ែន (ការផ្លាស់ប្តូរ FV Leiden) ដោយ capillary gel electrophoresis ជាមួយការរកឃើញ fluorimetric ។ លទ្ធភាពនៃការវិភាគ nucleotides ដែលមានប្រវែងខ្សែសង្វាក់រហូតដល់ 100 nucleotides ត្រូវបានបង្ហាញ។ និងជាមួយនឹងភាពខុសគ្នានៃប្រវែង 1 n.o.

សម្ភារៈសំខាន់ៗនៃនិក្ខេបបទត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុងស្នាដៃដូចខាងក្រោមៈ

1. Melnikov I.O., Nazimov I.V., Stukacheva E.A., Glubokov Yu.M. ការកំណត់មាតិកានៃ homocysteine ​​​​និង aminothiols ទម្ងន់ម៉ូលេគុលទាបផ្សេងទៀតនៅក្នុងប្លាស្មាឈាម។ // J. អាណាល់។ ចែម។ -២០០៦។ - ធ. 61. - លេខ 11. -S ។ ១១៨៥-១១៩១។

2. Melnikov I.O., Glubokov Yu.M., Nazimov I.V. Capillary electrophoresis នៃអាស៊ីដអាមីណូឥតគិតថ្លៃជាមួយនឹង refractometric និងការរកឃើញកាំរស្មី UV ដោយផ្ទាល់។ // Inf.-anal ។ ព្រឹត្តិបត្រ "កំណត់ចំណាំវិទ្យាសាស្ត្ររបស់ MITHT" ។ អិមៈ

មីត។ -២០០៤។ វ៉ុល។ 11. -ស. ៥៤-៥៧។

3. Melnikov I.O., Glubokov Yu.M., Nazimov I.V. ការវិភាគនៃ aminothiols ទម្ងន់ម៉ូលេគុលទាបដោយ capillary electrophoresis និង RP HPLC ជាមួយនឹង fluorescent និងការរកឃើញកាំរស្មី UV ដោយផ្ទាល់។ // J. "បច្ចេកវិទ្យាទំនើបទំនើប" ។ អិមៈ បណ្ឌិត្យសភាវិទ្យាសាស្ត្រធម្មជាតិ ឆ្នាំ ២០០៥។ - លេខ 3 ។ -P.40-41 ។

4. Melnikov I.O., Nazimov I.V., Stukacheva E.A., Glubokov Yu.M. ការកំណត់ HPLC និង HPCE នៃ homocysteine ​​​​ជាលក្ខណៈវិនិច្ឆ័យនៃសរសៃឈាមកត្តាហានិភ័យនៃជំងឺ។ // FEBS J. -2006 ។ - វ. ២៧៣.-ស.១. - ភី។ ២៥៦.

5. Melnikov I.O., Nazimov I.V., Lobazov A.F., Popkovich G.V. Capillary electrophoresis នៃអាស៊ីតអាមីណូដែលមិនអាចកែប្រែបាន។ // អរូបី។ របាយការណ៍ សន្និសិទរុស្ស៊ីទាំងអស់លើកទី 8 ស្តីពីម៉ូលេគុលរាវ ក្រូម៉ាតូក្រាម និង អេឡិចត្រុស កាពីឡារី ទីក្រុងមូស្គូ ខែតុលា ឆ្នាំ ២០០១ ទំព័រ ២៣។

6. Melnikov I.O., Nazimov I.V., Lobazov A.F., Popkovich G.B. Capillary Electrophoresis នៃអាស៊ីតអាមីណូដែលមិនត្រូវបានកែប្រែដោយសរសេរកូដជាមួយនឹង Refractometricការរកឃើញ។ // សន្និសីទអន្តរជាតិលើកទី៣ ស្តីពីការបំបែកខ្លួនក្នុងជីវវិទ្យា ទីក្រុងមូស្គូ ខែឧសភា ឆ្នាំ ២០០៣ ទំព័រ ២៦៣។

7. Melnikov I.O., Stukacheva E.A., Glubokov Yu.M., Nazimov I.V. ការកំណត់ homocysteine ​​​​និង aminothiols ទម្ងន់ម៉ូលេគុលទាបផ្សេងទៀតនៅក្នុងប្លាស្មាឈាមដោយវិធីសាស្រ្ត CEF និង RP HPLC ។ // សម្ភារៈនៃសន្និសិទអន្តរជាតិរបស់និស្សិត និងនិស្សិតក្រោយឧត្តមសិក្សាផ្នែកវិទ្យាសាស្ត្រមូលដ្ឋាន "Lomonosov-2005" ។

M.: MSU, 2005. ផ្នែកគីមីវិទ្យា។ - ធ. ១.-ស. ៣១.

8. Nazimov I.V., Melnikov I.O., Glubokov Yu.M., Sivoplyasova E.A. ឧបករណ៍មីក្រូមេទីលសម្រាប់កំណត់ homocysteine ​​​​ជាកត្តាហានិភ័យនៃជំងឺសរសៃឈាមបេះដូង។ // សមា្ភារៈនៃសន្និសីទវិទ្យាសាស្ត្រនិងការអនុវត្តលើកទី 2 "បញ្ហាបច្ចុប្បន្ននៃជីវបច្ចេកវិទ្យាវេជ្ជសាស្រ្ត", Anapa, ខែកញ្ញា 2005, -S. ១៥-១៦។

9. Melnikov I.O., Nazimov I.V., Sivoplyasova E.A., Glubokov Yu.M. Micromethods សម្រាប់ការកំណត់បរិមាណនៃ homocysteine ​​​​ក្នុងប្លាស្មាឈាម។ // សម្ភារៈនៃសមាជលើកទី 3 នៃសង្គមជីវបច្ចេកវិទ្យានៃប្រទេសរុស្ស៊ីដាក់ឈ្មោះតាម។ Yu.A. Ovchinnikova, Moscow, ខែតុលា 2005, -S. ៦១.

10. Melnikov I.O., Sivoplyasova E.A., Glubokov Yu.M., Nazimov I.V. ការកំណត់កត្តាហានិភ័យសម្រាប់ជំងឺសរសៃឈាមបេះដូងដោយប្រើវិធីសាស្ត្រវិភាគក្រូម៉ាត។ // សម្ភារៈនៃសន្និសីទលើកទី 1 របស់អ្នកវិទ្យាសាស្ត្រវ័យក្មេង MITHT អ៊ឹម។ M.V. Lomonosov, Moscow, ខែតុលា 2005, -S. ៣១.

11. Melnikov I.O., Nazimov I.V., Stukacheva E.A., Glubokov Yu.M. ការបំបែកនិងការកំណត់អត្តសញ្ញាណនៃ aminothiols ទម្ងន់ម៉ូលេគុលទាបក្នុងឈាមដោយដំណាក់កាលបញ្ច្រាសនៃដំណើរការខ្ពស់នៃ chromatography រាវនិង capillary electrophoresis ។ // សមាជអន្តរជាតិស្តីពីវិទ្យាសាស្ត្រវិភាគ ICAS-2006, Moscow, June 2006, -P. ២០៤.

12. Melnikov I.O., Nazimov I.V., Patrushev L.I., Alekseev Ya.I., Glubokov Yu.M., Mosina A.G. ការកំណត់នៃការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន Leiden របស់មនុស្សដោយប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់នៃ capillary gel electrophoresis ។ // សន្និសីទអន្តរជាតិលើកទី 26 ស្តីពីការបំបែកប្រូតេអ៊ីន Peptides និង Polynucleotides, LMP, Innsbruck, Austria, តុលា 2006, -P. ២៤.

ស្នាដៃស្រដៀងគ្នា៖

"Dmitry Sergeevich KopchuK ដំណើរការបាន 5-ARYL-2,2'-BIPIRIDIINES និងពន្លឺភ្លឺច្បាស់របស់ពួកគេជាមួយនឹង LANTHANIDE(III) 02.00.03 ។ - អរូបីគីមីវិទ្យាសរីរាង្គនៃនិក្ខេបបទសម្រាប់សញ្ញាប័ត្រវិទ្យាសាស្ត្ររបស់បេក្ខជនវិទ្យាសាស្ត្រគីមី Ekaterinburg 2010 ការងារត្រូវបានអនុវត្តនៅនាយកដ្ឋានគីមីវិទ្យាសរីរាង្គនៃស្ថាប័នអប់រំរដ្ឋនៃការអប់រំវិជ្ជាជីវៈឧត្តមសិក្សា USTU-UPI ដែលដាក់ឈ្មោះតាមប្រធានាធិបតីទីមួយនៃប្រទេសរុស្ស៊ី B.N. អ្នកគ្រប់គ្រងការស្រាវជ្រាវ Yeltsin៖ បណ្ឌិតវិទ្យាសាស្ត្រគីមី Kozhevnikov Dmitry Nikolaevich អ្នកស្រាវជ្រាវផ្លូវការ៖ បណ្ឌិតវិទ្យាសាស្ត្រគីមី ... "

"Venv Sergey Valerievich e ការសិក្សាទ្រឹស្តីនៃឥទ្ធិពលនៃអន្តរកម្មអេឡិចត្រូស្តាតនិងរចនាសម្ព័ន្ធចម្បងនៃម៉ាក្រូម៉ូលេគុលលើការរៀបចំដោយខ្លួនឯង 02.00.06 - សមាសធាតុម៉ូលេគុលខ្ពស់ សង្ខេបនៃនិក្ខេបបទសម្រាប់កម្រិតបេក្ខជននៃវិទ្យាសាស្ត្ររូបវិទ្យានិងគណិតវិទ្យាទីក្រុងម៉ូស្គូ - 2011 ។ ការងារត្រូវបានអនុវត្តនៅនាយកដ្ឋានរូបវិទ្យានៃវត្ថុធាតុ polymer និងគ្រីស្តាល់នៃមហាវិទ្យាល័យរូបវិទ្យានៃសាកលវិទ្យាល័យរដ្ឋម៉ូស្គូដែលមានឈ្មោះតាម M.V. ឡូម៉ូណូសូវ។ អ្នកគ្រប់គ្រងវិទ្យាសាស្ត្រ៖ វេជ្ជបណ្ឌិត…”

" NIKOLAEV ANDREY ALEXANDROVICH ការសិក្សាទ្រឹស្តីនិងពិសោធន៍ក្នុងអន្តរកម្មនៃភាពស្មុគស្មាញនៅក្នុងលោហធាតុ 6 និង 1 0 G R U P Y S D A L K I L F O S F I T A M I ​​02.00.08 - អនុលោមភាពនៃគីមីសាស្ត្រនៃបរិញ្ញាបត្រ វិទ្យាសាស្រ្តគីមី Kazan - 2008 ការងារត្រូវបានអនុវត្ត នៅនាយកដ្ឋាននៃសមាសធាតុម៉ូលេគុលខ្ពស់ និងសរីរាង្គនៃវិទ្យាស្ថានគីមី ដែលដាក់ឈ្មោះតាម។ A. M. Butlerov រដ្ឋ ... "

"Vilesov Alexander Sergeevich ការសំយោគវិទ្យុសកម្ម-គីមីនៃទម្រង់ប៉ូលីម័រនៃផូស្វ័រនៅក្នុងបរិស្ថានផ្សេងៗគ្នា ០២.០០.០១. - គីមីវិទ្យាអសរីរាង្គ អរូបីនៃនិក្ខេបបទសម្រាប់សញ្ញាប័ត្រវិទ្យាសាស្ត្ររបស់បេក្ខជនវិទ្យាសាស្ត្រគីមីទីក្រុងមូស្គូឆ្នាំ ២០០៩ ការងារត្រូវបានអនុវត្តនៅវិទ្យាស្ថានគីមីវិទ្យានិងបញ្ហាអភិវឌ្ឍន៍ប្រកបដោយចីរភាពនៃសាកលវិទ្យាល័យគីមី - បច្ចេកវិទ្យារុស្ស៊ីដែលមានឈ្មោះតាម D.I. Mendeleeva អ្នកគ្រប់គ្រងវិទ្យាសាស្ត្រ៖ សមាជិកដែលត្រូវគ្នានៃបណ្ឌិត្យសភាវិទ្យាសាស្ត្ររុស្ស៊ីបណ្ឌិតវិទ្យាសាស្ត្រគីមីសាស្រ្តាចារ្យ Natalia Pavlovna Tarasova ផ្លូវការ ... "

"Slovokhotov Yuri Leonidovich រចនាសម្ព័ន្ធអាតូមិកនិងលក្ខណៈពិសេសនៃគ្រីស្តាល់គីមីវិទ្យានៃសារពាង្គកាយពេញលេញថ្មី 02.00.03 - គីមីវិទ្យាសរីរាង្គ 02.00.04 - គីមីវិទ្យារូបវន្តសង្ខេបនៃបណ្ឌិត្យសភាគីមីវិទ្យា 20 សញ្ញាបត្របណ្ឌិត។ នៃសមាសធាតុសរីរាង្គដាក់ឈ្មោះតាម A. N. Nesmeyanov បណ្ឌិតសភាវិទ្យាសាស្ត្ររុស្ស៊ី បណ្ឌិតវិទ្យាសាស្ត្រគីមីផ្លូវការ ... "

"Varnavskaya Olga Alekseevna លក្ខណៈរូបវិទ្យា-គីមីនៃភាពស្មុគស្មាញនៃ NEODYMIUM (III) និង EUROPIUM (III) ជាមួយនឹង 2,2-DIPIRIDILINE នៅក្នុងបរិស្ថានសរីរាង្គនៃភាពខុសគ្នានៃភាពខុសគ្នា 4 កម្រិតនៃភាពខុសគ្នា00. បេក្ខជននៃវិទ្យាសាស្ត្រគីមី Tomsk - ឆ្នាំ 2010 ការងារបានបញ្ចប់នៅសាកលវិទ្យាល័យ Altai State អ្នកត្រួតពិនិត្យវិទ្យាសាស្ត្រ Barnaul៖ បេក្ខជននៃវិទ្យាសាស្ត្រគីមីសាស្ត្រាចារ្យរង Smagin Vladimir Petrovich គូប្រជែងផ្លូវការ៖ វេជ្ជបណ្ឌិត ... "

"Krasnova Tatyana Aleksandrovna Mass spectrometry ជាមួយម៉ាទ្រីស (ផ្ទៃ) បានធ្វើឱ្យសកម្មឡាស៊ែរ desorption / ionization ក្នុងការកំណត់អត្តសញ្ញាណនិងការកំណត់នៃ oligomers នៃអាស៊ីត polysulfonic, polycarboxylic និងថ្នាំអង់ទីប៊ីយោទិច 02.00.02 - ការវិភាគគីមីវិទ្យាសារ៉ាយ សង្ខេបនៃសញ្ញាប័ត្រវិទ្យាសាស្ត្រ។ - ឆ្នាំ 2013 ការងារនេះត្រូវបានអនុវត្តនៅនាយកដ្ឋានគីមីវិទ្យានៃសាកលវិទ្យាល័យរដ្ឋវ្ល៉ាឌីមៀដែលដាក់ឈ្មោះតាម Alexander Grigorievich និង Nikolai Grigorievich ... "

"ការវិភាគពិសេស 02.00.02 - គីមីវិទ្យាវិភាគ សង្ខេបនៃនិក្ខេបបទសម្រាប់កម្រិតបេក្ខជននៃវិទ្យាសាស្ត្រគីមី Tomsk - 2012 www.sp-department.ru ការងារនេះត្រូវបានអនុវត្តនៅស្ថាប័នអប់រំថវិការដ្ឋសហព័ន្ធនៃការស្រាវជ្រាវជាតិនៃការអប់រំវិជ្ជាជីវៈជាន់ខ្ពស់។ .. "

"SMIRNOV Aleksey Aleksandrovich ដំណើរការរូបវិទ្យានិងគីមីនៅក្នុងសីតុណ្ហភាពទាប scientific ប្លាស្មា HBr និងល្បាយរបស់វាជាមួយ ARGON, HELIUM និង HYDROGEN 02.00.04 - ភាពមិនប្រាកដប្រជានៃបេក្ខជនរូបវិទ្យានិងរូបវិទ្យា វិទ្យាសាស្ត្រ Ivanovo 2010 ការងារបានបញ្ចប់នៅ ស្ថាប័នអប់រំរដ្ឋនៃការអប់រំវិជ្ជាជីវៈខ្ពស់ Ivanovo State Chemical Technology University ។ អ្នកគ្រប់គ្រងវិទ្យាសាស្ត្រ៖ បណ្ឌិតវិទ្យាសាស្ត្រគីមីសាស្ត្រាចារ្យ Efremov Alexander Mikhailovich គូប្រជែងផ្លូវការ៖ ... "

"VASYUTIN Oleg Alekseevich ការស្រាវជ្រាវអំពីឥទ្ធិពលនៃលក្ខខណ្ឌសំយោគនៅលើលក្ខណៈសម្បត្តិ ADsorption នៃ ferrospinel និងលក្ខណៈសម្បត្តិផ្ទៃនៃ YTTRIUM FERROGARNET ដោយវិធីសាស្រ្តនៃ collision 10WETTOMETRY ពិសេស។ នៃនិក្ខេបបទស្វែងរកសញ្ញាបត្រសិក្សារបស់បេក្ខជនវិទ្យាសាស្ត្រគីមី St Petersburg 2012 ការងារនេះត្រូវបានអនុវត្តនៅនាយកដ្ឋាន Colloid Chemistry នៃមហាវិទ្យាល័យគីមីវិទ្យា St. -Petersburg State ... "

" Melnikova Tatyana Igorevna ការអភិវឌ្ឍន៍ទ្រឹស្តីនិងគ្រោងការណ៍ពិសោធន៍សម្រាប់កំណត់សមាសភាពនិងរចនាសម្ព័ន្ធគីមីនៃ BISMUTH BORATES និង SYLLENITES ឯកទេស 02.00.21 វិញ្ញាបនប័ត្រគីមីវិទ្យានៃរដ្ឋរឹង s Moscow 2011 ការងារបានបញ្ចប់នៅនាយកដ្ឋានរូបវិទ្យា និង Chemistry of Solid State, Moscow State University of Fine Arts គីមីវិទ្យា បានដាក់ឈ្មោះតាម M.V. Lomonosov អ្នកគ្រប់គ្រងវិទ្យាសាស្ត្រ៖ វេជ្ជបណ្ឌិត ... "

“Starostina Irina Alekseevna អន្តរកម្មអាស៊ីត-មូលដ្ឋាននៃសារធាតុប៉ូលីម័រ និងលោហធាតុនៅក្នុងសមាសធាតុ adhesive 02.00.06 – សមាសធាតុម៉ូលេគុលខ្ពស់ សេចក្តីសង្ខេបនៃនិក្ខេបបទសម្រាប់សញ្ញាបត្របណ្ឌិតវិទ្យាសាស្ត្រគីមី Kazan - ការងារ 2011-demente ត្រូវបានអនុវត្ត www. ចេញនៅស្ថាប័នអប់រំថវិការដ្ឋសហព័ន្ធនៃការអប់រំវិជ្ជាជីវៈខ្ពស់ Kazan សាកលវិទ្យាល័យស្រាវជ្រាវជាតិនៃបច្ចេកវិទ្យា ទីប្រឹក្សាវិទ្យាសាស្ត្រ បណ្ឌិតវិទ្យាសាស្ត្របច្ចេកទេស សាស្រ្តាចារ្យ Oleg Vladislavovich Stoyanov គូប្រជែងផ្លូវការ វេជ្ជបណ្ឌិត ... "

"VASILIEV Vladimir Petrovich SPECTRAL - ការសិក្សាអំពីពន្លឺនៃអន្តរកម្មអន្តរកម្មនៃ METALLOCENE COMPLEXES Zr និង Hf នៅក្នុងដំណោះស្រាយ 02.00.04 ។ - គីមីវិទ្យារូបវិទ្យា អរូបីនៃនិក្ខេបបទសម្រាប់កម្រិតបេក្ខជននៃវិទ្យាសាស្ត្រគីមី Chernogolovka - ឆ្នាំ 2008 ការងារត្រូវបានអនុវត្តនៅវិទ្យាស្ថានបញ្ហារូបវិទ្យាគីមីនៃបណ្ឌិត្យសភាវិទ្យាសាស្ត្ររុស្ស៊ី និងវិទ្យាស្ថានគរុកោសល្យនៃសាកលវិទ្យាល័យសហព័ន្ធភាគខាងត្បូង អ្នកគ្រប់គ្រងវិទ្យាសាស្ត្រ៖ បេក្ខជន នៃវិទ្យាសាស្ត្រគីមី LUKOVA Galina Viktorovna ផ្លូវការ ... "

"SPANCHENKO Olga Valerievna មុខងារនៃទិដ្ឋភាពនៃការដឹកជញ្ជូន RNA 02.00.10 - គីមីជីវៈ សង្ខេបនៃនិក្ខេបបទសម្រាប់សញ្ញាបត្របណ្ឌិតវិទ្យាសាស្ត្រគីមីទីក្រុងម៉ូស្គូ - ឆ្នាំ 2010 2 ការងារត្រូវបានអនុវត្តនៅនាយកដ្ឋានគីមីវិទ្យានៃមហាវិទ្យាល័យគីមីសាស្ត្រនៃធម្មជាតិ។ នៃរដ្ឋម៉ូស្គូ ... "

“KOSHELEV Ekaterina Valentinovna SOLID ELECTROLYTES IN CaY2S4-Yb2S3 និង CaYb2S4-Y2S3 SYSTEMS Speciality: 02.00.05 – Electrochemistry Abtract of the dissertation for the scientific degree of the Sciences of the បេក្ខភាពទី 2 ការងារគីមីវិទ្យា 20 នាយកដ្ឋាន ic និងរូបវិទ្យា គីមីវិទ្យានៃស្ថាប័នអប់រំថវិការដ្ឋសហព័ន្ធនៃការអប់រំវិជ្ជាជីវៈខ្ពស់នៅក្នុងសាកលវិទ្យាល័យរដ្ឋ Yat, Kirov Kalinina Lyudmila Alekseevna, អ្នកគ្រប់គ្រងវិទ្យាសាស្រ្ត: បេក្ខជននៃវិទ្យាសាស្រ្តគីមី, សាស្រ្តាចារ្យរងនៃសាកលវិទ្យាល័យរដ្ឋ Vyatka, ...

Ekaterina Konstantinovna Lavrentyeva គំរូនៅក្នុងប្រព័ន្ធដែលមានដីឥដ្ឋជាវិធីសាស្រ្តសម្រាប់គ្រប់គ្រងលក្ខណៈសម្បត្តិនៃសារធាតុប៉ូលីម៊ែរ - សមាសធាតុផ្សំនិងសារធាតុអេឡិចត្រូលីតប្លាទីនឯកទេស: 02.00.06 - សមាសធាតុម៉ូលេគុលខ្ពស់ 02.00.05 - គីមីវិទ្យា សង្ខេបនៃនិក្ខេបបទនៃបេក្ខជនវិទ្យាសាស្ត្រ។ វិទ្យាសាស្ត្ររូបវិទ្យា និងគណិតវិទ្យា ទីក្រុងម៉ូស្គូ - ឆ្នាំ ២០០៩ ការងារធ្វើឡើងនៅនាយកដ្ឋានរូបវិទ្យា...”

"Evgenia Viktorovna Korchagina AGGREGATION នៃ CHITOSAN និងដេរីវេរបស់វានៅក្នុងដំណោះស្រាយទឹកដែលពនឺ 02.00.06 - សមាសធាតុម៉ូលេគុលខ្ពស់ វិទ្យាសាស្រ្តរូបវន្ត និងគណិតវិទ្យា និងអរូបីនៃនិក្ខេបបទសម្រាប់វិទ្យាសាស្ត្ររូបវិទ្យា សញ្ញាបត្រទី 2 នៃការងារ 02 របស់ទីក្រុងម៉ូស្គូ។ នៅនាយកដ្ឋានរូបវិទ្យានៃវត្ថុធាតុ polymer និងគ្រីស្តាល់នៃមហាវិទ្យាល័យរូបវិទ្យានៃសាកលវិទ្យាល័យ Moscow Skovsky State ។

"Vorobeva Ekaterina Georgievna CHIRAL PALLADIUM ស្មុគស្មាញផ្អែកលើដេរីវេដែលមានផ្ទុកសារធាតុនីត្រូហ្សិននៃធម្មជាតិ MONOTERPENOIDS 02.00.03 - គីមីវិទ្យាសរីរាង្គ សង្ខេបនៃនិក្ខេបបទសម្រាប់កម្រិតវិទ្យាសាស្ត្រនៃការងារ 1 នៃវិទ្យាសាស្ត្ររុស្ស៊ី 0 បេក្ខជន។ បណ្ឌិត្យសភា វិទ្យាស្ថានវិទ្យាសាស្ត្រគីមីវិទ្យានៃមជ្ឈមណ្ឌលវិទ្យាសាស្ត្រ Komi នៃសាខា Ural នៃបណ្ឌិត្យសភាវិទ្យាសាស្ត្ររុស្ស៊ីនិងនាយកដ្ឋានគីមីវិទ្យា FSBEI HPE Syktyvkar State University ។ អ្នកគ្រប់គ្រងវិទ្យាសាស្ត្រ៖ Olga Zalevskaya ... "

“ Rykunov Alexey Aleksandrovich ភាពចល័តនៃ QUANTUM-TOPOLOGICAL អាតូមិក និងឧបករណ៍បរិក្ខារសញ្ញាប័ណ្ណនៅក្នុងជួរនៃការជំនួសទឹកដោយជំនួសដោយជំនាញឯកទេស 02.00.04 - គីមីវិទ្យារូបវន្ត សង្ខេបនៃការសិក្សាផ្នែកគីមីវិទ្យា 2010 នៅទីក្រុងម៉ូស្គូ នៃ មហាវិទ្យាល័យគីមីវិទ្យា Quantum នៃវិទ្យាសាស្ត្រធម្មជាតិនៃសាកលវិទ្យាល័យគីមីវិទ្យារុស្ស៊ីដាក់ឈ្មោះតាម . ឌី. Mendeleev អ្នកគ្រប់គ្រងវិទ្យាសាស្ត្រ៖ បណ្ឌិតវិទ្យាសាស្ត្ររូបវិទ្យានិងគណិតវិទ្យាសាស្រ្តាចារ្យ ... "

"KORSHUN Vladimir Arkadievich កែប្រែសារធាតុ PYRIMIDINE NUCLEOSIDES និងមិនមែនជាសារធាតុនុយក្លេអ៊ែរនៅក្នុងការសំយោគនៃ OLIGONUCLEOTIDE CONJUGATES លក្ខណៈសម្បត្តិនិងការអនុវត្តរបស់ពួកគេ 02.00.10 - គីមីជីវៈគីមីនៃទីក្រុងម៉ូស្គូ 20 ដឺក្រេគីមីវិទ្យា ការងារនេះត្រូវបានអនុវត្តនៅក្នុង ក្រុមវិស្វកម្មហ្សែន Interleukin មន្ទីរពិសោធន៍នៃយន្តការបញ្ចេញហ្សែន មន្ទីរពិសោធន៍គីមីអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក មន្ទីរពិសោធន៍សំយោគសរីរាង្គ និងក្រុម...”

សង្ខេប

ការពិនិត្យឡើងវិញផ្តោតលើការសិក្សាអំពីឱសថសាស្ត្រ និងលទ្ធភាពទទួលបានជីវសាស្ត្រនៅពេលបង្កើតឱសថដើមថ្មីជាមួយនឹងរចនាសម្ព័ន្ធ peptide ។ ការយកចិត្តទុកដាក់ជាច្រើនត្រូវបានបង់ចំពោះវិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការកំណត់បរិមាណនៃសមាសធាតុ peptide នៅក្នុងជីវវត្ថុធាតុ ការសិក្សាអំពីលក្ខណៈ pharmacokinetic របស់វា កត្តាដែលជះឥទ្ធិពលដល់ជីវៈភាពនៃសារធាតុទាំងនេះ និងទិន្នន័យ pharmacokinetic មួយចំនួនលើថ្នាំដែលមានរចនាសម្ព័ន្ធ peptide ដែលត្រូវបានណែនាំទៅក្នុងការអនុវត្តផ្នែកវេជ្ជសាស្រ្តក៏ត្រូវបានផ្តល់ជូនផងដែរ។

ពាក្យគន្លឹះ៖ pharmacokinetics, peptides ខ្លី, bioavailability, excipients

សេចក្តីផ្តើម

ជំងឺថប់បារម្ភ គឺជាជំងឺផ្លូវចិត្តដែលត្រូវបានកំណត់ដោយការថប់បារម្ភជាទូទៅ ការភ័យខ្លាចខាងរោគសាស្ត្រ ភាពតានតឹង និងការភ័យ។ បច្ចុប្បន្ននេះ អត្រាប្រេវ៉ាឡង់នៃជំងឺដែលទាក់ទងនឹងជំងឺថប់បារម្ភមានចាប់ពី 13.6 ទៅ 28.8% នៅក្នុងប្រទេសលោកខាងលិច ហើយកំពុងកើនឡើងឥតឈប់ឈរដោយសារតែល្បឿនខ្ពស់នៃជីវិត ភាពតានតឹងផ្នែកបរិស្ថាន និងសង្គម។

ដោយសារតែការកើនឡើងយ៉ាងសំខាន់នៃជំងឺដែលទាក់ទងនឹងការថប់បារម្ភ និងជំងឺធ្លាក់ទឹកចិត្ត ការអភិវឌ្ឍន៍ និងការអនុវត្តថ្នាំ anxiolytic ថ្មីគឺពាក់ព័ន្ធ។ សព្វថ្ងៃនេះថ្នាំដែលមានឥទ្ធិពលឱសថសាស្ត្រត្រូវបានតំណាងជាចម្បងដោយក្រុមនៃសមាសធាតុ benzodiazepine ដែលត្រូវបានកំណត់លក្ខណៈដោយភាពអស់កម្លាំងងងុយដេកការចុះខ្សោយនៃការចងចាំការពឹងផ្អែកលើថ្នាំផ្លូវចិត្តនិងរាងកាយនិងរោគសញ្ញាដកដែលកាត់បន្ថយគុណភាពនៃជីវិតរបស់អ្នកជំងឺ។ ថ្នាំ anxiolytic មួយដែលគ្មានផលប៉ះពាល់ទាំងនេះគឺថ្នាំ afobazole ។ ខាងលើបញ្ជាក់ពីតម្រូវការក្នុងការស្វែងរកថ្នាំដែលមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់ផ្សេងទៀតដែលមិនមានប្រតិកម្មមិនល្អនៃ benzodiazepines ។ វិទ្យាសាស្រ្តយកចិត្តទុកដាក់យ៉ាងខ្លាំងចំពោះ peptides endogenous ។ រហូតមកដល់បច្ចុប្បន្ន តួនាទីដ៏សំខាន់នៃសារធាតុ endogenous neuropeptide cholecystokinin នៅក្នុងការបង្កើតជំងឺថប់បារម្ភត្រូវបានបង្កើតឡើង។ វាត្រូវបានគេដឹងថា cholecystokinin ដែលដើរតួលើអ្នកទទួល CCK-B ដែលមានទីតាំងនៅប្រព័ន្ធសរសៃប្រសាទកណ្តាលបង្ហាញពីសកម្មភាព anxiogenic - បណ្តាលឱ្យមានការវាយប្រហារភ័យស្លន់ស្លោមានអន្តរកម្មជាមួយប្រព័ន្ធអាភៀនហើយដូច្នេះអាចមានឥទ្ធិពលប្រឆាំងនឹងថ្នាំស្ពឹក។ វាក៏អាចធ្វើទៅបានផងដែរដែល cholecystokinin ដើរតួក្នុងការបង្ករោគនៃជំងឺធ្លាក់ទឹកចិត្តនិងជំងឺវិកលចរិក។

ដោយសារ neuropeptides endogenous មានស្ថេរភាព enzymatic ទាប ទទួលរងនូវ hydrolysis នៅក្នុងការរលាក gastrointestinal ហើយមានសកម្មភាពតែបន្ទាប់ពីការជ្រៀតចូលតាមរយៈ BBB វាមានតម្រូវការក្នុងការស្វែងរក anxiolytics សក្តានុពល (cholecystokinin receptor antagonists) ជាមួយនឹងរចនាសម្ព័ន្ធបង្រួមនិងការពារបន្ថែមទៀតដែលមាន។ មានប្រសិទ្ធភាពនៅពេលគ្រប់គ្រងជាប្រព័ន្ធ។

ផ្អែកលើសម្មតិកម្មដែលបង្កើតឡើងដោយ Gudasheva T.A. ត្រលប់ទៅឆ្នាំ 1985 អំពីលទ្ធភាពនៃការក្លែងធ្វើរចនាសម្ព័ន្ធនៃគំរូដែលមិនមែនជា peptide ជាមួយនឹងសកម្មភាព neurotropic ជាក់លាក់ក៏ដូចជាបំណែកសកម្មនៃ peptide ដើមជាមួយនឹងសកម្មភាពស្រដៀងគ្នាដែលជា dipeptide anxiolytic GB-115 (N-phenyl-N) ។ -hexanoyl-L-glycyl-L amide) ត្រូវបានសំយោគ -tryptophan) គឺជា retroanalog នៃ cholecystokinin-4 ។ សកម្មភាពឱសថសាស្ត្រនៃសមាសធាតុត្រូវបានបង្កើតឡើង៖ វាត្រូវបានគេពិសោធន៍ថា GB-115 បង្ហាញលក្ខណៈសម្បត្តិ anxiolytic, ប្រឆាំងនឹងជាតិអាល់កុល, ថ្នាំប្រឆាំងនឹងជំងឺធ្លាក់ទឹកចិត្ត និងលក្ខណៈសម្បត្តិថ្នាំស្ពឹក។ នៅពេលគ្រប់គ្រងដោយផ្ទាល់មាត់ GB-115 បង្ហាញពីសកម្មភាព anxiolytic អតិបរមារបស់វាក្នុងកម្រិត 0.1 mg/kg ។ ថ្នាំបញ្ឈប់ប្រតិកម្ម anxiogenic ដែលបណ្តាលមកពីការដកអេតាណុលក្នុងកម្រិត 0.2 mg/kg, p.o. សកម្មភាពថ្នាំស្ពឹកអតិបរមាត្រូវបានបង្ហាញក្នុងកម្រិត 10 mg/kg និងឥទ្ធិពលប្រឆាំងនឹងជំងឺធ្លាក់ទឹកចិត្តក្នុងកម្រិត 0.025-0.05 mg/kg, i.p.

ការអនុវត្តការសិក្សាពិសោធន៍ឱសថសាស្ត្រនៃឱសថគឺជាជំហានចាំបាច់សម្រាប់ការផ្សព្វផ្សាយបន្ថែមទៀតរបស់វាទៅក្នុងការអនុវត្តផ្នែកវេជ្ជសាស្រ្ត។ ការកែលម្អប៉ារ៉ាម៉ែត្រ pharmacokinetic អនុញ្ញាតឱ្យបង្កើតទម្រង់កិតើដ៏ប្រសើរមួយដែលនឹងត្រូវបានសម្គាល់ដោយកម្រិតសមស្រប និងអត្រានៃការស្រូបយក លក្ខណៈនៃការចែកចាយ និងផ្លូវនៃការរំលាយអាហារ និងការបញ្ចេញចោល។ ការវាយតម្លៃនៃភាពអាចរកបាននៃជីវសាស្ត្រដែលទាក់ទងអនុញ្ញាតឱ្យមនុស្សម្នាក់ធ្វើការជ្រើសរើសមួយនៅក្នុងការពេញចិត្តនៃទម្រង់ dosage ជាមួយនឹងប៉ារ៉ាម៉ែត្រ pharmacokinetic ល្អបំផុតសម្រាប់សមាសធាតុដែលកំពុងសិក្សា។

Pharmacokinetics គឺជាវិទ្យាសាស្ត្រទំនើប និងរីកចម្រើនយ៉ាងឆាប់រហ័ស ដែលសិក្សាពីលក្ខណៈនៃការជ្រៀតចូលថ្នាំចូលទៅក្នុងរាងកាយ ការចែកចាយ ការបំប្លែងជីវសាស្ត្រ និងការលុបបំបាត់។ ការសិក្សាអំពីដំណើរការទាំងនេះ រួមទាំងការវាយតម្លៃបរិមាណរបស់ពួកគេ គឺជាគោលដៅចម្បងនៃឱសថសាស្ត្រ។

ការសិក្សា Pharmacokinetic នៃសារធាតុសកម្មឱសថសាស្រ្តថ្មីនៅក្នុងការពិសោធន៍គឺជាដំណាក់កាលចាំបាច់ក្នុងការស្រាវជ្រាវ ការអភិវឌ្ឍន៍ និងការអនុវត្តពួកវាទៅក្នុងការអនុវត្តផ្នែកវេជ្ជសាស្ត្រ។ ប្រសិទ្ធភាពនៃថ្នាំដោយផ្ទាល់អាស្រ័យលើដំណើរការនៃការស្រូបយក ការចែកចាយ និងការបញ្ចេញថ្នាំពីរាងកាយ។

ទិន្នន័យ Pharmacokinetic ធ្វើឱ្យវាអាចធ្វើទៅបានដើម្បីកំណត់ផ្លូវនិងវិធីសាស្រ្តនៃការគ្រប់គ្រង, ទីតាំងនៃការជ្រៀតចូលនៃថ្នាំ, របបកិតើប្រហាក់ប្រហែល, ក៏ដូចជាផ្លូវសំខាន់នៃការលុបបំបាត់គ្រឿងញៀន។

ការស្រូប ការចែកចាយ ការរំលាយអាហារ និងការហូរចេញនៃសមាសធាតុឱសថ គឺជាដំណើរការដែលទាក់ទងគ្នាទៅវិញទៅមក។ ពួកវាទាំងអស់ត្រូវបានជះឥទ្ធិពលដោយកត្តាជាច្រើន៖ អត្រានៃការស្រូបចូលអាស្រ័យលើទម្រង់កិតើថ្នាំ កំហាប់សារធាតុសកម្ម pH របស់ឧបករណ៍ផ្ទុកដែលសារធាតុត្រូវបានរំលាយ ចលនាពោះវៀន និងស្ថានភាពនៃផ្ទៃស្រូបយក។ តំបន់។ សូចនាករនៃការចែកចាយ និងការផ្លាស់ប្តូរជីវសាស្រ្តនៃឱសថត្រូវបានជះឥទ្ធិពលដោយយេនឌ័រ អាយុ ស្ថានភាព somatic នៃរាងកាយរបស់អ្នកជំងឺ ក៏ដូចជាស្ថានភាពនៃប្រព័ន្ធ enzymatic របស់រាងកាយ ដែលជារឿយៗកើតឡើងដោយសារភាពខុសគ្នារបស់បុគ្គល។ ដូច្នេះអត្រានៃការរំលាយអាហារនៃថ្នាំ psychotropic មួយចំនួនអាចប្រែប្រួលពី 6 ទៅ 30 ម៉ោងចំពោះអ្នកជំងឺផ្សេងៗគ្នា។ ការដកសារធាតុមេតាបូលីតចេញពីរាងកាយអាចរងផលប៉ះពាល់ដោយជំងឺផ្សំគ្នា ក៏ដូចជាឥទ្ធិពលនៃថ្នាំដទៃទៀត។

ដើម្បីវាយតម្លៃដំណើរការ pharmacokinetic ផ្សេងៗនៃឱសថនៅក្នុងរាងកាយរបស់សត្វ និងមនុស្ស ប៉ារ៉ាម៉ែត្រ pharmacokinetic ដែលត្រូវគ្នាត្រូវបានគណនា រួមទាំង bioavailability (F, %) - ផ្នែកនៃកម្រិតថ្នាំដែលឈានដល់ចរន្តឈាមជាប្រព័ន្ធបន្ទាប់ពីការគ្រប់គ្រង extravascular របស់វា។

វាជាការសំខាន់ក្នុងការកត់សម្គាល់លក្ខខណ្ឌសម្រាប់ការធ្វើពិសោធន៍ pharmacokinetic នៅក្នុងការសាកល្បង preclinical នៃសមាសធាតុសកម្ម pharmacological ថ្មី។

ភ្នាក់ងារឱសថសាស្ត្រដែលបានសិក្សាត្រូវបានចាត់ទុកថាជាវត្ថុនៃការស្រាវជ្រាវ ដែលក្នុងការអនុវត្តជាក់ស្តែងត្រូវបានអនុវត្តលើសត្វដែលមានសុខភាពល្អ៖ កណ្តុរ កណ្ដុរ ទន្សាយ ឆ្កែ ស្វា និងផ្សេងៗទៀត ដែលទម្ងន់មិនគួរខុសគ្នាពីស្តង់ដារសម្រាប់ប្រភេទនីមួយៗដោយ ច្រើនជាង 10% ។

ប្រភេទសំខាន់នៃសម្ភារៈជីវសាស្រ្តគឺប្លាស្មា សេរ៉ូមឈាម ឈាមទាំងមូល សរីរាង្គ និងជាលិកាផ្សេងៗ ទឹកនោម លាមក។

ផ្លូវនៃការគ្រប់គ្រងត្រូវបានកំណត់ដោយទម្រង់នៃថ្នាំដែលត្រូវបានណែនាំនៅលើមូលដ្ឋាននៃការសិក្សា pharmacokinetic សម្រាប់ការសិក្សាផ្នែកឱសថសាស្ត្របន្ថែមទៀត។ វិធីសាស្រ្តនៃការគ្រប់គ្រងអាចមានភាពខុសប្លែកគ្នា៖ ចាក់តាមសរសៃឈាម, ពោះវៀនធំ, ចាក់តាមសាច់ដុំ, ក្រោមស្បែក, មាត់។ល។ ថ្នាំនេះត្រូវបានគ្រប់គ្រងដោយផ្ទាល់មាត់ដល់សត្វដោយប្រើបំពង់ pharyngeal ឬ duodenal នៅលើពោះទទេដើម្បីជៀសវាងអន្តរកម្មនៃថ្នាំជាមួយអាហារ។

ការគ្រប់គ្រងអាចត្រូវបានធ្វើម្តងទៀតឬតែមួយ។ ជាមួយនឹងការគ្រប់គ្រងតែមួយ ចាំបាច់ត្រូវសិក្សាពី pharmacokinetics នៃសារធាតុសកម្មដោយប្រើកម្រិតដូសយ៉ាងតិចបី។ នេះគឺចាំបាច់ដើម្បីផ្ទៀងផ្ទាត់លីនេអ៊ែរនៃ pharmacokinetics ។

រយៈពេលនៃការពិសោធន៍គួរតែត្រូវគ្នាទៅនឹងពេលវេលាមួយ 5 ដងយូរជាងពាក់កណ្តាលជីវិត។

ចំនួនសត្វក្នុងមួយចំណុច (តម្លៃកំហាប់ដែលត្រូវគ្នា) ត្រូវតែមានយ៉ាងហោចណាស់ 5 ប្រសិនបើមានតែគំរូមួយប៉ុណ្ណោះត្រូវបានយកចេញពីសត្វនីមួយៗពីគំរូ (នៅក្នុងការពិសោធន៍លើសត្វកណ្តុរនៅក្នុងករណីនៃការកាត់ក្បាល៖ សត្វមួយ - ចំណុចមួយ) ។

ដំណាក់កាលសំខាន់មួយនៃការសិក្សា pharmacokinetic និង biopharmaceutical នៃសមាសធាតុសកម្ម pharmacological ថ្មីគឺការសិក្សាអំពីភាពអាចប្រើប្រាស់បាននៃជីវសាស្ត្រដាច់ខាត និងទាក់ទងរបស់វា (សូមមើលផ្នែក "Bioavailability of Drugs")។

• វិធីសាស្រ្តវិភាគសម្រាប់ការកំណត់ peptides និងនិស្សន្ទវត្ថុរបស់វា។

មានវិធីសាស្រ្តជាច្រើនសម្រាប់ការកំណត់គុណភាព និងបរិមាណនៃអាស៊ីតអាមីណូ ភីបទីត និងនិស្សន្ទវត្ថុរបស់វា។ ហើយវាចាំបាច់ក្នុងការជ្រើសរើសដោយសមហេតុផលនូវវិធីសាស្រ្តដ៏ល្អប្រសើរសម្រាប់ការវិភាគថ្នាំដែលមានសក្តានុពលជាមួយនឹងរចនាសម្ព័ន្ធ peptide ។ នេះនឹងអនុញ្ញាតឱ្យយើងសម្រេចបាននូវការវិភាគរសើប និងទទួលបានលទ្ធផលត្រឹមត្រូវ និងអាចផលិតឡើងវិញបាន ដែលនឹងបង្ហាញពីឱសថសាស្ត្រនៃសមាសធាតុជាក់លាក់មួយ។

ចំណាត់ថ្នាក់៖

• វិធីសាស្ត្រក្រូម៉ាតូក្រាមរាវ៖

ស្រទាប់គ្រីស្តាល់រាវ

ប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់នៃក្រូម៉ាតូក្រាមរាវ

• ជីវឧស្ម័ន
• វិធីសាស្រ្តនៃការវិភាគ Immunochemical
• Capillary electrophoresis

1.2 Chromatography នៃអាស៊ីតអាមីណូ និង peptides

Chromatography គឺជាវិធីសាស្ត្ររូបវិទ្យាសម្រាប់បំបែកសមាសធាតុនៃល្បាយដែលបានវិភាគ ដោយផ្អែកលើភាពខុសគ្នានៃមេគុណនៃការចែកចាយរបស់ពួកគេរវាងដំណាក់កាលពីរ៖ ស្ថានី និងចល័ត។ វិធីសាស្រ្ត chromatography ដ៏ជោគជ័យបំផុតគឺ៖ gas chromatography (GC) និង high-performance liquid chromatography (HPLC) រួមជាមួយនឹងឧបករណ៍ចាប់ spectrometric - GC-MS និង HPLC-MS ។ វិធីសាស្រ្តទាំងនេះកំពុងអភិវឌ្ឍក្នុងល្បឿនយ៉ាងលឿន ដែលត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការរីកចម្រើននៃភារកិច្ចដែលបានកើតឡើងក្នុងប៉ុន្មានឆ្នាំថ្មីៗនេះ៖ ប្រូតេអូម មេតាបូឡូមីក ការវិភាគជីវឥន្ធនៈ ការកំណត់ជីវគីមីនៃជំងឺ ការបង្កើត និងការត្រួតពិនិត្យគុណភាពឱសថ ការគ្រប់គ្រងគុណភាព និងសុវត្ថិភាពចំណីអាហារ។ ក៏ដូចជាអំពើភេរវកម្ម (ការកំណត់សារធាតុពុល សារធាតុគ្រោះថ្នាក់ និងអ្នកប្រយុទ្ធ) និងការប្តេជ្ញាចិត្តយ៉ាងឆាប់រហ័សនៃផលវិបាកនៃស្ថានភាពអាសន្ន។

1.2.1 វិធីសាស្ត្រក្រូម៉ាតូក្រាមរាវ

១.២.១.១. ប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់នៃក្រូម៉ាតូក្រាមរាវ

HPLC គឺជាវិធីសាស្រ្ដរូបវិទ្យាសម្រាប់បំបែកសមាសធាតុនៃល្បាយនៃសារធាតុ ដោយផ្អែកលើការចែកចាយខុសគ្នារវាងដំណាក់កាលពីរដែលមិនស៊ីគ្នា ដែលមួយគឺចល័ត និងមួយទៀតមិនចល័ត។ អាស្រ័យលើបន្ទាត់រាងប៉ូលនៃដំណាក់កាលចល័ត និងស្ថានី HPLC ជាធម្មតាត្រូវបានបែងចែកទៅជាដំណាក់កាលធម្មតា (ដំណាក់កាលស្ថានីគឺប៉ូលជាងចល័ត) និងដំណាក់កាលបញ្ច្រាស (ដំណាក់កាលស្ថានីគឺប៉ូលតិចជាងទូរសព្ទ)។

HPLC ដំណាក់កាលបញ្ច្រាសត្រូវបានគេប្រើជាញឹកញាប់ដើម្បីបំបែកអាស៊ីដអាមីណូ និង peptides ដោយសារតែការពិតដែលថាការវិភាគភាគច្រើនគឺអាចរលាយបានខ្ពស់នៅក្នុងដំណាក់កាលចល័ត aqueous និងមានភាពរលាយមានកម្រិតនៅក្នុងសារធាតុរំលាយដែលមិនមែនជាប៉ូលភាគច្រើន។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ HPLC ដំណាក់កាលធម្មតាត្រូវបានប្រើសម្រាប់ chromatography នៃនិស្សន្ទវត្ថុអាស៊ីតអាមីណូខ្សែសង្វាក់ខ្លី និង peptides ជាមួយនឹង hydrophobicity ទាប ដែលមិនត្រូវបានរក្សាទុកដោយដំណាក់កាលស្ថានីនៅក្នុង HPLC ដំណាក់កាលបញ្ច្រាស។ ដំណាក់កាលបញ្ច្រាស HPLC គឺជាស្តង់ដារមាសសម្រាប់ការបំបែក peptide និងការបន្សុតមុនពេលអនុវត្តម៉ាស់នៅក្នុងវាលនេះ។ RP-HPLC មានគុណសម្បត្តិដូចខាងក្រោមលើវិធីសាស្រ្តផ្សេងទៀតនៃការវិភាគក្រូម៉ូសូម៖ ការផលិតឡើងវិញនៃលទ្ធផល ថាមពលបំបែកខ្ពស់ ការជ្រើសរើស (សមត្ថភាពក្នុងការបែងចែក peptides ជាមួយនឹងភាពខុសគ្នានៃអាស៊ីតអាមីណូមួយ) ភាពប្រែប្រួល ល្បឿនលឿននៃការប្រតិបត្តិ និងការប្រើប្រាស់ បរិមាណតិចតួចនៃសារធាតុរំលាយងាយនឹងបង្កជាហេតុ។

ការជ្រើសរើស និងគុណភាពនៃការវិភាគ peptide នៅក្នុង HPLC ដំណាក់កាលបញ្ច្រាសគឺអាស្រ័យលើជម្រើសត្រឹមត្រូវនៃដំណាក់កាល៖ ចល័ត និងស្ថានី។

ជាដំណាក់កាលស្ថានី សារធាតុ adsorbents ត្រូវបានប្រើ ដែលជាសារធាតុស៊ីលីកាជែលដែលត្រូវបានកែប្រែជាមួយនឹងនិស្សន្ទវត្ថុ chlorosilane ផ្សេងៗ។ ដំណាក់កាលនេះមានកម្លាំងខ្ពស់និងភាពព្រងើយកន្តើយចំពោះសារធាតុរំលាយសរីរាង្គ។ ដំណាក់កាលបញ្ច្រាសត្រូវបានសម្គាល់ដោយលក្ខណៈនៃម៉ាទ្រីស - ស៊ីលីកាជែលនិងរចនាសម្ព័ន្ធនៃរ៉ាឌីកាល់ដែលត្រូវបានផ្សាំដែលខុសគ្នានៅក្នុងសមាសភាពនិងរចនាសម្ព័ន្ធនៃបំណែកកាបូន។ នៅពេល chromatography នៃ peptides ជម្រើសនៃដំណាក់កាលបញ្ច្រាសត្រូវបានកំណត់ដោយទំហំនិង hydrophobicity នៃ peptides: សម្រាប់ peptides ដែលមានខ្សែសង្វាក់ខ្លី hydrophilic peptides ដំណាក់កាល C8 (n-octyl) និង C18 (n-octadecyl) ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ទំហំធំ។ និង hydrophobic - ដំណាក់កាល C3 (trimethyl- ឬ dimethylpropyl), C4 (n-butyl), C6 (phenyl) ។

ដើម្បីជ្រើសរើសដំណាក់កាលចល័តបានត្រឹមត្រូវ ចាំបាច់ត្រូវគិតពី pH សមាសភាព និងកំហាប់នៃសារធាតុរំលាយសរីរាង្គ៖

ដើម្បីកាត់បន្ថយភាពប៉ូលនៃ peptides និងធានាបាននូវការរក្សាបានល្អប្រសើរដោយ adsorbent pH នៃ eluent គួរតែស្ថិតនៅក្នុងចន្លោះពី 2-3 ។ ផងដែរ ដើម្បីបង្កើនពេលវេលារក្សាទុក peptides អ្វីដែលគេហៅថា modifiers ឬ ion-pair reagents (counterions) ដែលមានសមត្ថភាពបង្កើត ion-pair ជាមួយនឹងក្រុម peptide ដែលត្រូវបានចោទប្រកាន់ជាវិជ្ជមាន ត្រូវបានណែនាំទៅក្នុងដំណាក់កាលចល័ត។ ឧបករណ៍កែប្រែអ៊ីយ៉ុងសំខាន់នៅក្នុង RP HPLC គឺអាស៊ីត trifluoroacetic ។ វាត្រូវបានយកចេញបានយ៉ាងងាយស្រួលពី eluates ដោយការហួត រំលាយ peptides បានយ៉ាងល្អ ហើយមានតម្លាភាពកាំរស្មី UV នៅក្នុងតំបន់រលកខ្លី ដែលមិនបង្កើតកំពូលបន្ថែមទៀតក្នុងអំឡុងពេលរាវរក។ អាស៊ីត Formic ក៏ត្រូវបានគេប្រើជាអ្នកកែប្រែ និងផ្តល់នូវការបំបែកដ៏ល្អ ប៉ុន្តែការប្រើប្រាស់របស់វាត្រូវបានកំណត់ដោយការស្រូបយកខ្លាំងនៅក្នុងតំបន់ UV ។

ឥទ្ធិពលនៃសារធាតុរំលាយសរីរាង្គលើសមត្ថភាព elution នៃដំណាក់កាលចល័តគឺមានទំហំធំណាស់។ ដូច្នេះភាពខ្លាំងនៃសារធាតុរំលាយកើនឡើងតាមលំដាប់លំដោយ៖ ទឹក - មេតាណុល - អាសេតូនីទ្រីល - អេតាណុល - ឌីអុកស៊ីត - តេត្រាអ៊ីដ្រូហ្វូរ៉ាន - 2-ប្រូប៉ូណុល - 1-ប្រូផូណុល។ លំដាប់នេះគឺដោយសារតែការថយចុះនៃប៉ូលនៃសារធាតុសរីរាង្គនៅក្នុងស៊េរីនេះ។ Acetonitrile ត្រូវបានគេប្រើញឹកញាប់បំផុតជាសមាសធាតុសរីរាង្គនៃដំណាក់កាលចល័ត ដោយសារវាមានតម្លាភាពនៅក្នុងតំបន់កាំរស្មី UV រហូតដល់ 200 nm មាន viscosity ទាប ងាយនឹងបង្កជាហេតុដែលអនុញ្ញាតឱ្យប្រសិនបើចាំបាច់ដើម្បីងាយស្រួលយកវាចេញពី eluate ដែលប្រមូលបានយ៉ាងងាយស្រួល។ ប្រភាគ និងត្រូវបានកំណត់លក្ខណៈដោយការជ្រើសរើសដ៏ល្អ។

ការបំបែកសមាសធាតុ peptide អាចត្រូវបានអនុវត្តក្រោមលក្ខខណ្ឌ isocratic ដែលកំហាប់នៃសារធាតុរំលាយសរីរាង្គគឺថេរ ឬដោយការពន្លូតជម្រាល ក្នុងករណីដែលកំហាប់សារធាតុរំលាយសរីរាង្គកើនឡើងតាមពេលវេលា។ សារធាតុសាកល្បងបានបន្លឺឡើងតាមលំដាប់នៃការកើនឡើង hydrophobicity ។

១.២.១.២. វិធីសាស្រ្តក្នុងការរកឃើញ peptides នៅក្នុង chromatography រាវដែលមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់: ការរកឃើញកាំរស្មី UV, វិសាលគមដ៏ធំ។

ដើម្បីអនុវត្តការវិភាគប្រកបដោយគុណភាព និងបរិមាណបានត្រឹមត្រូវបន្ទាប់ពីការបំបែកសារធាតុឱសថដោយ HPLC វាចាំបាច់ត្រូវប្រើឧបករណ៍សម្រាប់ការរកឃើញរបស់ពួកគេ ដែលនៅក្នុងវេនមានតម្រូវការដូចខាងក្រោមៈ ឧបករណ៍រាវរកត្រូវតែមានភាពប្រែប្រួលខ្ពស់ (សញ្ញាល្អ គ្មានសំលេងរំខាន) ល្បឿន។ ជួរថាមវន្តលីនេអ៊ែរធំទូលាយ ស្ថេរភាព កង្វះអន្តរកម្មជាមួយដំណាក់កាលចល័ត។

វិធីសាស្រ្តរាវរកទូទៅបំផុតមួយនៅក្នុង chromatography រាវដែលមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់គឺ ultraviolet ដែលត្រូវបានពន្យល់ដោយភាពប្រែប្រួលខ្ពស់នៃការវិភាគ ភាពសាមញ្ញ និងតម្លៃសមរម្យតាមទស្សនៈសេដ្ឋកិច្ច។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការរកឃើញកាំរស្មីយូវីគឺជាវិធីសាស្ត្ររសើបតិចជាងការវាស់ស្ទង់ម៉ាស់។ ឧបករណ៍ចាប់កាំរស្មី UV ត្រូវបានតំណាងដោយបួនប្រភេទសំខាន់ៗនាពេលបច្ចុប្បន្ននេះ:

• ជាមួយនឹងប្រវែងរលកថេរ;
• ជាមួយ monochromator ដែលអនុញ្ញាតឱ្យអ្នកផ្លាស់ប្តូរប្រវែងរលកក្នុងជួររបស់វា;
• ជាមួយ monochromator ដែលអាចលៃតម្រូវបានដោយស្វ័យប្រវត្តិដែលអនុញ្ញាតឱ្យរកឃើញរលកច្រើន, ពហុឆានែល;
• ឧបករណ៍រាវរក diode-matrix ដែលអនុញ្ញាតឱ្យទទួលបានព័ត៌មានពេញលេញនៅក្នុងជួរដែលបានផ្តល់ឱ្យ។

ដោយសារតែវត្តមានរបស់ chromophores មួយចំនួននៅក្នុងសមាសធាតុនៃអាស៊ីតអាមីណូ ក៏ដូចជាចំណង peptide ខ្លួនវា វាអាចរកឃើញសមាសធាតុ peptide ដោយប្រើកាំរស្មី UV ដោយប្រើឧបករណ៍មួយក្នុងចំណោមឧបករណ៍ទាំងបួនដែលបានរាយខាងលើ។

សមាសធាតុ Peptide មានសមត្ថភាពស្រូបយកកាំរស្មីយូវីក្នុងបីផ្នែក៖

លើសពី 250 nm (λ=280 nm) ដែលបណ្តាលមកពីវត្តមានអាស៊ីតអាមីណូក្រអូបនៅក្នុងសមាសធាតុដែលបានវិភាគ - tryptophan (λ=278 nm), tyrosine (λ=275 nm) និង phenylalanine ។

នៅ 210-250 nm សញ្ញាបែបនេះអាចត្រូវបានផ្តល់ឱ្យដោយអាស៊ីតអាមីណូផ្សេងទៀតដែលមានចំណងអ៊ីដ្រូសែនខាងក្នុងនិងអន្តរម៉ូលេគុលនៅក្នុងម៉ូលេគុលប្រូតេអ៊ីន។

នៅ 190 nm ដែលត្រូវបានពន្យល់ដោយវត្តមាននៃចំណង peptide ។

ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការរកឃើញសមាសធាតុដែលកំពុងសិក្សាមិនត្រូវបានអនុវត្តនៅចម្ងាយរលកក្រោម 210 nm ដោយសារតែឥទ្ធិពលនៃសារធាតុរំលាយដែលប្រើក្នុង HPLC ដែលមានការស្រូបចូលដោយខ្លួនឯងនៅរលកចម្ងាយខ្លីជាង 210 nm ក៏ដូចជាដោយសារតែវត្តមានរបស់សារធាតុមិនបរិសុទ្ធ។ ដូច្នេះនៅពេលរកឃើញសារធាតុ peptide ជួររលកលើសពី 250 nm ត្រូវបានគេប្រើជាញឹកញាប់។ ប្រសិនបើសមាសធាតុមិនមាន chromophores ដែលនឹងស្រូបវិទ្យុសកម្មកាំរស្មីយូវីនៅក្នុងតំបន់នេះ នោះពួកវាងាកទៅរកវិធីសាស្រ្តដេរីវេទី

Derivatization គឺជាការកែប្រែគីមីនៃ analyte ដើម្បីបង្កើតសមាសធាតុដេរីវេដែលធ្វើអោយលក្ខណៈសម្បត្តិវិភាគប្រសើរឡើង។ នៅពេលធ្វើការជាមួយ HPLC-UV តាមរយៈការដេរីវេតកម្ម វាចាំបាច់ក្នុងការទទួលបានសមាសធាតុដែលត្រូវបានចុះបញ្ជីនៅក្នុងវិសាលគមកាំរស្មីយូវីនៅក្នុងតំបន់ដែលងាយស្រួលសម្រាប់ការវិភាគសម្ភារៈជីវសាស្រ្ត។ ដូច្នេះនៅក្នុងការងាររបស់ Rudenko A.O. នៅពេលកំណត់អាស៊ីតអាមីណូដ៏សំខាន់បំផុតនៅក្នុងម៉ាទ្រីសជីវសាស្ត្រស្មុគស្មាញ វិធីសាស្រ្តនៃការបង្កើតដេរីវេនៃអាស៊ីតអាមីណូចំនួន 16 ត្រូវបានគេប្រើ។ O-phthalaldehyde ត្រូវបានគេប្រើជាភ្នាក់ងារចម្លង។

វិធីសាស្រ្តរាវរកម៉ាស់ spectrometric មានបីដំណាក់កាល៖ ionization ការបំបែកម៉ាស់ទៅបន្ទុក និងការរកឃើញជាបន្តបន្ទាប់ដោយប្រើឧបករណ៍វិភាគម៉ាស់។ សម្រាប់ការវិភាគនៃសមាសធាតុឱសថ បច្ចេកទេសអ៊ីយ៉ូដ "ទន់" ត្រូវបានប្រើ៖ អ៊ីយ៉ូដអេឡិចត្រុស ក៏ដូចជាម៉ាទ្រីសដែលជួយកម្ចាត់សារធាតុឡាស៊ែរ (MALDI)។ វិធីសាស្រ្តទាំងនេះតំណាងឱ្យរបៀប ionization ទន់ភ្លន់ ដែលមានសារៈសំខាន់ជាពិសេសសម្រាប់ជីវម៉ូលេគុលមិនស្ថិតស្ថេរដោយកម្ដៅ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ប្រភេទនៃអ៊ីយ៉ូដទាំងនេះមិនមានព័ត៌មានគ្រប់គ្រាន់ទេ ដូច្នេះពួកគេច្រើនតែងាកទៅរក MS/MS ដែលជាវិធីសាស្រ្តសម្រាប់កត់ត្រាបំណែកនៃការវិភាគ។ ដើម្បីឱ្យកាន់តែច្បាស់លាស់ វិធីសាស្រ្តនេះមានដំណាក់កាលជាច្រើន៖ ដំបូង សមាសធាតុដែលបានវិភាគត្រូវបានអ៊ីយ៉ូដទន់ ឆ្លងកាត់ឧបករណ៍វិភាគដំបូង បន្ទាប់មកថាមពលរបស់វាត្រូវបានកើនឡើង ដោយសារម៉ូលេគុលដែលកំពុងសិក្សាត្រូវបានបំបែក ហើយអ្នកវិភាគទីពីរកត់ត្រាម៉ាស់លទ្ធផល។ វិសាលគម។

សម្រាប់ការកំណត់បរិមាណនៃសមាសធាតុឱសថថ្មី ប្រភេទឧបករណ៍វិភាគម៉ាស់ខាងក្រោមត្រូវបានប្រើប្រាស់៖

Quadrupole (អ្នកវិភាគម៉ាស់ផ្អែកលើ quadrupoles បី) ដែលជា "ស្តង់ដារមាស" នៅក្នុងការសិក្សាអំពីសមាសធាតុឱសថថ្មី;

Time-of-flight (TOF) នៅពេលប្រើ សម្រេចបាននូវភាពប្រែប្រួលទាបជាងពេលប្រើឧបករណ៍វិភាគ quadrupole បីដង។

Ion cyclotron resonance និង orbital ion trap ដែលជាឧបករណ៍វិភាគម៉ាស់ដែលមានគុណភាពបង្ហាញខ្ពស់ ហើយរហូតមកដល់ពេលនេះកម្រត្រូវបានប្រើប្រាស់ដោយសារតែការចំណាយខ្ពស់ និងភាពស្មុគស្មាញនៃឧបករណ៍បែបនេះ។

ការប្រើប្រាស់ការរកឃើញវិសាលគមធំនៅក្នុងការរួមបញ្ចូលគ្នាជាមួយ HPLC បានធ្វើឱ្យវាអាចធ្វើទៅបានដើម្បីសម្រេចបាននូវអត្រាខ្ពស់នៃការវិភាគ បង្កើនដែនកំណត់នៃការរកឃើញនៃសមាសធាតុថ្នាំ និងធ្វើអោយប្រសើរឡើងយ៉ាងខ្លាំងនូវស្ថេរភាព និងភាពត្រឹមត្រូវនៃការសិក្សា។

• ក្រូម៉ាតូក្រាមស្រទាប់ស្តើង

សព្វថ្ងៃនេះ TLC ត្រូវបានប្រើក្នុងកម្រិតតិចជាងមុន ដោយសារវិធីសាស្ត្របច្ចេកវិជ្ជាខ្ពស់នៃការបំបែក peptide មានដូចជា HPLC, liquid column chromatography, ion exchange chromatography, protein polyacrylamide gel electrophoresis និង capillary electrophoresis ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ TLC បានបង្ហាញថាជាវិធីសាស្រ្តបរិមាណ បច្ចេកវិទ្យាខ្ពស់ តម្លៃថោកសមរម្យ និងងាយស្រួលផលិតឡើងវិញនៅក្នុងពេលវេលារបស់វា។ chromatography ស្រទាប់ស្តើងគឺមានប្រជាប្រិយភាពនៅក្នុងទសវត្សរ៍ទី 80 - អាស៊ីតអាមីណូត្រូវបានញែកចេញពីរុក្ខជាតិ សត្វ និងវត្ថុរាវជីវសាស្រ្តផ្សេងៗ។