MZRF

DVSMU

Institut for Almen, Fysisk og Kolloid Kemi

Historie

Tyndtlagskromatografi. Ansøgning i apotek

Udført af: studerende fra gruppe 201-F

Danilov D. I.

Tjekket af: Nemov V. A.

Khabarovsk, 2005

PLAN:

Introduktion

Fysisk-kemisk grundlag for TLC

Fordelingskromatografi på papir

Grundlæggende om tyndtlagskromatografi

• sorbenter
• opløsningsmidler
• plade forberedelse
• teknik til at anvende testløsninger

Kromatografi

Tørring af pladerne.

Identifikation af udskilte stoffer

Anvendelse af TLC-metoden i farmaci

• Kvantitativ bestemmelse af triterpen saponiner ved HPTLC ved brug af scanning densitometri
• Undersøgelse af lipid- og flavonoidsammensætningen af ​​prøver af nogle arter af slægten Chin (Lathyrus.)

Konklusion

Litteratur

Introduktion

Tyndtlagskromatografi (TLC, TLC) er en af ​​de mest anvendte metoder til kromatografisk analyse, men den mindst populære.
På trods af de betydelige mangler, der eksisterede indtil for nylig, bruges det i vid udstrækning til kvalitativ analyse af blandinger, hovedsagelig på grund af dets lave omkostninger og hastigheden til at opnå resultater. Tyndtlagskromatografi (TLC) blev oprindeligt udviklet til adskillelse af lipider. Selvom papirkromatografi er hurtigere end søjlekromatografi, er dens ulempe, at papir kun kan fremstilles af cellulosebaserede materialer, hvilket gør det uegnet til adskillelse af ikke-polære stoffer. Tyndtlagskromatografi bevarer alle fordelene ved papirkromatografi, men tillader brugen af ​​ethvert materiale, der kan finmales og derefter danne et homogent lag. Det kan være uorganiske stoffer som silicagel, aluminiumoxid, diatoméjord og magnesiumsilikat samt organiske stoffer som cellulose, polyamider og polyethylenpulver.

Fysisk-kemiske grundlag for tyndtlagskromatografi.

Grundlaget for tyndtlagskromatografi er adsorptionsmetoden, selvom der også anvendes partitionskromatografi.
Adsorptionsmetoden er baseret på forskellen i graden af ​​sorption-desorption af de adskilte komponenter på den stationære fase. Adsorption udføres på grund af van der Wals-kræfter, som er grundlaget for fysisk adsorption, polymolekylær (dannelse af flere lag adsorbat på overfladen af ​​adsorbenten) og kemisorption (kemisk interaktion mellem adsorbenten og adsorbatet).
Effektive sorption-desorptionsprocesser kræver et stort areal, hvilket stiller visse krav til adsorbenten. Med en stor faseadskillelsesflade etableres der hurtigt ligevægt mellem faserne af blandingskomponenterne, og der sker en effektiv adskillelse.
En anden type, der anvendes i tyndtlagskromatografimetoden, er partitionsvæskekromatografi.
Ved partitionskromatografi er begge faser - mobile og stationære - væsker, der ikke blandes med hinanden. Adskillelsen af ​​stoffer er baseret på forskellen i deres fordelingskoefficienter mellem disse faser.
For første gang annoncerede tyndlagskromatografimetoden sig selv som "Papirtyndtlagskromatografi", som var baseret på distributionsmetoden for komponentadskillelse.

Fordelingskromatografi på papir.

På grund af det faktum, at det kromatografiske papir, der anvendes i denne metode (specielle kvaliteter af filterpapir), indeholder vand (20-22%) i porerne, anvendes organiske opløsningsmidler som en anden fase.
Anvendelsen af ​​kromatografi på papir har en række væsentlige ulemper: separationsprocessens afhængighed af papirets sammensætning og egenskaber, ændringer i vandindholdet i papirets porer, når opbevaringsbetingelserne ændres, en meget lav kromatografihastighed ( op til flere dage) og lav reproducerbarhed af resultater. Disse mangler påvirker alvorligt udbredelsen af ​​papirkromatografi som en kromatografisk metode.
Derfor kan udseendet af kromatografi i et tyndt lag sorbent - tyndtlagskromatografi - betragtes som naturligt.

Grundlæggende om tyndtlagskromatografi.

I TLC-metoden sker kromatografi af stoffer i et tyndt lag sorbent aflejret på et fast fladt substrat. Adskillelsen i denne metode er hovedsageligt baseret på sorption-desorption.
Brugen af ​​forskellige sorbenter har gjort det muligt at udvide og forbedre denne metode betydeligt.
I starten af ​​metoden skulle pladerne laves selvstændigt. Men i dag bruges hovedsagelig fabriksfremstillede plader, som har en ret bred vifte af størrelser, medier og underlag.
En moderne kromatografiplade er lavet af glas, aluminium eller polymer (for eksempel polyterephthalat). På grund af det faktum, at glasbunden bliver mindre populær (den går ofte i stykker, det er umuligt at opdele pladen i flere dele uden at beskadige det sorberende lag, den er tung i vægt), er de mest udbredte plader dem, der bruger aluminiumsfolie eller polymerer som baser.
Til at fiksere sorbenten anvendes gips, stivelse, silicasol etc., som holder sorbentkornene på underlaget. Lagets tykkelse kan være forskellig (100 mikrometer eller mere), men det vigtigste kriterium er, at laget skal være ensartet i tykkelse overalt på den kromatografiske plade.

Sorbenter

Den mest almindelige sorbent er silicagel.
Silicagel er hydreret kiselsyre, dannet ved indvirkning af mineralsyrer på natriumsilicat og tørring af den resulterende sol. Efter formaling af solen bruges en brøkdel af en bestemt kornstørrelse (angivet på pladen, normalt 5-20 mikron).
Silicagel er en polær sorbent, hvor -OH-grupper fungerer som aktive centre. Det adsorberer let vand på overfladen og danner hydrogenbindinger.
Alumina. Aluminiumoxid er en svagt basisk adsorbent og bruges primært til adskillelse af svagt basiske og neutrale forbindelser. Ulempen ved aluminiumoxidplader er den obligatoriske aktivering af overfladen før brug i en ovn ved høje temperaturer (100-150 0 C) og lagets lave adsorptionskapacitet sammenlignet med silicagel.
Diatoméjord er en adsorbent opnået fra naturlige mineraler: diatoméjord. Sorbenten har hydrofile egenskaber, men en lavere adsorptionskapacitet af laget sammenlignet med silicagel.
Magnesiumsilikat er mindre polært end silicagel og bruges normalt i tilfælde, hvor mere polære adsorbenter ikke giver effektiv adskillelse.
Cellulose - Tyndtlagsplader belagt med cellulose er meget effektive til at adskille komplekse organiske molekyler. Adsorbenten består hovedsageligt af celluloseperler med en diameter på op til 50 mikron, fastgjort til en bærer med stivelse. Men som ved papirkromatografi sker stigningen af ​​opløsningsmiddelfronten meget langsomt.
I ionbytterkromatografiske plader anvendes ionbytterharpikser indeholdende kvaternære ammonium- eller aktive sulfogrupper involveret i ionbytning som adsorbent. Tyndtlagskromatografi med denne type plader udføres med mobile faser indeholdende stærke syrer eller alkalier. Disse plader er effektive til at adskille højmolekylære og amfotere forbindelser.

Ovenstående sorbenter er de mest almindelige, men udover disse er der mange stoffer, der anvendes som sorbenter. Disse er talkum, calciumsulfat, stivelse osv.
Samtidig kan selv de allerede nævnte sorbenter modificeres for at give dem nye sorptionsegenskaber (imprægnering af sorbenter med reagenser, for eksempel AgNO 3, skabelse af plader med omvendt fase). Det er denne række af mulige faser til minimale omkostninger, der gør det muligt at bruge TLC til kromatografi af et stort antal stoffer.

Opløsningsmidler

Ved tyndtlagskromatografi anvendes enten rene stoffer (ethylacetat, benzen osv.) eller blandinger af stoffer (systemer) i et vist forhold som den mobile fase.
Valget af den mobile fase (systemet) udføres i henhold til følgende regler:

· Vælg et system, hvor de adskilte komponenter har lav opløselighed (hvis stoffets opløselighed er høj, så vil stofferne bevæge sig med fronten, hvis opløseligheden er lav, forbliver de i starten). Ved partitionskromatografi eller ved anvendelse af omvendte faser skal opløseligheden af ​​stoffer være højere i den mobile fase end i den stationære fase.

· Systemets sammensætning skal være konstant og let reproducerbar.

· Opløsningsmidlet eller systemkomponenterne må ikke være giftige eller mangelfulde.

· Systemet skal fuldstændigt adskille stoffer med lignende struktur, og forskellene i Rf skal være mindst 0,05.

· Systemet må ikke forårsage kemiske ændringer i de adskilte komponenter.

· I det valgte system skal analytterne have forskellige Rf-værdier og være fordelt langs hele kromatogrammets længde. Det er ønskeligt, at Rf-værdierne ligger i intervallet 0,05-0,85.

· Ved valg af system er det også nødvendigt at tage hensyn til arten af ​​de udskilte stoffer. Ved kromatografi af stoffer med basiske egenskaber bør systemet således ikke have sure egenskaber og omvendt.

Forberedelse af plader

Ved brug af købte plader skal de først klargøres til kromatografi. Dette skyldes det faktum, at pladeadsorbenter under opbevaring absorberer ikke kun fugt, men også andre stoffer indeholdt i luften. Ved brug af uforberedte plader under kromatografiprocessen opstår der en "snavs"-front, som kan forstyrre bestemmelsen af ​​stoffer med store Rf-værdier, og nogle stoffer, såsom vand, kan ændre sammensætningen af ​​den mobile fase og derved ændre den opnåede Rf-værdier.
Forberedelse af pladerne består i at sprede pladerne med et rent opløsningsmiddel til hele pladens højde (methanol, benzen, diethylether), efterfulgt af tørring af pladen i en ovn ved en temperatur på 110-120 0C i 0,5-1 time. På denne måde kan flere plader tilberedes på én gang, og ved opbevaring på et tørt, forseglet sted bevare deres egenskaber i flere måneder.

Teknik til at anvende de undersøgte løsninger.

Som det viser sig, er påføring af teststoffet ikke så kompliceret en operation, men på samme tid påvirker det i høj grad de opnåede kromatografiresultater.
Ofte studeres enten flydende analytter eller opløsninger af faste stoffer uden nogen foreløbig prøveforberedelse.
Derfor er det altid nødvendigt at huske en række punkter, der alvorligt påvirker adskillelsesresultaterne.
Det vigtigste er koncentrationen af ​​de anvendte stoffer. Ved TLC er det sædvanligt at anvende opløsningskoncentrationer på ca. 1%. Men på den anden side giver metodens følsomhed, at man kan bestemme stoffer med meget lavere koncentrationer.
Hvis den samlede koncentration af komponenter i teststoffet er ukendt, eller koncentrationen er kendt, men denne type stof endnu ikke er kromatograferet, er det nødvendigt at bestemme, hvor meget af testopløsningen, der er tilstrækkelig til kromatografi af høj kvalitet. Der er flere teknikker til at bestemme dette.
Først skal du påføre flere pletter af de kromatograferede opløsninger, lige store, men med forskellige mængder (for eksempel 1, 2, 5 μl) og efter kromatografi studere formen og størrelsen af ​​de adskilte pletter.
Så med den rigtige koncentration er formen af ​​de adskilte stoffer den samme som formen på startlinjen. Hvis de adskilte pletter er større end startpletten, er den påførte koncentration for høj. Udseendet af "haler" og den uregelmæssige form af adskilte pletter på pladen kan også indikere en høj koncentration, men kan være forårsaget af et forkert valgt kromatografisystem eller af den kemiske interaktion mellem de adskilte komponenter.
Ved at vælge mængden af ​​påført stof og opløsningsmiddelsystemet er det muligt at opnå fuldstændig adskillelse af op til ti komponenter i de undersøgte stoffer på én plade. Det er praktisk at anvende prøver på et specielt bord med stencils og opvarmning. Pletterne påføres på "startlinjen" 1-2 cm fra underkanten af ​​pladen. Dette er nødvendigt, så når pladen sænkes ned i systemet, opløses prøverne ikke i det, og hele det påførte stof udsættes for kromatografi.
Påføring af opløsninger udføres enten med en mikrosprøjte eller med graduerede kapillærer. Størrelsen af ​​den påførte plet bør ikke overstige 4 mm. Dette skyldes det faktum, at der med en større pletstørrelse sker en formændring under påvirkning af fysiske kræfter, og grænserne for de adskilte komponenter kan overlappe hinanden.
Påføring af teststofferne på pladerne bør ikke ledsages af ødelæggelse af sorbenten (hvilket i høj grad påvirker separationskvaliteten), derfor bør dråben påføres ved at røre nålen eller kapillaren til sorbenten og ikke ved at trykke. Størrelsen af ​​den resulterende plet påvirkes ikke kun af mængden af ​​påført opløsning, men også af opløsningsmidlets polaritet og dets kogepunkt. Så når man anvender det samme stof i forskellige opløsningsmidler, vil den resulterende plet, hvor methanol blev brugt som opløsningsmiddel, være større end pletten fra en chloroformopløsning. på den anden side, når substratet opvarmes, vil fordampningen af ​​opløsningsmidler være mere intens, og pletstørrelsen vil også falde.
Selvfølgelig er det lettere at bruge en hårtørrer til at tørre pletter, når du påfører, men kun hvis der er fuld tillid til, at de påførte stoffer ikke vil oxidere under påvirkning af varm luft.
Afstanden mellem de påførte pletter skal være omkring 2 cm.
Nogle gange under kromatografi på plader observeres en kanteffekt, som et resultat af, at pletterne ikke er placeret på samme linje, men har form som en hestesko eller diagonalt. For at eliminere denne effekt kan hver plet "udstyres" med sit eget spor, der adskiller den påførte prøve fra de andre ved at fjerne sorbentslangen. Dette gøres bedst under en lineal med en skarp genstand (såsom en skalpel), men pas på ikke at fjerne for meget sorbent.
Efter påføring af teststofferne på pladen er det nødvendigt at sikre fuldstændig fjernelse af opløsningsmidler, da selv et lille opløsningsmiddelindhold i teststoffet kan påvirke adskillelsen og endda ændre sammensætningen af ​​det kromatografiske system.
Fjernelse af opløsningsmidler udføres normalt ved naturlig tørring af pladerne i 5-10 minutter eller ved opvarmning med hårtørrer eller i ovn.

Kromatografi

Tyndtlagskromatografi har flere metoder, hovedsageligt relateret til typen af ​​bevægelse af opløsningsmidler.

Stigende tyndtlagskromatografi

Faldende tyndtlagskromatografi

Vandret tyndtlagskromatografi

· Radial tyndtlagskromatografi.

Stigende tyndtlagskromatografi

Denne type kromatografi er den mest almindelige og er baseret på, at fronten af ​​det kromatografiske system hæver sig langs pladen under påvirkning af kapillærkræfter, dvs. fronten af ​​det kromatografiske system bevæger sig fra bund til top. Til denne metode bruges det enkleste udstyr, da enhver beholder med en flad bund og et tætsluttende låg, der frit kan passe til en kromatografisk plade, kan bruges som et kromatografisk kammer.
Metoden med stigende tyndtlagskromatografi har en række ulemper. For eksempel sker den hastighed, hvormed fronten stiger langs pladen, ujævnt, dvs. i den nederste del er den højest, og efterhånden som forsiden hæver sig aftager den. Dette skyldes det faktum, at mætningen af ​​opløsningsmiddeldampe i den øvre del af kammeret er mindre, så opløsningsmidlet fra den kromatografiske plade fordamper mere intenst, derfor falder dets koncentration, og bevægelseshastigheden sænkes. For at eliminere denne ulempe er strimler af filterpapir fastgjort til væggene i det kromatografiske kammer, langs hvilke det stigende kromatografiske system mætter kammeret med damp gennem hele dets volumen.
Nogle kromatografikamre er opdelt i to bakker i bunden. Denne forbedring gør det ikke kun muligt at reducere forbruget af kromatografsystemet (et mindre volumen er påkrævet for at opnå den nødvendige højde af kromatografsystemet), men også at bruge en ekstra kuvette til et opløsningsmiddel, der øger det mættede damptryk i kammeret.
En anden ulempe er behovet for at overvåge opløsningsmiddelfronten, da opløsningsmiddelfronten kan "løbe væk" til overkanten. I dette tilfælde er det ikke længere muligt at bestemme den faktiske værdi af Rf.

Faldende tyndtlagskromatografi

Denne kromatografimetode er baseret på, at fronten af ​​det kromatografiske system hovedsageligt går ned langs pladen under påvirkning af tyngdekraften, dvs. forsiden af ​​den mobile fase bevæger sig fra top til bund.
Til denne metode fastgøres en kuvette med et kromatografisk system til den øverste del af det kromatografiske kammer, hvorfra et opløsningsmiddel tilføres kromatografipladen ved hjælp af en væge, som flyder ned, og testprøven kromatograferes.
Ulemperne ved denne metode omfatter udstyrets kompleksitet. Denne metode bruges hovedsageligt i papirkromatografi.

Vandret tyndtlagskromatografi

Denne metode er den mest komplekse med hensyn til hardware, men den mest bekvemme. I det kromatografiske kammer placeres pladen således vandret, og systemet føres til den ene kant af pladen ved hjælp af en væge. Opløsningsmiddelfronten bevæger sig i den modsatte retning.
Der er endnu et trick, der giver dig mulighed for at forenkle kameraet ekstremt. For at gøre dette bøjes en kromatografisk plade på en aluminiumsbase let og placeres i kammeret. I dette tilfælde vil systemet modtage input fra begge sider samtidigt. Kun plader med aluminiumsbagside er egnede til dette formål, da plast- og glasbunden er "ubøjelig", dvs. bevarer ikke sin form.
Fordelene ved denne metode inkluderer det faktum, at i en vandret kuvette er systemet mættet med dampe meget hurtigere, frontens hastighed er konstant. Og når der udføres kromatografi på begge sider, "løber fronten ikke væk"

Radial tyndtlagskromatografi.

Radial tyndtlagskromatografi består i at påføre teststoffet på midten af ​​pladen og tilføje et system, der bevæger sig fra midten til kanten af ​​pladen.

Tørring af pladerne.

Efter processen med at adskille de undersøgte stoffer, tørres pladerne. Dette er også en vigtig proces, da selv hvis der er spor af opløsningsmiddel på pladen, er det muligt at opnå forkerte kromatografiske resultater.
Hvis det kromatografiske system kun indeholdt lavtkogende komponenter, er naturlig tørring i 3-5 minutter tilstrækkelig. Hvis anlægget indeholder højtkogende væsker (alkoholer, vand, organiske syrer osv.), skal pladerne tørres i mindst 10 minutter eller pladen skal placeres i et tørreskab.

Identifikation af udskilte stoffer.

Den tørrede plade er et kromatogram af de undersøgte stoffer. Hvis stofferne er farvede, begynder identifikationen med at bestemme farven på de adskilte stoffer.
Men i de fleste tilfælde er stofferne, der adskilles, farveløse, og simpel visuel sammenligning er umulig.
Til tyndtlagskromatografi er der flere typer kvalitativ analyse (identifikation) af adskilte stoffer:

· Visuelle metoder og bestemmelse af Rf for separerede stoffer.

· Farvereaktioner.

· Sammenligning med vidner.

· Fysisk-kemiske identifikationsmetoder.

Lad os se nærmere på hver type kvalitativ analyse i tyndtlagskromatografi.

Fysiske metoder

Visuelle metoder bruges hovedsageligt til at bestemme placeringen af ​​pletter af adskilte stoffer på en kromatografisk plade. For at gøre dette undersøges pladen både i synligt lys og ved hjælp af ultraviolet lys (hovedsageligt lys med en bølgelængde på 366 og 254 nm)
Dette er den første fase af identifikation, hvor kvaliteten af ​​de valgte betingelser og de opnåede kromatografiske resultater bestemmes.
Efter at have bestemt kvaliteten af ​​kromatografi (fraværet af "haler" af de adskilte stoffer eller overlapningen af ​​deres pletter, den korrekte form og størrelse, fraværet af sammensmeltning af kromatografiske spor osv.), og adskillelsen er blevet anerkendt som egnet til yderligere forskning, bestemmes Rf for de identificerede pletter.

Rf værdi.

En af hovedindikatorerne i TLC er Rf-indikatoren. Denne parameter er en analogi af retentionstid og afhænger både af egenskaberne af de stoffer, der separeres, sammensætningen af ​​den mobile fase og sorbenten og af fysiske parametre.
Rf-værdien bestemmes som forholdet mellem den afstand, stoffet passerer, og den afstand, som opløsningsmiddelfronten passerer

Rf-værdien er en dimensionsløs størrelse og har en værdi fra 0 til 1. I litteraturen findes dog ofte indikatorer som hRf, Rf×100, som er den samme Rf, men ganget med 100, for ikke at fungere med decimalværdier.
Værdien af ​​Rf påvirkes ikke af den tilbagelagte afstand af opløsningsmiddelfronten, men mange metoder beskriver passagen af ​​fronten i en afstand på 10 cm. Dette bruges kun til at lette Rf-beregninger.
I praksis bestemmes i begyndelsen afstanden, der passeres af opløsningsmiddelfronten: fra startlinjen (og ikke fra kanten af ​​pladen) til det sted, hvor fronten var ved slutningen af ​​kromatografi. Derefter bestemmes afstanden fra startlinjen til stedet for det separerede stof. Det er her pladsens størrelse spiller en rolle! Når alt kommer til alt, hvis pletten er rund i form og lille i størrelse, så har den resulterende Rf en klar værdi. Og hvis den resulterende plet er stor eller uregelmæssig i form, så når man bestemmer Rf for en sådan plet, kan fejlen nå 0,1!
I tilfælde af partitionskromatografi er fordelingskoefficienten for et stof og dets Rf relateret af relationen:

Hvor Sp Og Sн- tværsnitsarealer af den mobile og stationære fase.
Som vi ser, fordelingenskoefficienten, med et konstant forhold Sp/Sn er en størrelse proportionalt afhængig af Rf, og kan bestemmes gennem den.

Farvereaktioner.

Farvereaktioner i tyndtlagskromatografi anvendes ekstremt bredt. De tjener ikke kun til at bestemme placeringen af ​​adskilte komponenter (behandling med svovlsyre, joddamp), men også til at bestemme både klassen af ​​stoffer og identifikation (i nærværelse af individuelle reaktioner).
Vi vil ikke overveje dette enorme udvalg af farvekvalitative reaktioner her, vi vil kun sige, at hvis alle kvalitative reaktioner falder sammen, og de opnåede Rf-værdier for stoffet falder sammen i tre forskellige systemer med litteraturdata, identificeres stoffet. Selvom der efter min mening er behov for yderligere bekræftelse ved forskning ved hjælp af en anden fysisk og kemisk metode.

Sammenligning med et vidne.

Ved udførelse af undersøgelser af stoffer med den forventede sammensætning, kromatografimetoden med vidne- et kendt stof. Denne metode bruges, når det er vanskeligt at modstå kromatografiforhold, der er ingen litteratur Rf-data for dette system eller adsorbent, brugen af ​​en gradientmetode osv. Og når du udfører farvereaktioner, kan du sammenligne ikke kun farverne, men også nuancerne af de undersøgte stoffer og vidner, hvilket også er vigtigt.
På den anden side kræver denne metode ekstra omkostninger for vidner.

Kvantitative analysemetoder

Kvantitativ analyse i tyndtlagskromatografi har flere typer, der karakteriserer hvert udviklingstrin af metoden. Selvom nogle metoder kun kan bruges semikvantitativt, bruges de stadig i praksis.

Visuel sammenligningsmetode. Som nævnt ovenfor afhænger farveintensiteten af ​​pletten og dens størrelse af mængden af ​​det kromatograferede stof. Derfor er visuel kvantificering baseret på flere teknikker.
Fortyndingsmetode. Denne metode består i at bestemme for hvert stof den begrænsende koncentration, ved hvilken stoffet ikke kan bestemmes ved den kromatografiske metode. Ved kromatografi fortyndes teststoffet, indtil det ikke længere vises på pladen.
Indholdet af stof C bestemt ved denne metode findes ved formlen:

Hvor n-fortynding, EN- koncentrationen af ​​et stof, hvor det ikke optræder under kromatografi.
Metode til bestemmelse af pletareal. Hvis der anvendes lige store mængder af teststoffer og vidner, er de resulterende pletområder efter kromatografi proportionale med logaritmen af ​​stoffets koncentration. S= a ln c+b

hvor a og b er empiriske koefficienter bestemt eksperimentelt.
Hvis stedet for det adskilte stof har skarpe grænser, kan området af stedet bestemmes ved den gravimetriske metode (skær stedet ud og vej det), målt med et planimeter. Denne metode giver en fejl på op til 10-15%.
Det har dog en række væsentlige ulemper. Den første og mest betydningsfulde er, at det på denne måde er muligt at bestemme koncentrationen af ​​stoffer, der er farvede eller har fluorescens i UV-området (254, 366 nm). Denne ulempe kan elimineres ved at tilsætte forskellige phosphorstoffer til sorbenten, hvilket øger bestemmelsesfejlen.
Behandling af plader med udviklingsstoffer (reagenser) kan også anvendes (for eksempel brug af filterpapir gennemblødt i et fremkalderreagens, efterfulgt af kontakt med en kromatografisk plade og yderligere bestemmelse af arealet af det udviklede stof på den) , men bestemmelsesfejlen er også høj.
Behovet for et mere pålideligt kvantificeringsresultat førte til brugen af ​​instrumentelle metoder.
Elueringsmetode. Denne metode består i, at det separerede stof vaskes af fra sorbenten med et opløsningsmiddel, og dets koncentration bestemmes af andre metoder - fotometriske, polarografiske osv. Dette er en ret præcis metode, men kun hvis det separerede stof er kvantitativt isoleret. På grund af dens høje arbejdsintensitet anvendes metoden ret sjældent og er uacceptabel, når der er et stort antal prøver, der undersøges.
Fotografisk metode bestemmelse består i at fotografere plader med det separerede stof og yderligere bestemme graden af ​​sortfarvning ved hjælp af desinmetre.
Radiografisk metode svarende til fotometrisk, med den eneste forskel, at sortfarvningen af ​​pladen forårsaget af strålingen fra det separerede stof bestemmes. Denne metode bruges kun ved bestemmelse af stoffer med mærkede atomer.
Fotodesintometrisk metode kan bruges uden at isolere stoffet fra pladen og er baseret på at bestemme ikke kun området af stedet, men også dets intensitet.
Dette er den mest nøjagtige metode til at bestemme koncentrationen af ​​stoffer, da den giver mulighed for, ved brug af kalibreringsgrafer, at udføre ret nøjagtige kvantitative bestemmelser af alle separerede stoffer (op til 2-10%) direkte på pladen i en kort periode af tid.
Det er ikke overraskende, at med udviklingen af ​​tyndtlagskromatografi øges brugen af ​​desinmetre, følsomheden og dermed nøjagtigheden af ​​at bestemme koncentrationen af ​​separerede stoffer øges og nærmer sig nøjagtigheden af ​​højtydende væskekromatografi.

Ris. 1. Typisk kammer til fremkaldelse af en kromatografiplade med et tyndt lag

1. låg
2. glaskammer
3. TLC plade
4. sorbent
5. eksempel på ansøgningssted
6. opløsningsmiddel

Typisk TLC-kromatogram af fedtsyremethylestere.

På kromatogrammet BERØMMELSE= fedtsyrer methylestere = methylestere af fedtsyrer. Start= påføringssted for de blandinger, der skal adskilles.

Kromatogrammet blev udført på en Sorbfil-plade. System - benzen. Manifestation - forkulning efter sprøjtning med svovlsyre.

Prik 1 - methylestere af fedtsyrer. Prik 2 - methyleringsprodukter af almindelige lipider.

Pil bevægelsesretningen for opløsningsmiddelfronten (systemet) er vist. Under kromatografi bevægede opløsningsmiddelfronten sig til den øvre kant af pladen.

Anvendelse af TLC-metoden i farmaci

Den store betydning af kromatografiske metoder til farmaci skyldes, at der i produktionen af ​​lægemidler i mange tilfælde kræves foreløbig isolering af naturlige eller syntetiske produkter i deres rene form. Analyser er også ofte baseret på at adskille blandinger i komponenter. Lad os se på to eksempler på brugen af ​​TLC-metoden, der beviser dens betydning i analyse og produktion af medicinske stoffer.

KVANTITATIV BESTEMMELSE AF TRITERPENE SAPONINER VED HPTLC VED BRUG AF SCANNINGDENSITOMETRY

Triterpen saponiner (glykosider) er de aktive ingredienser i mange lægemidler.

De fleste af de for tiden anvendte metoder til kvantitativ bestemmelse af triterpensaponiner er baseret på syrehydrolyse af sidstnævnte med yderligere bestemmelse af aglyconen, oftest ved titrimetriske, sjældnere ved spektralanalysemetoder.

Sådanne metoder, baseret på destruktion af saponinmolekyler, har en række ulemper. De er langtidsholdbare og tillader ikke kvantitativ vurdering af forholdet mellem individuelle saponiner i samlede saponinholdige præparater.

I de fleste tilfælde begrænser forfattere sig normalt til en kvalitativ vurdering ved hjælp af TLC-metoden, den mest tilgængelige og enkle kromatografiske analysemetode. Brugen af ​​TLC til at bestemme det kvantitative indhold af komponenter er hæmmet af manglen på scanning densitometre.

Dette arbejde præsenterer resultaterne af kvantitativ TLC-bestemmelse af nogle triterpen-saponiner, derivater af oleanolsyre, i lægemidler og ekstrakter fra plantematerialer.

Vi udvalgte triterpen saponiner fra manchuriske aralia (aralosider) som genstande for undersøgelse. den kvalitative bestemmelse af hvilke i forskellige objekter er dækket i værkerne, samt triterpen saponiner af sukkerroer - stoffer med forudetableret farmakologisk aktivitet. Begge er derivater af oleanolsyre med en lille (ikke mere end fire) mængder sukkerrester, hvilket tyder på deres lignende adfærd i et tyndt lag sorbent

Summen af ​​aralosider isoleret fra Saparal-tabletter og summen af ​​sukkerroesaponiner isoleret fra friskhøstede jordstængler blev brugt som standarder. Til påføring på pladen blev der fremstillet vandige-alkoholiske (80% ethanol) opløsninger af saponiner indeholdende 0,4-2,0 mg/ml. Kromatografi blev udført under anvendelse af TLC-plader "Silufol" (Tjekkiet) 15 x 15 cm, "Armsorb" til HPTLC (Armenien) 6 x 10 cm og "Sorbfil" (Rusland) 10 x 10 cm. Højden af ​​den forreste stigning tilstrækkelig til fuldstændig adskillelse var henholdsvis 10,6 og 6 cm. Prøver blev påført ved hjælp af en MSh-10 mikrosprøjte (Rusland) på en plade opvarmet til 40 °C. Det optimale volumen af ​​den påførte prøve var 3-5 μl ikke overstige 2 mm.

Kromatografi blev udført ved en temperatur på 20-25°C. Efter at elueringen var afsluttet, blev pladerne tørret i luft og behandlet med et detektionsreagens under anvendelse af en laboratorieglassprayflaske. Zonescanning blev udført ved hjælp af et Shimadzu CS-9000 scanningsdensitometer (Japan) Kvaliteten af ​​zoner opnået ved kromatografi i de tre mest almindeligt anbefalede elueringssystemer blev sammenlignet: I. chloroform - methanol - vand (30:17:3): II. n-butanol - ethanol - ammoniak (7:2:5) III saponiner).

En 25% alkoholopløsning af phosphowolframsyre (hindbærpletter af saponiner på en hvid baggrund) blev anvendt som detektionsreagenser. bruges oftest til kvantitative TLC-bestemmelser af sådanne forbindelser og en 10% alkoholopløsning af phosphomolybdinsyre, anbefalet til udvikling af triterpenoidzoner (saponinzoner er mørkeblå på gul baggrund). I sidstnævnte tilfælde gør behandling af pladerne med ammoniakdamp det muligt at misfarve baggrunden og øge kontrasten af ​​pletterne.

Som et resultat af forskningen blev optimale betingelser for den kromatografiske proces udvalgt til densitometrisk bestemmelse. Armsorb til HPTLC blev anerkendt som den bedste af de tre typer plader. Processens høje effektivitet lettes af et tyndt (II0 µm) og ensartet fraktioneret sammensætning (5-10 µm) lag af silicagel, som giver god adskillelse og minimal erosion af zoner, selv når opløsningsmiddelfronten stiger med 6 cm. Sorbfil-plader er næsten lige så gode som dem i adskillelsesevne, men elueringstiden for dem er næsten dobbelt så lang. Silufol-plader med en tilstrækkelig høj elueringshastighed tillader adskillelse af komponenter over en længere kromatografisk vej, hvilket fører til en vis sløring af zoner, men deres anvendelse er også mulig.

Eluering kan udføres ganske effektivt i et hvilket som helst af de første tre elueringssystemer. I giver en gevinst i tid, IV giver mulighed for at opnå en bedre adskillelse af sukkerroesaponiner end de tre første.

Begge detektionsreagenser giver nogenlunde stabil farvning af zonerne ved scanning inden for 1 - 2 timer fra udviklingsøjeblikket. Efter denne periode ændrer saponinzonerne på plader behandlet med phosphonotwolframsyre farve fra crimson til violet, hvilket kan føre til forvrængning af resultaterne af kvantitativ analyse under scanning. Behandling med phosphomolybdinsyre er mere at foretrække i dette tilfælde. Ved opbevaring på et sted beskyttet mod lys gav plader med zoner udviklet med dette reagens fuldstændigt reproducerbare resultater efter flere måneder fra udviklingsøjeblikket.

Detektionsgrænsen for saponiner var 5 μg i prøven, når den blev udviklet med phosphowolframsyre, og 0,5 μg i prøven, når den blev udviklet med phosphormolybdinsyre. Behandling med ammoniakdamp gjorde det muligt at reducere detektionsgrænsen for saponiner i sidstnævnte tilfælde til 0,2 μg i prøven.

Kvantitativ bestemmelse af saponiner ved TLC under anvendelse af scanning densitometri blev udført på Armsorb plader (kromatografihastigheden i dette tilfælde var 2 gange højere) eller "Sorbfil" i II- og III-elueringssystemerne (som indeholdende mindre toksiske komponenter). Zonepåvisning blev udført med en 10% opløsning af phosphomolybdinsyre. Volumenet af den påførte prøve er ikke mere end 5 µl, højden af ​​stigningen af ​​eluentfronten er 6 cm, elueringstiden er 30 - 60 minutter. Scanningsbølgelængde λ = 675 nm. Efter behandling af pladerne vises saponinerne fra aralia og sukkerroer i form af tre zoner med forskellig intensitet.

En generel visning af densitogrammerne opnået under scanning er præsenteret i fig. 1.

Sammenligning af kromatogrammer af saponiner isoleret fra tabletter "Saparal" (fig. 1, a) og "Tincture of Aralia" (fig. 1,6) giver os mulighed for at bemærke forskellige forhold 44

aralosider A, B og C, som er en del af disse doseringsformer. Tilsvarende inkonsekvens i forholdet mellem individuelle saponiner i råvarer afhængigt af plantens vækstbetingelser blev bemærket tidligere. Forholdet mellem saponiner i færdige doseringsformer kan let vurderes ved hjælp af de opnåede densitogrammer. Da kromatogrammet viser 3 zoner svarende til saponiner, og densitogrammet henholdsvis har tre toppe, blev arealerne af alle toppe summeret ved konstruktion af kalibreringsafhængigheden. Fejlen i dette tilfælde var lavere end ved udførelse af beregninger baseret på parametrene for toppen af ​​en af ​​komponenterne under hensyntagen til variabiliteten af ​​deres forhold (fig. 2).

Ris. I. Densitogrammer opnået ved scanning af TLC-plader: EN- Aralia saponiner isoleret fra "Saparal" tabletter; 6 - saponiner fra Aralia tinktur; V- sukkerroe saponiner. Det samlede indhold af saponiner i prøven er 5 μg. A, B, C- toppe af saponiner; 0 - startlinje; f- Forreste linje.

Ris. 2. Kalibreringsafhængighed af summen af ​​arealerne af picon-saponiner i kromatogrammet af deres indhold i prøven. / - Aralia saponiner; 2 - sukkerroe saponiner. Abscisseaksen er indholdet af saponiner i prøven (mcg), ordinataksen er summen af ​​toparealer (cm2).

Kalibreringsafhængigheden af ​​summen af ​​toparealer på densitogrammet af stofindholdet i prøven blev opnået ved kromatografi af en række standardopløsninger med et kendt saponinindhold. Den oprindelige opløsning blev fremstillet ved at opløse en nøjagtigt afvejet portion saponiner i 80% ethanol, tørret til konstant vægt. En række arbejdsopløsninger blev fremstillet ved seriefortynding af den indledende opløsning med 80% ethanol. Indholdet af saponiner i dem var 0,04 - 2,0 mg/ml (0,2 - 10 μg i en prøve med et prøvevolumen på 5 μl). Dette koncentrationsområde kan betragtes som optimalt til scanning. Det mindste saponinindhold bestemt ved denne metode er 0,2 μg/prøve. Den relative standardafvigelse i dette tilfælde overstiger ikke 0,03.

De resulterende kalibreringsafhængigheder er ikke-lineære, hvilket er helt i overensstemmelse med Kubelka-Munk-teorien, som tager højde for absorption og spredning af lys af sorbenten. I et snævert område af lave koncentrationer kan afhængighederne betragtes som lineære (0,2 - 2,0 μg/prøve). Den ikke-lineære del af kurverne kan lineariseres ved at omdanne mængden af ​​stof i prøven og toparealet til gensidige mængder og tager formen vist i fig. 3.

Ris. 3. Afhængighed af den reciproke værdi af summen af ​​toparealerne af saponiner på kromatogrammet (1/S 10 -1) af deres gensidige værdi af deres indhold i prøven (1/m - 10 -1). 1 -aralia saponiner; 2 - sukkerroe saponiner.

Ved hjælp af det resulterende kalibreringsforhold blev indholdet af saponiner i Aralia-tinkturen bestemt. 5 ml tinktur blev fortyndet med 70% ethanol i en 25 ml målekolbe. 5 μl af den resulterende opløsning blev påført startlinjen af ​​Armsorb-pladerne. 5 μl af en standardopløsning af aralosider med en koncentration på 1 mg/ml (5 μg i prøven) blev påført til det tilstødende punkt behandlet som beskrevet ovenfor.

Forskellen mellem de opnåede resultater og resultaterne af bestemmelsen med FS 42-1647-93 (5,3 mg/ml) var 6 - 7 % i retning af overvurdering, hvilket kan forklares ved tabet af saponiner under flertrins præ- forberedelse af prøven ved hjælp af FS (tabel).

Den ovenfor beskrevne metode blev brugt til at bestemme saponiner i Saparal-tabletter og i planteråmaterialer (manchuriske aralia-rødder og sukkerroe-rhizomer) med foreløbig udtømmende ekstraktion af saponiner fra tabletterne fra råmaterialerne - 80% varm ethanol. Afvigelser fra resultaterne af bestemmelsen i henhold til FS 42-1755 - 81 for tabletter (0,040 g) er inden for de samme grænser som for tinkturen (tabel).

Således er muligheden for hurtig kvantitativ bestemmelse af nogle triterpen-saponiner og oleanolsyrederivater i lægemidler og planteråmaterialer ved hjælp af HPTLC-metoden med efterfølgende kvantitativ vurdering af de resulterende zoner ved hjælp af scanning densitometri blevet demonstreret.

Resultaterne af bestemmelsen korrelerer ganske godt med resultaterne af bestemmelsen ved FS. Teknikken giver dig mulighed for at kombinere bestemmelsen af ​​lægemidlers ægthed ved TLC (af FS) med efterfølgende scanning af zoner af komponenter på pladerne og deres kvantitative vurdering. Kromatogrammer opnået ved scanning gør det også muligt at bestemme forholdet mellem individuelle saponiner i de analyserede objekter.

Resultaterne af den kvantitative bestemmelse af araloznds iCTofik-fra aralia (I) og tabletter "Saparal" (2) af THC ved hjælp af en scanningsdsnsptoietrnn /" = 0,95, og - 5,/=2,78,/=4

UNDERSØGELSE AF LIPID- OG FLAVONOID-SAMMENSÆTNING AF PRØVER AF NOGLE ARTER AF SLÆGTEN ( Lathyrus .)

Fra mange repræsentanter for bælgplantefamilien, såsom lucerne, lupinkløver, vikke, er der blevet isoleret flavonoider, der har et bredt spektrum af virkninger: anti-inflammatorisk, sårheling, vaskulær styrkelse osv. Isoflavoner blev isoleret fra rødkløver: biochanin A - 0,8% og formononetin - 0,78%, som har østrogen aktivitet.

Vi studerede flavonoidsammensætningen i visse arter af slægten: Chlugovaya (II), Chlugovaya (III), Ch.

Med henblik på mulig anvendelse af lipidkomplekset i fødevaretilsætningsstoffer og medicin har vi også undersøgt den komplette fraktionelle sammensætning af lipider i græsset og frøene på hagen.

Materialer og metoder

Isolering af lipidfraktionen fra tørre råmaterialer blev udført ifølge Bligh og Dyers metode.

1,6 ml destilleret vand blev tilsat til en prøve (0,2 g) tørt plantemateriale og holdt koldt i 24 timer. Derefter blev 6 ml af en blanding af chloroform - methanol (1:2) tilsat og efterladt i 3 dage, hvorefter det blev centrifugeret ved 8 tusinde rpm i 15 minutter. 2 ml vand og 2 ml chloroform blev tilsat til den klare supernatant. Det resulterende 2-fasesystem blev adskilt i en skilletragt. Chloroformlaget blev vasket to gange med methanol og inddampet til tørhed på en rotationsfordamper. Remanensen blev tørret i en vakuumekssikkator, derefter fortyndet med chloroform til en koncentration på 10 mg/ml, og opløsningen blev opbevaret i stabiliseret chloroform ved +4°C.

Kvalitativ analyse af lipidfraktionen blev udført under anvendelse af TLC-metoden på Kieselgel 60 (254) plader i følgende opløsningsmiddelsystemer:

A. For neutrale lipider: 1) Hexan - benzen (9:1); 2) Hexan-ether-eddikesyre (90:10:1).

B. For polære lipider (phospholipider): 1) chloroform - acetone - methanol - eddikesyre - vand (6:8:2:2:1), surt; 2) chloroform - meta-

nol - 26% ammoniak (65:25:5), basisk; 3) chloroform - methanol - vand (65:25:4), neutral.

Ved bestemmelse af den kvalitative sammensætning af fosfolipider blev deres identifikation udført ved hjælp af forskellige udviklere (joddamp, ninhydrin, Dragendorff-reagens, svovlsyre) og vha. Rf standarder.

Ovenstående sæt af systemer og reagenser muliggjorde en omfattende analyse af lipidfraktioner isoleret fra kinesiske prøver.

For at studere flavonoidsammensætningen under hensyntagen til vækstsæsonens faser blev følgende prøver udvalgt: I (blomstrende fase); IV (blomstrende fase); III (ledsager) spirende fase; II (blomstrende fase); II (frugtfase); II (vegetationsfase før blomstring).

Isolering af flavonoider fra tørre råmaterialer blev udført ved hjælp af en metode, der sikrer deres udtømmende ekstraktion.

Til dette formål blev 1 g knust urt anbragt i en kolbe med tilbagesvaling, hældt med 20 ml 70% ethanol og kogt i 20 minutter i et vandbad. Ekstrakten blev afkølet, filtreret gennem et Schott-filter af glas og inddampet til tørhed på en rotationsfordamper. Remanensen blev opløst i ethylalkohol til en slutkoncentration på 10 mg/ml. Bestemmelse af totalt flavonoidindhold blev udført ved anvendelse af rutin som standard. Resultaterne af denne undersøgelse er vist i tabel. 3.

Bestemmelse af den kvalitative sammensætning af flavonoider blev udført ved TLC på Kieselgel 60(254) plader fra Merck, i et opløsningsmiddelsystem af n-butanol - eddikesyre - vand (6:1:2). Detektor - svovlsyre under UV (254 nm) - pletter af lilla flavonoider på en grøn baggrund.

tabel 1

Det samlede indhold af flavonoider i råvarer (græs) af forskellige typer græs (i %, baseret på absolut tørvægt)

Ris. 1. TLC af flavonoidsammensætning af individuelle arter af slægten Kina. C - summen af ​​flavonoidvidner: onin - Rf 0,28; rutine - R 0,48; luteolin glucosid - Rf 0,58; formononetin - Rf 0,64; quercetin - Rf0,79: luteolin - Rf 0,82; biochanin A - Rf 0,85; apigenin - Rf 0,92.

Ris. 2. TLC af enggræsflavonoider i forskellige faser af vækstsæsonen. IIa - blomstringsfase; IIb - frugtfase: IIc - vegetationsfase før blomstring. C - summen af ​​flavonoidvidner: onin - Rf f 0,28; rutine - Rf 0,48; luteolin glucosid - Rf 0,58; formononetin - Rf 0,64; quercetin - Rf 0,79; luteolin - R ( 0,82; biochanin A - Rf 0,85; apigenin - Rf 0,92.

Ved undersøgelse af flavonoidsammensætningen af ​​II i forskellige faser af vækstsæsonen, blev det bemærket, at ud over rutin og quercetin var ononin og formononetin til stede i mærkbare mængder i ekstraktet. De resterende flavonoider findes i spormængder.

Det er således vist, at de i forskellige typer hage, i forskellige faser af vækstsæsonen, indeholder både glykosider og aglyconer - ononin, rutin, luteolinglucosid og deres aglyconer: formononetin, quercetin og luteolin, og deres sammensætning varierer afhængigt af plantetype, og i én plante (enghage) afhængig af vækstsæsonens fase.

tabel 2

Kvantitativt indhold af hovedflavonoider i individuelle repræsentanter for slægten (i %, med hensyn til absolut tørvægt)

I II blev både ononin og formononetin fundet i den vegetative periode. I blomstrings- og frugtperioden falder mængden af ​​ononin mærkbart, og mængden af ​​formononetin stiger.

Det kvantitative indhold af de vigtigste flavonoider i de undersøgte prøver blev bestemt ved anvendelse af kvantitativ TLC under de samme betingelser. Resultaterne af denne undersøgelse er vist i tabel. 2.

Som følger af dataene i tabellen. 2, forskellige typer hage er en rig kilde til bloflavonoider, på grund af hvilke disse planter udviser en af ​​de typer af biologisk aktivitet.

Konklusion:

En af de vigtige opgaver for moderne kemi er pålidelig og nøjagtig analyse af organiske stoffer, ofte ens i struktur og egenskaber. Uden dette er det umuligt at udføre kemisk, biokemisk og medicinsk forskning miljømæssige metoder til miljøanalyse, retsmedicinske undersøgelser, såvel som den kemiske, olie, gas, fødevarer, medicinsk industri og mange andre sektorer af den nationale økonomi er i vid udstrækning baseret på; det her. Kun en lille del af metoderne og teknikkerne til tyndtlagskromatografi er præsenteret her. Men som du kan se fra denne lille ting, har tyndtlagskromatografi betydelige og seriøse muligheder kombineret med bekvemmelighed og enkelhed.

En gasversion af TLC blev dog også implementeret. Finkornet Al 2 O 3 osv. anvendes som disse, overtrukket med glas, folie eller plader; for at sikre laget, brugen eller andre. Branchen producerer færdige plader med et lag allerede påsat. Eluenterne er sædvanligvis blandinger af org. opløsninger, vandopløsninger, kompleksdannende midler mv. Afhængig af valget af kromatografi systemer (sammensætning af mobile og stationære faser) i adskillelse af stof. processer kan spille en rolle. I praksis implementeres flere ofte samtidigt. adskillelsesmekanismer.

Afhængigt af pladens position og retningen af ​​eluentstrømmen skelnes der mellem stigende, faldende og vandret TLC. Ifølge operationsteknikken skelnes frontalanalyse (når den analyserede blanding fungerer som den mobile fase) og den almindeligt anvendte elueringsversion. "Cirkulær" TLC (når den analyserede opløsning og opløsning tilføres sekventielt til midten af ​​pladen) og "anti-cirkulær" TLC (når den analyserede opløsning påføres i en cirkel, og eluenten bevæger sig fra periferien til midten af plade), TLC under (når -opløsningsmiddel under ledes gennem et lag dækket med tæt presset), samt TLC under betingelser med en gradient af temperatur, sammensætning osv. I den såkaldte. todimensionel TLC-kromatografi processen udføres sekventielt i to indbyrdes vinkelrette retninger med forskellige. eluenter, hvilket øger separationseffektiviteten. Til samme formål anvendes flere elueringer i én retning.

I elueringsversionen påføres dråber (1-5 µl i volumen) af den analyserede opløsning på laget, og kanten af ​​pladen nedsænkes i eluenten, som er placeret i bunden af ​​et hermetisk lukket glaskammer. Eluenten bevæger sig langs laget under påvirkning af kapillær- og gravitationskræfter; den analyserede blanding bevæger sig i samme retning. Som et resultat af gentagen gentagelse og i overensstemmelse med koefficienten. fordelinger i den valgte adskilles og arrangeres på pladen i separate zoner.

Efter at processen er afsluttet, fjernes pladen fra kammeret, tørres, og de adskilte zoner detekteres i overensstemmelse med deres egne. maling eller efter at have sprøjtet dem med opløsninger, der danner farvede eller fluorescerende plettermed komponenterne i blandingen, der skal adskilles. Radioaktive stoffer påvises autoradiografisk (ved eksponering for en plade ovenpå den). Også brugt. og aktive detektionsmetoder. Det resulterende billede af fordelingen af ​​kromatografi zoner kaldet kromatogram (se figur).

Kromatogram opnået ved at adskille en blanding af tre komponenter ved hjælp af tyndtlagsmetoden.

Kromatografisk position zoner i kromatogrammet er karakteriseret ved værdien R f - forholdet mellem stien l i gennemløbet af midten af ​​zonen for den i-te komponent fra startlinjen til stien l gennemløbet af eluenten: R f = l i /l ; R f 1. Værdien af ​​R f afhænger af koefficienten. fordeling () og på forholdet mellem volumen af ​​den mobile og stationære fase.

Adskillelse i TLC er påvirket af en række faktorer - sammensætningen og egenskaberne af eluenten, arten, temperaturen, størrelsen og tykkelsen af ​​laget og kammerets dimensioner. For at opnå reproducerbare resultater er det derfor nødvendigt at omhyggeligt standardisere de eksperimentelle forhold. Overholdelse af dette krav giver dig mulighed for at indstille Rf med relativ. standardafvigelse 0,03. Under standardbetingelser er Rf konstant for en given vare og bruges til sidstnævnte.

Mængde af komponent i kromatografi Zonen bestemmes direkte på laget af området af zonen (normalt varierer dens diameter fra 3 til 10 mm) eller intensiteten af ​​dens farve (). De bruger også automatisk. scanningsinstrumenter, der måler absorption, transmission eller reflektion af lys eller kromatografi. zoner De adskilte zoner kan skrabes af pladen sammen med laget, komponenten kan ekstraheres i opløsning, og opløsningen kan analyseres ved hjælp af en passende metode (luminescens, atomabsorption, atomfluorescens, radiometrisk analyse, etc.). Fejlen i kvantificering er normalt 5-10%; detektionsgrænser for stoffer i zonerne -10 -3 -10 -2 μg (ved brug af farvede derivater) og 10 -10 -10 -9 μg (ved hjælp af ).

Fordele ved TLC: enkelhed, omkostningseffektivitet, tilgængelighed af udstyr, hurtighed (separationsvarighed 10-100 min), høj produktivitet og effektivitet af separation, klarhed af separationsresultater, let kromatografisk detektering. zoner

TLC bruges til separation og analyse af både organisk og inorg. in-in: næsten alle ikke-org.

Kromatografi i moderne kemi

En af de vigtige opgaver for moderne kemi er pålidelig og nøjagtig analyse af organiske stoffer, ofte ens i struktur og egenskaber. Uden dette er det umuligt at udføre kemisk, biokemisk og medicinsk forskning miljømæssige metoder til miljøanalyse, retsmedicinske undersøgelser, såvel som den kemiske, olie, gas, fødevarer, medicinsk industri og mange andre sektorer af den nationale økonomi er i vid udstrækning baseret på; det her.

En af de mest følsomme metoder er kromatografisk analyse, først foreslået af den russiske videnskabsmand M.S. Tsvet i begyndelsen af ​​det 20. århundrede. og i slutningen af ​​århundredet var det blevet til et stærkt værktøj, uden hvilket både syntetiske og kemikere, der arbejder på andre områder, ikke længere kunne klare sig.

Farveadskillelse blev udført i kolonnen vist i fig. 1. En blanding af stoffer A, B og C - naturlige pigmenter oprindeligt placeret i zonen e,– opdeles ved at tilsætte det passende opløsningsmiddel D (eluent) i separate zoner.

Som altid startede det hele, lader det til, med det enkleste, som et skolebarn kunne gøre. I tidligere år skrev skolebørn, herunder forfatteren af ​​denne artikel, med blæk. Og hvis en klattepude faldt på en blækplet, så kunne man bemærke, at blækopløsningen var opdelt i flere "fronter" på den. Kromatografi er baseret på fordelingen af ​​et af flere stoffer mellem to, som man siger, faser (for eksempel mellem et fast stof og en gas, mellem to væsker osv.), og en af ​​faserne bevæger sig konstant, dvs. den er mobil.

Det betyder, at en sådan fase, for eksempel en gas eller væske, hele tiden bevæger sig fremad, hvilket forstyrrer ligevægten. Ydermere, jo bedre et bestemt stof sorberes (absorberes) eller opløses i den stationære fase, jo lavere hastighed er dets bevægelse, og omvendt, jo mindre sorberes forbindelsen, dvs. den har mindre affinitet til den stationære fase. større bevægelseshastighed. Som et resultat, som vist i fig. 2, hvis vi først har en blanding af forbindelser, så bevæger de sig gradvist alle sammen, skubbet af den mobile fase, mod "afslutningen" med forskellige hastigheder og adskilles til sidst.

Ris. 2. Det grundlæggende princip for kromatografisk adskillelse: NF er et lag af stationær fase, der dækker den indre overflade af kapillarrøret T, gennem hvilket den mobile fase (MP) strømmer. Komponent A1 i blandingen, der skal adskilles, har en høj affinitet til den mobile fase og komponent A2 til den stationære fase. A "1 og A" 2 – positioner af zoner af de samme komponenter efter et tidsrum, hvor kromatografisk adskillelse fandt sted i retningen angivet af pilen

I praksis indføres en prøve af en blanding af stoffer for eksempel med en sprøjte i et lag af en stationær fase, hvorefter de forskellige forbindelser, der indgår i blandingen, sammen med den mobile fase (eluent), bevæger sig langs laget , drevet af denne fase. Bevægelseshastigheden afhænger af størrelsen af ​​komponenternes interaktion (affinitet) i de stationære og mobile faser, og som et resultat opnås adskillelse af komponenterne.

Efter adskillelse skal alle komponenter identificeres og kvantificeres. Dette er det generelle skema for kromatografi.

Det skal bemærkes, at denne moderne metode gør det muligt inden for få minutter at bestemme indholdet af titusinder og hundredvis af forskellige forbindelser i en blanding, selv i ubetydelige "spor"-mængder på ~10-8%.

Lad os se nærmere på den kromatografiske analysemetode. Kromatografiske systemer kan opdeles efter følgende principper:

– aggregeringstilstand for de mobile og stationære faser;
– systemets geometriske karakteristika;
– mekanisme for interaktion mellem det stof, der adskilles, og faserne.

Gas eller væske bruges som den mobile fase. Faste stoffer eller væsker bruges som stationære eller stationære faser.

Baseret på arrangementet af faser er kromatografiske systemer opdelt i to grupper: plan og søjle.

Sidstnævnte er til gengæld opdelt i:

– pakket, fyldt med granulært fast materiale (små kugler), enten tjener som et separationsmedium eller tjener som bærer af den stationære væskefase;
– kapillær, hvis indre vægge er dækket af en film af stationær væske eller et lag af fast adsorbent (absorber).

Interaktionen mellem stoffet, der separeres, og faserne i det kromatografiske system kan forekomme enten på overfladen af ​​fasen eller i bulken. I det første tilfælde kaldes kromatografi adsorption, i den anden – fordeling.

Mekanismerne for molekylær adskillelse i kromatografiske systemer kommer oftest ned til følgende:

– den stationære fase absorberer (sorberer) fysisk de stoffer, der udskilles;
– den stationære fase interagerer kemisk med de stoffer, der udskilles;
– den stationære fase opløser de stoffer, der skal separeres fra opløsning, i et ublandbart opløsningsmiddel;
– den stationære fase har en porøs struktur, som hindrer diffusionen af ​​molekyler af de stoffer, der udskilles i denne fase.

Kromatografi, der begyndte med hjemmelavede enheder såsom en papirstrimmel dyppet i et opløsningsmiddel, er nu repræsenteret af meget komplekse instrumentelle systemer baseret på moderne præcisions- eller præcisionsprincipper og udstyret med computersoftware. Det er tilstrækkeligt at sige, at et af de bedste computerfirmaer, Hewlett-Packard, også producerer moderne kromatografer.

Rutediagrammet for kromatografiprocessen er i det væsentlige meget simpelt og er vist i fig. 3. Dernæst, omtrent i denne rækkefølge, vil princippet for drift af kromatografen blive overvejet.

Hovedtyper af kromatografi

De vigtigste typer kromatografi omfatter adsorption, ionbytning, væske, papir, tyndt lag, gelfiltrering og affinitetskromatografi.

Adsorptionskromatografi. I dette tilfælde udføres adskillelsen af ​​stoffer på grund af selektiv (selektiv) adsorption af stoffer på den stationære fase. En sådan selektiv adsorption skyldes affiniteten af ​​en bestemt forbindelse til den faste adsorbent (stationær fase), og denne bestemmes igen af ​​deres molekylers polære interaktioner. Derfor bruges kromatografi af denne type ofte til analyse af forbindelser, hvis egenskaber bestemmes af antallet og typen af ​​polære grupper. Adsorptionskromatografi omfatter ionbytnings-, væske-, papir-, tyndlags- og gasadsorptionskromatografi. Gasadsorptionskromatografi er beskrevet mere detaljeret i afsnittet "Eluentanalyse".

Ionbytningskromatografi. Ionbytterharpikser anvendes som stationær fase (fig. 4), både i søjler og i form af et tyndt lag på en plade eller papir. Separationer udføres normalt i vandige medier, så denne metode bruges hovedsageligt i uorganisk kemi, selvom blandede opløsningsmidler også anvendes. Drivkraften for adskillelse i dette tilfælde er den forskellige affinitet af de separerede opløsningsioner til ionbyttercentre med modsat polaritet i den stationære fase.

Væskekromatografi. I dette tilfælde er den stationære fase en væske. Det mest almindelige tilfælde er adsorptionsversionen af ​​væskesøjlekromatografi. Et eksempel på adskillelse af naturlige pigmenter er vist i fig. 5.

Ris. 5. Kromatografisk adskillelse af naturlige pigmenter (flavoner og isoflavoner)

Papirkromatografi. Strimler eller ark papir bruges som den stationære fase (fig. 6). Adskillelse sker ved en adsorptionsmekanisme, og nogle gange udføres den i to vinkelrette retninger.

Tyndtlagskromatografi er ethvert system, hvor den stationære fase er et tyndt lag, specifikt et lag af aluminiumoxid (2 mm tykt) i form af en pasta, påført en glasplade. Et eksempel på et sådant system og adskillelsesresultaterne er vist i fig. 7.

Gelfiltrering, eller molekylsigte, kromatografi. Princippet om adskillelse i sådanne systemer er noget anderledes end i tidligere tilfælde. Den stationære fase er materialer, sædvanligvis geler, med strengt kontrolleret porøsitet, som et resultat af hvilke nogle komponenter i blandingen, i overensstemmelse med størrelsen og formen af ​​molekylerne, kan trænge ind mellem gelpartiklerne, mens andre ikke kan. Denne type kromatografi bruges oftest til at adskille højmolekylære forbindelser. En af mulighederne for at bruge denne metode er at bestemme molekylmasserne af de separerede stoffer, som ofte er nødvendige for kemiske undersøgelser (fig. 8).

Affinitetskromatografi. Denne type kromatografi er baseret på interaktionen mellem et stof, på den ene side, der er i stand til at reagere med den isolerede forbindelse, og på den anden side forbundet med en fast bærer af den stationære fase. Et sådant stof har en affinitet til den isolerede forbindelse og kaldes en affinitetsligand.

Denne metode bruges oftest i biokemisk analyse. For eksempel, når biologiske antigener indeholdende proteiner føres gennem cellulose aktiveret med cyanogenbromid, sker deres specifikke tilbageholdelse, som vist i skema 1.

I en anden metode, for at binde proteiner til hydroxylgruppen af ​​cellulose, behandles sidstnævnte først med 2-amino-4,6-dichlor- Sim-triazin, og derefter reagerer produktet af deres interaktion med aminogruppen i proteinet ifølge skema 2:

Selvfølgelig er antallet af kromatografimetoder ikke begrænset til de ovenfor anførte. Kromatografi kombineres ofte med andre fysisk-kemiske metoder, såsom massespektrometri, men denne artikel har til formål kun at introducere læseren til de generelle principper for kromatografi. Derfor vil vi næste gang overveje at behandle kromatografiresultaterne.

Metoder til udvikling af kromatogrammer

Manifestation er processen med overførsel af adskilte stoffer af den mobile fase. Udvikling kan udføres på tre hovedmåder: frontal analyse, forskydning og eluering. Den mest anvendte er eluering.

Frontal analyse. Dette er det enkleste tilfælde, da prøven her fungerer som den mobile fase. Det tilføjes løbende til systemet, så store prøvevolumener er nødvendige. Resultaterne er vist i fig. 9.

Dannelsen af ​​flere zoner skyldes de forskellige affiniteter af forskellige komponenter til den stationære fase. Forkanten kaldes forsiden, deraf navnet. Den første zone indeholder kun det mindst tilbageholdte stof A, som bevæger sig hurtigst. Den anden zone indeholder stofferne A og B. Den tredje zone er en blanding af stofferne A, B og C. Ved frontalanalyse opnås kun komponent A i flydende form.

Forskydningsanalyse. I dette tilfælde har den mobile fase en større affinitet til den stationære fase end stoffet, der separeres. En lille prøve injiceres i den stationære fase. Men på grund af sin høje affinitet forskyder og skubber den mobile fase gennem alle komponenter. Det fortrænger den stærkest sorberede komponent B, som igen fortrænger substans B, som fortrænger den mindst sorberede komponent A. I modsætning til frontalanalyse er det ved hjælp af denne metode muligt at opnå alle hovedkomponenterne i individuel (flydende) form.

Eluentanalyse. Den mobile fase til at flytte det opløste stof ledes gennem kromatografisystemet. Adskillelse sker på grund af de forskellige affiniteter af komponenterne i blandingen til den stationære fase og derfor på grund af forskellige hastigheder af deres bevægelse. Et lille volumen prøve indføres i det kromatografiske system. Som følge heraf vil zoner med komponenter gradvist danne separate områder adskilt af en ren eluent. På grund af sin høje separationseffektivitet er metoden blevet den mest udbredte og har stort set erstattet andre separationsmuligheder. Derfor vil vi næste gang overveje teorien og hardwaredesignet for denne metode.

Lidt teori. Det er ofte bekvemt at tænke på kromatografiske processer som en række ekstraktionsprocesser, og stoffer med meget lignende egenskaber kan adskilles, fordi hundredvis eller endda tusindvis af ekstraktionscyklusser forekommer hurtigt og samtidigt under kromatografiske processer.

For at vurdere effektiviteten af ​​kromatografiske processer, baseret på det teoretiske koncept om destillation (analogt med adskillelse af olie i destillationskolonner, hvor den teoretiske plade svarer til den del af destillationskolonnen, hvori damp og væske er i ligevægt), skal koncept "højde svarende til en teoretisk plade"(VETT). Den kromatografiske søjle betragtes således som et sæt hypotetiske lag (plader). Med HETT mener vi normalt den lagtykkelse, der er nødvendig for, at blandingen, der kommer fra det foregående lag, kan komme i ligevægt med den gennemsnitlige koncentration af stoffet i den mobile fase af dette lag. Det kan beskrives med følgende formel:

VEDDE = L/N,

Hvor L– kolonnelængde, N– antal teoretiske plader.

HETT er en sammenfattende karakteristik af adskillelse af stoffer. Det er dog vigtigt at adskille komponenterne i en blanding, men ikke tilstrækkeligt. Det er nødvendigt at identificere hver komponent og bestemme dens mængde i prøven. Dette gøres normalt ved at behandle kromatogrammer - afhængigheden af ​​signalintensiteten, proportional med koncentrationen af ​​stoffet, på separationstiden. Nogle eksempler på kromatogrammer er vist i fig. 10, 11.

Tiden fra det øjeblik, prøven indføres i kolonnen, indtil topmaksimum er registreret, kaldes tilbageholdelsestid (tR). Under optimale forhold afhænger det ikke af mængden af ​​indført prøve, og under hensyntagen til kolonnens geometriske parametre bestemmes det af strukturen af ​​en bestemt forbindelse, dvs. det er en kvalitativ karakteristik af komponenterne. Det kvantitative indhold af en komponent er kendetegnet ved størrelsen af ​​toppen, eller rettere dets areal. Tælle topareal udføres normalt automatisk ved hjælp af et integratorinstrument, der registrerer både retentionstid og spidsareal. Moderne udstyr giver dig mulighed for straks at modtage en computerudskrift, der angiver indholdet af alle komponenter i blandingen, der adskilles.

Kromatografens arbejde. Installationsdiagrammet for den enkleste gaskromatograf er vist i fig. 12. Den består af en gascylinder indeholdende en mobil inert fase (bæregas), oftest helium, nitrogen, argon osv. Ved hjælp af en reducering, der reducerer gastrykket til det nødvendige niveau, kommer bæregassen ind i kolonnen, som er et rør fyldt med sorbent eller andet kromatografisk materiale, der fungerer som en stationær fase.

Ris. 12. Funktionsskema for en gaskromatograf:
1 - højtrykscylinder med bæregas; 2 - flowstabilisator; 3 og 3" – trykmålere; 4 – kromatografisk søjle; 5 – prøveinjektionsanordning; 6 – termostat; 7 – detektor; 8 – optager; 9 – flowmåler

Den kromatografiske søjle er "hjertet" af kromatografen, da det er i den, at adskillelsen af ​​blandinger finder sted. Højttalere er oftest lavet af glas; Der er stål-, teflon- og kapillærsøjler. En anordning til indføring af en prøve er installeret nær gasindløbet i kolonnen. Oftest administreres prøven ved hjælp af en sprøjte, der gennemborer gummimembranen. Den analyserede blanding adskilles i en kolonne og kommer ind i en detektor - en enhed, der konverterer separationsresultaterne til en form, der er praktisk til optagelse.

En af de mest brugte detektorer er katharometeret, hvis funktionsprincip er baseret på måling af varmekapaciteten af ​​forskellige legemer.

I fig. Figur 13 viser et diagram af katharometeret. En metalspiral (modstandstråd) er placeret i et cylindrisk hulrum, der opvarmes som et resultat af passagen af ​​elektrisk jævnstrøm gennem den. Når bæregassen strømmer gennem den med konstant hastighed, forbliver temperaturen af ​​spiralen konstant. Men hvis sammensætningen af ​​gassen ændres, når det eluerende stof fremkommer, ændres spiralens temperatur, hvilket registreres af enheden.

En anden almindelig detektor er en flammeioniseringsdetektor, hvis diagram er vist i fig. 14. Det er meget mere følsomt end et katharometer, men kræver tilførsel af ikke kun en bæregas, men også brint. Bæregassen, der forlader kolonnen indeholdende eluenten, blandes med hydrogen og passerer ind i detektorens brænderdyse. Flammen ioniserer eluentmolekylerne, hvorved den elektriske modstand mellem elektroderne falder, og strømmen stiger.

Væskekromatografi anvender spektrofotometriske detektorer (i de synlige, UV- og IR-områder) samt refraktometriske detektorer baseret på måling af opløsningers brydningsindeks.

Disse er generelt set det grundlæggende i kromatografisk analyse. Naturligvis giver artiklen kun generelle principper for kromatografi, og ofte er de blot angivet. Faktisk er "køkkenet" af denne metode ret stort og komplekst. Hovedmålet med denne artikel er ifølge forfatteren at tiltrække unge læseres opmærksomhed på denne kraftfulde metode.

De, der ønsker at blive mere fortrolige med dette område, kan henvise til litteraturen nedenfor.

Litteratur

Zhukhovitsky A.A., Turkeltaub N.M. Gaschromatografi. M.: Gostoptekhizdat, 1962, 240 s.;
Sakodinsky K.I., Kiselev A.V., Iogansen A.V. og andre fysisk-kemiske anvendelser af gaskromatografi. M.: Kemi, 1973,
254 sider;
Væskesøjlekromatografi. I 3 bind. Z. Deila, K. Macieka, J. Janaka. M.: Mir, 1972;
Berezkin V.G., Alishoev V.R., Nemirovskaya I.B.. Gaschromatografi i polymerkemi. M.: Nauka, 1972, 287 s.;
Morozov A.A. Kromatografi i uorganisk analyse. M.: Højere. skole, 1972, 233 s.;
Berezkin V.G., Bochkov A.S.. Kvantitativ tyndtlagskromatografi. M.: Nauka, 1980, 183 s.;
Laboratoriehåndbog for kromatografiske og relaterede teknikker. I 2 bind. O. Mikesh. M.: Mir, 1982, bind 1-2, 783 s.;
Kromatografisk analyse af miljøet. Ed. R. Groba. M.: Mir, 1979, 606 s.;
Kirchner Yu. Tyndtlagskromatografi. I 2 bind: Mir, 1981, bind 1, 615 s., bind 2, 523 s.
Ekstraktionskromatografi. Ed. T. Brown, G. Guersini. M.: Mir, 1978, 627 s.

V.V.Safonov,
professor i Moskva
statstekstil
Akademi opkaldt efter A.N. Kosygina

-> Tilføj materialer til webstedet -> Analytisk kemi -> Zolotov Yu.A. -> "Fundamentals of Analytical Chemistry bind 2" ->

Fundamentals of Analytical Chemistry bind 2 - Zolotov Yu.A.

Zolotov Yu.A., Dorokhova B.N., Fadeeva V.I. Fundamentals of Analytical Chemistry bind 2 - M.: Higher School, 1996. - 461 s.
ISBN 5-06-002716-3
Hent(direkte link) : osnovianalhimt21996.djvu Forrige 1 .. 164 > .. >> Næste
Stepanov A.B., Korchemnaya E.K. Elektromigreringsmetode i uorganisk analyse. - M.: Kemi, 1979.
Hwang S, Kammermeier K. Membranseparationsprocesser. - M.: Kemi, 1981.
kapitel 8
Aivaeov B.V. Grundlæggende om gaskromatografi. - M.: Higher School, 1977. Belyavskaya T.A., Bolshova T.A., Brykina G.D. Kromatografi af uorganiske stoffer. - M.: Højere skole, 1986.
447
Berezkin V.G., Bochkov A.S. Kvantitativ tyndtlagskromatografi.
- M.: Videnskab, 1980.
Kvantitativ analyse ved kromatografiske metoder / Ed. E. Katz.
- M.: Mir, 1990.
Perry S, Amos R, Brewer P. En praktisk guide til væskekromatografi. - M.: Mir, 1974.
Styskin E.L., Itsikson L.B., Braude E.V. Praktisk højtydende væskekromatografi. - M.: Kemi, 1986.
Shatz V.D., Sakhartova O.V. Højtydende væskekromatografi. - Riga: Zinatne, 1988.
Shpigun O.A., Zolotov Yu.A. Ionkromatografi og dens anvendelse i vandanalyse. - M.: Moscow State University Publishing House, 1990.
Engelhardt T.H. Væskekromatografi ved høje tryk. - M.: Mir, 1980.
Kapitel 9
Dyatlova N.M., Temkina V.Ya., Popov K.I. Complexones og metal complexonates. - M.: Kemi, 1988.
Indikatorer/Red. P. Biskop. T. i og 2., - M.: Mir, 1976.
Przybil R. Analytiske anvendelser af ethylendiamintetraeddikesyre og beslægtede forbindelser. - M.: Mir, 1975.
Titrimetriske metoder til analyse af ikke-vandige opløsninger/Ed. V.D. Bezugly. - M.: Kemi, 1986.
Ashworth M.R.F. Titrimetriske metoder til analyse af organiske forbindelser. Direkte titreringsmetoder. - M.: Kemi, 1968.
Kapitel 10
Bond A.M. Polarografiske metoder i analytisk kemi. - M.: Kemi, 1983.
Koryta I. Ioner, elektroder, membraner. - M.: Mir, 1983.
Mayranovsky S.G., Stradyn Ya.P., Bezuglyi V.P. Polarografi i organisk kemi. - M.: Kemi, 1975.
Nikolsky B.P., Materova E.A. Ionselektive elektroder. - L.: Kemi, 1980.
Plambeck J. Elektrokemiske analysemetoder. Grundlæggende teori og anvendelse. - M.: Mir, 1985.
Referencevejledning til anvendelse af ionselektive elektroder. - M.: Mir, 1986. 448
Kapitel 11
Benwell K. Fundamentals of molekylær spektroskopi. - M.: Mir, 1985. Britske M.E. Atomabsorptionsspektrokemisk analyse. - M.: Kemi, 1982.
Vilkov L.V., Pentin Yu.A. Fysiske forskningsmetoder i kemi. Resonans og elektro-optiske metoder. - M.: Højere skole, 1989.
Vilkov L.V., Pentin Yu.A. Fysiske forskningsmetoder i kemi. Strukturelle metoder og optisk spektroskopi. - M.: Højere skole, 1987.
Demtroeder V. Laserspektroskopi. - M.: Videnskab, 1985.
Zaydel A.N. Atomfluorescensanalyse. Metodens fysiske grundlag.
- M.: Videnskab, 1980.
Ionin B.I., Ershov B.A., Koltsov A.I. NMR-spektroskopi i organisk kemi. - L.: Kemi, 1983.
Kuznetsova L.A., Kuzmenko N.E., Kuzyakov Yu.Ya., Plastinin Yu.A. Sandsynligheder for optiske overgange af diatomiske molekyler. - M.: Videnskab, 1980.
Kuzyakov Yu.Ya., Semenenko K.A., Zorov N.B. Metoder til spektralanalyse.
- M.: Moscow State University Publishing House, 1990.
Peshkova V.M., Gromova M.I. Metoder til absorptionsspektroskopi i analytisk kemi. - M.: Højere skole, 1976.
Pris V. Analytisk atomabsorptionsspektroskopi. - M.: Mir, 1976.
Ultrasensitiv laserspektroskopi/Red. D. Kiger.
- M.: Mir, 1986.

Terek T., Mika J., Gegush E. Emissionsspektralanalyse. T. 1 og 2.
- M.: Mir, 1982.
Thompson M., Walsh D.N. En guide til induktivt koblet plasmaspektrometrianalyse. - M.: Nedra, 1988.
Chudinov E.G. Atomisk emissionsanalyse med induktionsplasma.//Itogi Nauki i Tekhniki. - M.: VINITI. 1990.
Kapitel 12
Polyakova A.A. Molekylær massespektral analyse af organiske forbindelser. - M.: Kemi, 1983.
Spektroskopiske metoder til bestemmelse af sporstoffer / Udg. J. Winefordner. - M.: Mir, 1979.
Sysoev A.A., Chupakhin M.S. Introduktion til massespektrometri. - M.: Atom-izdat, 1977.
449
Kapitel 13
Kuznetsov R.A. Aktiveringsanalyse. - M.: Atomizdat, 1974. Nye metoder til radioanalytisk kemi / Ed. G.N. Bilimovich og M. Kirsha. - M.: Energi, 1982.
Kapitel 14
Pavlova S.A., Zhuravleva I.V., Tolchinsky Yu.I. Termisk analyse af organiske og makromolekylære forbindelser. - M.: Kemi, 1983.
Topor N.D., Ogorodova L.P., Melchakova L.V. Termisk analyse af mineraler og uorganiske forbindelser. - M.: Moscow State University Publishing House, 1987.
Wendlandt U. Termiske analysemetoder. - M.: Mir, 1978.
Shestak Ya Teori om termisk analyse. Fysisk-kemiske egenskaber af faste uorganiske stoffer. - M.: Mir, 1987.
Kapitel 15
Barker F. Computere i analytisk kemi. - M.: Mir, 1987.
Johnson K.D. Numeriske metoder i kemi. - M.: Mir, 1983.
Jure P., Eienauer T. Mønstergenkendelse i kemi: - M.: Mir, 1977.
Matematiske metoder og computere i analytisk kemi/Red. L.A. Gribova. - M.: Videnskab, 1989.
Lær G. Personlige computere for videnskabsmænd. - M.: Mir, 1990.
Forsyth D., Malcolm M., Mowler K. Maskinmetoder til matematiske beregninger. - M.: Mir, 1980.